珠蛋白 mRNA 消耗探针（人类） 旨在去除人类珠蛋白mRNA。它可以有效去除成人、婴儿和胚胎中的珠蛋白mRNA网卡 来源，包括 HBA1/2、HBB、HBD、HBM、HBG1/2、HBE1、HBQ1 和 HBZ。本产品与 Hieff NGS 配合使用^商标 MaxUp rRNA 耗竭试剂盒（人/小鼠/大鼠）（Yeasen#12253)可有效去除总RNA中的rRNA和Globin mRNA，本试剂盒适用于完整RNA样本和降解RNA样本，去除rRNA和Globin mRNA后的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA的高通量测序分析，显著提高测序结果中有效数据的比例，以及cDNA合成或其他下游应用。

产品应用

适用于100 ng~1 μg人类总RNA样本， 小鼠和大鼠血液资源，以及完整或部分降解的 RNA 样本。

产品组件

运输和储存

所有组件均采用干冰运输，可在-20°C 下保存一年。

数字

分别对500ng和100ng人血总RNA进行rRNA去除和rRNA&Globin联合去除，建库测序后对比Globin mRNA含量。

注意事项

1. 请使用不含RNase污染的耗材，并定期清洁实验区域。建议使用ThermoFisher的RNAZap^商标 高效核酸去除喷雾，去除RNase污染。

2. RNA 样本应不含基因组 DNA 污染。如果样本中残留有 gDNA，应使用 DNase I 消化并纯化后再使用。

3. RNA样本最大输入量为10μL，若样本量较大，可先进行浓缩。

4. 为了您的安全和健康，操作时请穿着工作服和戴一次性手套。

5. 仅供研究使用！

指示

1. 探针与 RNA 杂交

1.1 将 10 ng–1 μg 总 RNA 用无核酸酶水稀释至 PCR 管中的最终体积为 10 μL。将 RNA 在冰上。

1.2 集合 以下RNA/探针杂交反应 在冰上 根据表1。

表1 RNA/探针杂交反应

1.3 轻轻上下吹打至少 10 次，充分混合。将管子放入微量离心机短暂旋转，收集管子侧面的液体。

1.4 将管放入热循环仪中并运行表 2 中的以下程序，将加热盖设置为 105°C。

表2 RNA/探针杂交反应程序

2. RNase H 消化

2.1 组装以下 RNase H 消化反应 在冰上 根据表3。

表3 RNase H消化反应

2.2 轻轻上下吹打至少 10 次，充分混合。将管子放入微量离心机中短暂旋转，收集管子侧面的液体。

2.3 将管放入热循环仪中并运行以下程序： 盖子50°C； 37℃，30分钟； 4°C，保持。

3. 脱氧核糖核酸酶 我 消化

3.1 根据表4在冰上配制以下DNase I消化反应。

表4 DNase Ⅰ酶切反应

3.2 轻轻上下吹打至少 10 次，充分混合。将管子放入微量离心机短暂旋转，收集管子侧面的液体。

3.3 将管放入热循环仪中并运行以下程序： 关闭盖子； 37℃，30分钟； 4°C，保持。

4. RNA 纯化

4.1 平衡 Hieff NGS^商标将 RNA 清洁剂（Cat#12602）恢复至室温，并在使用前通过涡旋彻底重新悬浮珠子。

4.2 添加 110 µL（2.2×） 将珠子加入步骤 3.3 中的 RNA 溶液中，通过上下移液至少 10 次彻底混合。

4.3 室温下孵育 5 分钟，使 RNA 与珠子结合。

4.4 将管放在磁力架上，将磁珠与上清液分离。 当溶液澄清（约 3 分钟）时，弃去上清液。注意不要让移液器吸头接触珠子。

4.5 将管放在磁力架上。 将 200 µL 新鲜配制的 80% 乙醇加入管中。室温下孵育 30 秒，然后弃去上清液。注意不要让移液器吸头碰到珠子。

4.6 重复步骤 4.5 一次，总共清洗两次。

4.7 用 10 µL 去除残留乙醇 - 移液器吸头。 将管子放在磁力架上，打开盖子，让珠子风干长达 5 分钟。

4.8 从磁力架上取下试管。加入 11 μL 无核酸酶水，将 RNA 从磁珠上洗脱下来。上下移液至少 10 次，充分混合，然后短暂旋转试管。

4.9 室温下孵育 5 分钟。将管放在磁力架上直至溶液澄清（约 3 分钟）。

4.10 将10 μL上清液转移到无核酸酶管中。

注意：如果需要在此时停止，样品可以储存在–80°C 下。