描述
希夫™ Versatility T4 DNA Ligase 是 T4 DNA Ligase 的变体。该酶适用于催化粘性或平端分子之间的连接反应。它是一种单酶产品，设计用于在下一代测序 (NGS) 的文库制备过程中连接 DNA 片段和接头。Hieff® 多功能 T4 DNA 连接酶已通过高通量测序得到广泛验证，并表现出卓越的品质。
特征
- 高保真
- 耐热
规格
| 来源 | 重组大肠杆菌 |
| 存储缓冲区 | 50 毫米 Tris-HC1,100 毫摩尔KC1,0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH 7.5士0.2 @25℃ |
| 单位定义 | 在20 μL连接反应体系中，6 μgλDNA-Hind III于16℃反应30分钟，能催化50%以上DNA片段连接所需的酶量定义为1个酶活单位（U）。 |
成分
| 成分 | 姓名 | 12996ES60 6万 | 12996ES62 600千焦 |
| 12996-A | 希夫 多功能 T4 DNA 连接酶 (600 U/µL) | 100 μL | 1000 μL |
| 12996-B | 10×T4 DNA连接酶缓冲液 | 500 μL | 3×1500μL |
贮存
本产品应在-25~-15℃下保存2 年。
数字
请留言询问该酶与其他顶级耐热和常规T4 DNA连接酶的性能比较数据。
笔记
1. 请穿着工作服和一次性手套进行操作，为了您的安全。
2. 若缓冲液中出现少量沉淀，属于正常现象，使用前请将缓冲液倒置并充分混匀。
3. 本产品仅供研究使用。
协议
1. 目前主流的基于连接法的DNA文库制备试剂盒，在末端修复和A-tailing后，一般不需要纯化步骤，DNA片段无需纯化，直接进行接头连接，本试剂盒兼容主流 市售末端修复和A尾系统，用于无缝适配器连接。
在冰上的微量离心管中设置以下反应，通过移液或振摇轻轻混合，短暂离心并在 20°C 下加热灭活 15 分钟。
表 1. 接头连接反应体系
| 成分 | 体积（微升） | 最终浓度 |
| dA尾DNA | 60 | 1× |
| 10×T4 DNA连接酶缓冲液 | 10 | 0.1 μM-0。5 μM |
| 50% 聚乙二醇6000 | 12* | 1 纳克 -400 纳克 |
| DNA 适配器 | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| 无核酸酶水 | 向上 至 100 | - |
【笔记】*套件中不提供 50% PEG6000 溶液，您需要自行准备
**请参阅表格 2 对于 适配器的数量。
***T4 DNA Ligase的量可根据需要添加3-5 μL。
2. 接头的浓度直接影响连接效率和文库产量。过量使用接头可能会导致 在 接头二聚体数量较多，但利用率低可能会影响连接效率和文库产量。表 2 列出了针对不同输入 DNA 量的推荐接头数量。
表 2. 100 pg-1 μg 输入 DNA 的推荐接头用量
| 输入DNA | 专注 |
| 0.1 鄰 | |
| 1 纳克 | 0.5 μM |
| 10 纳克 | 1 μM |
| 25 纳克 | 2 μM |
| 100 ng~1000 ng | 10 μM |
【笔记】：适配器数量 可按上表要求进行调整。
付款和安全
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常问问题
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