描述
希菲尔™ V 多重一步法 RT-qPCR 探针试剂盒 (联合发展集团 加）是一款以RNA为模板的多重定量PCR试剂盒，实验过程中，逆转录和定量PCR在同一管内进行，简化了实验操作，降低了污染风险。
本试剂盒采用耐热Hifair高效合成第一链cDNA商标 V 逆转录酶和 UNICON 定量扩增商标 HotStart Taq DNA 聚合酶。该试剂盒主要含有优化的 MP 缓冲液、酶混合物等。缓冲液中已含有 Mg2+ 及dNTP，同时添加了能有效抑制非特异性PCR扩增、提高多次qPCR反应扩增效率的因子，在保证扩增效率的同时，可进行多达多次的扩增反应；添加了dUTP/UDG系统，有效防止气溶胶污染风险。
特征
高灵敏度：精心优化的缓冲系统将低浓度模板的检测灵敏度提高至250拷贝/毫升；
超强稳定性：产品经过18个月实时稳定性测试。
dUP/UDG 防污染系统：引入dUTP/UDG防污染系统，有效降低产品气溶胶污染，降低假阳性，确保结果真实；
支持快速程序：兼容快速程序，40min可出结果；
成分
| 部件编号 | 姓名 | 十三650ES50 （50 頁面） | 十三650ES60 (100 頁面） | 十三650ES80 (1,000 頁面） | 十三650ES92 （10,000 頁面） |
| 13650-A | 2×海菲尔商标 VMP 缓冲区 | 750 微升 | 1.5 毫升 | 15 毫升 | 150 毫升 |
| 13650-B | 海法商标 V 酵素混合物 | 60 μL | 120 微升 | 1.2 毫升 | 12 毫升 |
笔记： 1） 2×海菲尔商标 VMP 缓冲区 是 海法商标 V 多重一步法 RT-qPCR 探针缓冲液， 包括 dNTP、dUTP、Mg2+、稳定剂、增强剂等等。
2）Hifair商标 V 酵素混合物 主要包含 耐热 Hifair商标 V 逆转录酶，UNICON商标 HotStart Taq DNA 聚合酶和 UDGase。
贮存
电视他 产品 应该 是 存储 在 -25℃~-15℃ 为了 18个月。
指示
反应组成
| 成分 | 体积 （μL) | 最终浓度 |
| 2×海菲尔商标 VMP 缓冲区 | 15 | 1× |
| 海法商标 V 酵素混合物 | 1.2 | - |
| 底漆 / 探测 混合 （2.5 μM) | 3 | 0.25 μM |
| 模板RNA | 1-10 | - |
| RNase 自由 H2哦 | 至 30 | - |
笔记：使用前务必摇匀，避免剧烈震动造成过多气泡。
a) 底漆/探测 专注： 底漆 混合物包括多重引物， 根据情况，最佳引物浓度可能在0.1至1.0μM之间。探针混合物包括标记不同荧光基团的多重探针，根据情况最佳探针浓度可能在0.05和0.07之间。5 μM。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度较高，建议稀释模板，对照Ct值在20~35之间比较合适。
d) 系统准备：卸下带滤芯的头部。避免交叉污染和气溶胶污染。
优化循环方案
|
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环 |
| 1 | 逆转录 | 50 摄氏度一个 | 10 分钟 | 1 |
| 2 | 初始变性 | 95°C | 5 分钟 | 1 |
| 3 | 扩增反应 | 95°C |
| 45 个循环 |
| 60°Cb | 30 秒丙 |
笔记：a) R反向转录： 温度可选择42摄氏度 或 50摄氏度 10-15分钟。
b) 扩增反应：根据设计引物的Tm值调节温度。
c) 荧光信号采集：请按照仪器说明书的要求设置实验流程。
3. 应用 设备
配备 Rox 的设备：ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT 快速、StepOne™、StepOne Plus™
低 Rox 设备：ABI 7500、7500 Fast、ViiA™7、QuantStudio™ 3 和 5、QuantStudio™ 6、7、12k Flex
Stratagene MX3000P™、MX3005P™、MX4000P™
不含 Rox 的设备：
比奥拉d CFX96™、CFX384™、iCycler iQ™、iQ™5、MyiQ™、MiniOpticon™、Opticon®、Opticon® 2、Chromo4™
艾本德 Mastercycler® ep realplex、realplex 2 s； Qigen Corbett Rotor-Gene® Q、Rotor-Gene® 3000、Rotor-Gene® 6000
罗氏应用科学 LightCycler® 480、LightCycler® 2.0、Lightcycler® 96
热 科学的 PikoReal 循环仪； 造父变星 SmartCycler®； 伊路明纳 生态定量PCR
笔记
请穿戴必要的个人防护装备，例如实验服和手套，以确保您的健康和安全！
请使用不含RNase的耗材 为了 实验。
敏感性测试
将-20℃保存18个月的13650（实验组）与保质期内的13650同时进行梯度稀释（500拷贝/ml、250拷贝/ml）SARS-CoV-2假病毒ORF基因和N基因检测，每个浓度设8个复孔，检出率为100%，扩增曲线峰形和Ct值均无明显差异。
| 很多 | FAM（阳性数） | VIC（阳性数） | ||
| 250份/毫升 | 500份/毫升 | 250份/毫升 | 500份/毫升 | |
| 实验组 | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| 对照组 | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
实时稳定性测试
13650在-20℃下保存18个月及在保质期内的，两组均同时检测SARS-CoV-2假病毒ORF基因和N基因，浓度均为1000拷贝/ml，20个重复孔，检出率均为100%，扩增曲线形状和Ct值均无明显差异。
图 1. R编辑： 13650 在保质期内；蓝色的：13650 储存于-20°C 下 18 个月。
经过多次冻融循环后性能稳定
将13650试剂与-20℃常温保存的试剂一起，用干冰进行30次和50次冻融循环，同时进行SARS-CoV-2假病毒ORF基因检测，结果表明，经过50次冻融循环后，13650试剂的性能不受影响。
图2.红色：13650正常储存于-20°C； 紫色的：13650 至 30 次冻融循环；绿色的：13650至50次冻融循环。
兼容标准和快速协议
使用13650ES在同一反应体系下分别以标准和快速两种方案检测SARS-CoV-2假病毒ORF基因和N基因，结果显示，在4重体系下，两种方案的扩增曲线峰形和Ct值无差异。
文件：
付款和安全
您的付款信息已安全处理。我们无法存储信用卡详细信息，也无法访问您的信用卡信息。
询问
你也可能喜欢
常问问题
The product is for research purposes only and is not intended for therapeutic or diagnostic use in humans or animals. Products and content are protected by patents, trademarks, and copyrights owned by Yeasen Biotechnology. Trademark symbols indicate the country of origin, not necessarily registration in all regions.
Certain applications may require additional third-party intellectual property rights.
Yeasen is dedicated to ethical science, believing our research should address critical questions while ensuring safety and ethical standards.