描述
Hifair™ 超级逆转录酶是新一代逆转录酶， 哪个 是 en经过工程设计 来自 M-MLV。该酶缺乏 RNase H 活性，热稳定性显著提高，可耐受高达 70°C 的反应温度。它非常适合具有复杂二级结构的 RNA 模板的高效逆转录。
应用
本产品适用于RT-PCR、RT-qPCR、RT-LAMP、RNA-seq、cDNA合成实验，逆转录反应温度最高可达70℃。
单位定义
一个酶活力单位（U）定义为以Poly(A).Oligo(dT)为模板引物，在37°C下，10分钟内将1 nmol dTTP 掺入酸不溶性物质中所需的酶量。
成分
| 成分 | 姓名 | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | 希菲尔™ 超级逆转录酶（200 U/μL） | 50 μL | 250 微升 |
储存条件
储存温度为 -25˚C 至 -15˚C，最长可保存 18 个月。
使用说明
第一链 cDNA 合成步骤
1. RNA 变性（可选步骤）
1. RNA变性有助于打开二级结构，显著提高第一链cDNA的产量。
| 成分 | 体积 |
| 无RNase的ddH2O | 至 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) 或随机引物 (50 μM) 或基因特异性引物 (2 μM) | 1 微升 |
| 模板RNA | 总 RNA：10 pg - 5 μg 或 mRNA：10 pg - 500 ng |
· 在 65°C 下加热 5 分钟，然后在冰上快速冷却 2 分钟。
· 短暂离心收集反应液，然后按下图添加逆转录反应混合物。
2. 逆转录反应设置（20 μL 系统）
| 成分 | 体积 |
| 上一步的反应混合物 | 13 微升 |
| 5×反应缓冲液 | 4 微升 |
| dNTP 混合物 (10 mM) | 1 微升 |
| Hifair® 超级逆转录酶 (200 U/μL) | 1 微升 |
| RNase 抑制剂 (40 U/μL) | 1 微升 |
3. 逆转录程序设置
| 温度 | 时间 |
| 25°C* | 5 分钟 |
| 50-70℃ | 15-30分钟 |
| 85°C** | 5 分钟 |
*使用随机引物时，25°C 孵育 5 分钟。如果使用 Oligo(dT)18 或基因特异性引物，可省略此步骤。
85°C加热5分钟可使逆转录酶失活，可根据需要进行调整。
逆转录产物可立即用于后续的PCR或qPCR反应，在-20°C下短期保存，或在分装后在-80°C下长期保存以避免冻融循环。
防范措施
1. 保持实验室环境清洁，佩戴干净的手套和口罩。确保所有实验耗材均不含RNase，以防止污染。
2. 所有操作均在冰上进行，以防止 RNA 降解。
3. 使用高质量的RNA样本，保证高效的逆转录。
4. 本产品仅供研究使用。
5. 为了您的安全和健康，处理产品时请穿上实验服和一次性手套。
文件：
付款和安全
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常问问题
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