Taq DNA聚合酶的非特异性扩增是PCR实验中常见的问题，直接影响检测结果的判读，导致扩增灵敏度下降，甚至降低目标片段的产量。利用酶修饰剂室温封闭Taq DNA聚合酶的活性中心，从而抑制Taq酶的室温DNA聚合酶活性，是目前抑制非特异性扩增最有效的方法。易生研发的双封闭抗体不仅封闭了Taq DNA聚合酶的聚合酶活性，同时封闭了Taq DNA聚合酶的核酸外切酶活性，双重封闭既能有效防止因错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，也能防止因材料降解而产生非特异性信号，使试剂的特异性成倍增强，使检测试剂能够轻松应对运输或室温使用。

1.超高扩增特异性——双封闭抗体可同时封闭聚合酶和核酸外切酶活性，有效避免非特异性扩增并提高特异性。

2.卓越的检测灵敏度——热启动配方可确保有效检测低丰度基因，提供更高的灵敏度。

3.卓越的产品稳定性——在37°C下放置5天或4°C下放置10天时性能稳定。

4.基线稳定性和良好的线性——解决基线漂移问题，实现优异的线性。

5.酶活性释放迅速——95°C加热20秒即可释放95%以上的酶活性。

6.酶适用性广——适用于野生型和突变型Taq酶，每mg抗体可封闭4-10KU的Taq酶。

1 阻断 Taq DNA 聚合酶外切酶活性

将合成的引物探针分别加入到未封闭和双封闭抗体封闭的Taq DNA聚合酶反应混合物中，于40℃进行反应，检测两者的荧光信号，发现双封闭抗体可以有效封闭Taq DNA聚合酶的核酸外切酶活性。

图2.双封闭抗体-内切酶活性封闭效率检测。

02 检测灵敏度验证

分别使用 Yeasen采用双封闭抗体和T公司抗体封闭Taq酶，再通过ARMS-PCR技术对阳性样本进行检测，结果发现，封闭的Taq酶 Yeasen双封闭抗体ARMS-PCR扩增准确，灵敏度更高。

红色的：Yeasen 抗体+Taq； 蓝色：供应商A抗体+Taq。

图3. ARMS-PCR扩增曲线。

03 稳定性验证（4°C 10 天，37°C 5 天）。

用传统封闭抗体和双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶，将聚合酶配制成含有引物和探针的完全预混溶液，4℃放置10天或37℃放置1、3、5天，扩增10000拷贝的ASF质粒，观察扩增曲线和Ct值无明显变化。

图4 Taq 聚合酶经传统阻断抗体（A）和双阻断抗体（B）阻断后，10,000 拷贝 ASF 质粒的扩增曲线，经 qPCR 体系扩增。

04 基线检测

在某些条件下，当使用特定的引物配合特定的缓冲液和仪器时，可能会出现基线漂移的现象，而使用双封闭抗体可以有效解决基线漂移的问题，从而得到更稳定的基线。

图5. SARS-CoV-2 N基因（A）和ACT基因（B）在qPCR分析中的扩增曲线。

05 线性验证

用双封闭抗体封闭的反应混合物分别扩增10万、1万、1千、100个拷贝的ASFV/ACT双质粒，生成标准曲线，由图7可见，均呈现良好的线性。

图 6.使用双嵌段反应混合物生成的 ASFV 基因和 ACT 基因的标准曲线图。

06 酶活性释放试验

使用来自的双封闭抗体（Cat#31303） Yeasen 封闭Taq酶，95℃热冲击20秒后检测酶活性，可以观察到95℃热冲击20秒后31303可以释放95%以上的酶活性，与T公司抗体相当。

表 1. 酶在 95°C 下热休克 20 秒。

07 多重 Taq 聚合酶检测

Yeasen使用公司的双封闭抗体（Cat#31303）封闭三种Taq酶（野生型+两种突变型），封闭比例为1μg对5U，测定荧光值和封闭效率。结果发现，对于不同类型的Taq酶， Yeasen的双封闭抗体（Cat#31303）表现出了良好的封闭效果。

表2.不同类型Taq聚合酶的阻断效率。