规格

本产品为溶液形式，将粉末用0.9% NaCl 配制成10 mg/mL 溶液，再用0.22 μm 滤膜除菌，一般按1:1000-1:2000 比例稀释使用，具体稀释比例根据细胞类型而定，详见相关文献。

运输和储存

建议在-20 ºC 下运输和储存，保质期为 2 年。建议分装并储存，以避免反复冻融循环。

防范措施：

1. 为了安全和健康，请穿戴实验室服装和一次性手套。

2. 本产品仅供研究之用。

操作步骤

（仅供参考，具体浓度可能会有所不同，请参阅相关文献）：

注意：Polybrene对某些细胞（如终末分化神经元，DC细胞）可能表现出明显的毒性，建议在初次使用时进行毒性测试。

实验一：逆转录病毒感染

1. 重组逆转录病毒原液的制备：将含有单层转染逆转录病毒包装细胞的细胞培养于100 mm 培养皿中，加入5 mL 生长培养基（5% 血清），24 小时后吸出培养基，用0.45 μm 滤膜过滤。

2. 培养感染细胞：在 100 mm 培养皿中，加入 10 mL 完全生长培养基，细胞密度为 5×10⁵ 每道菜。

3. 病毒感染：细胞培养24小时后，弃去完全培养基，用2mL含有Polybrene（终浓度5-10μg/mL）的病毒上清液在37℃感染细胞3-6小时。

4. 收集病毒颗粒：加入8mL完全生长培养基，培养2-3天后，收集培养基，即得到病毒颗粒。

实验二：转染

1. 在完全生长培养基中培养细胞，细胞密度约为 50%。

2. 细胞培养 18-24 小时后，制备 DNA-生长培养基-Polybrene 混合物。加入完全生长培养基（60 mm 培养皿 2 mL，100 mm 培养皿 3 mL）并预热至 37°C。轻轻混合 10 ng~10 µg 质粒。 添加 Polybrene，使最终浓度达到 5-10 μg/mL。轻轻混合。应按规定顺序添加每种成分。

3. 除去培养基，将 DNA-生长培养基-Polybrene 溶液加入细胞中，37°C 培养 6-20 小时。在细胞培养的前 6 小时内，每隔 1.5 小时轻轻混合一次。

4. 除去 DNA 生长培养基-Polybrene 溶液。用 DMSO 冲击溶液（1× HBSS 中的 15% DMSO）覆盖细胞。每次加入溶液时，轻轻摇动培养皿 10 秒钟，以确保均匀分布。将细胞在 37°C 下孵育 4 分钟。

5. 立即吸去DMSO冲击液，用完全培养基轻轻清洗细胞两次，60mm培养皿每次用5mL培养基清洗，100mm培养皿每次用10mL培养基清洗。

6. 向细胞中添加完全生长培养基。

7. 蛋白质表达：培养24-72小时后，根据需要收集细胞进行蛋白质表达分析。

细胞选择：培养24-72小时后，根据细胞状态，换用新鲜选择培养基继续进行细胞选择。