线性聚乙烯亚胺 PEI 25000 转染试剂是一种高电荷阳离子聚合物，容易与带负电荷的核酸分子结合，形成复合物，并使复合物进入细胞。该转染试剂是一种瞬时转染试剂，具有细胞毒性小、转染效率高、在HEK293、CHO等细胞中基因表达效率高的特点。经验证，线性PEI转染试剂可广泛适用于多种细胞系，包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等。该试剂与含血清培养基兼容，可高效地将核酸导入细胞。

规格

运输和储存

产品常温运输，粉末2-8℃可保存两年，原液2-8℃可保存3个月。

注意事项


1）配制好的PEI溶液从-20℃取出解冻后，可以放于4℃冰箱保存，不得再次冷冻。

2）对于大多数细胞，3.0 μL PEI 转染试剂/1 μg DNA 即可达到较高的转染效率。您也可以尝试使用 1.5~4 μL 体积的线性 PEI 转染试剂/1 μg DNA 进行优化。

3）为了您的安全和健康，操作时请穿戴工作服、一次性手套和通风柜。

4）本产品仅用于科学研究目的，不得供人体使用。

储备溶液制备（1 mg/mL）


1.材料

PEI 25000、Milli-Q®水/注射用水（WFI）或同等生物级水、12 mol/L盐酸（HCl）、10 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

2. 制备储备溶液（1 mg/mL）

1) 在1 L玻璃烧杯中，将1 g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他等效生物水中，在磁力搅拌器上搅拌均匀，产生小涡流。

2)搅拌下逐滴加入盐酸（12 mol/L），调节pH值直至pH<2.0。

3) 盖上烧杯盖，搅拌3小时直至完全溶解；整个过程保持pH值<2.0。

【注意】：可能会出现一些无法溶解的细小纤维颗粒，这是正常现象。

4) 搅拌下逐滴加入NaOH（10 mol/L），调节pH值直至达到6.9~7.1。

5) 将溶液转移到量筒中，加水至1L。

6) 用一次性 0.1-0.2 µm PES 真空过滤器过滤并除菌，以获得 1 mg/mL 的储备溶液。

7) 按需要分装并保存在-20°C下，稳定保存1年。

【注意】：保存液重新解冻后，可在4℃保存，可稳定保存2周，但不得再次冷冻

转染流程（以6孔板为例）


1.细胞接种：为了提高转染效率，建议转染前一天接种细胞，转染时细胞密度最好为70%~80%。

2. 制备DNA-PEI复合物： 按照以下体系制备DNA-PEI核酸-转染试剂复合物：

1) 对于每个细胞孔，用100 μL无血清培养基稀释2 μg目标DNA，充分混合以形成DNA稀释液。

[注]：无血清稀释液建议使用Opti-MEM或ddH2O

2) 立即将5 μL PEI 25000转染试剂加入100 μL DNA稀释液中，涡旋10秒钟，混匀。

3)室温孵育10-25分钟，形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3. 转染细胞：

1) 在复合物形成期间，去除细胞生长培养基并向每个孔中添加 2 mL 新鲜的预热完全培养基。

2) 将100 μL DNA-PEI 核酸-PEI 复合物直接加入细胞中，摇晃培养板，轻轻混匀。

3） 转染后置于37°C、5% CO2培养箱中培养，最快转染7小时即可检测到转基因的表达，请自行确定合适的检测时间。

4. 稳定旋转筛选（可选）

转染24h后，将细胞传代培养至新鲜培养基（稀释细胞10倍以上），在5% CO2培养箱中37℃培养过夜。次日加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周即可筛选出抗药克隆，在此期间需经常更换含有筛选药物的培养基。

不同细胞培养容器的转染剂量（仅供参考）：