嘌呤霉素是由链霉菌发酵代谢产生的氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成杀死革兰氏阳性菌、各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素在某些情况下对大肠杆菌有效。其机制是 嘌呤霉素 是氨酰-TrNA分子3'末端的类似物，能与核糖体的A位结合，并掺入到延长的肽链中。嘌呤霉素与A位结合后，不会参与任何后续反应，导致蛋白质合成过早终止，释放出C端含有嘌呤霉素的未成熟多肽。

产嘌呤霉素细菌白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）中的 pac 基因编码嘌呤霉素 N-乙酰转移酶（PAC），该酶可赋予嘌呤霉素抗性。该特性目前常用于筛选携带 pac 基因质粒的特定哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳定菌株筛选中的一般用途与慢病毒载体的性质有关，现在大多数商品化的慢病毒载体都携带pac基因。在一些特定情况下，嘌呤霉素也可以用来筛选携带pac基因质粒的转化大肠杆菌菌株。

本品为无菌，盐酸嘌呤霉素溶于蒸馏水的溶液，浓度为10mg/mL（H₂O），可直接用培养基或其他缓冲溶液稀释，适用于细胞培养，常用工作浓度为1-10µg/mL。

此外， Yeasen 该公司还提供粉末形式的盐酸嘌呤霉素（cat# 60210ES），其状态不同，但具有相同的功能。

特征

纯度≥98％

无菌

应用

适用于细胞培养

年代携带 pac 基因质粒的 creen 特定哺乳动物稳定转染细胞株

屏幕 这 携带 pac 基因质粒的转化大肠杆菌菌株

规格

成分

运输和储存

这 页尿霉素（溶液中浓度为 10 mg/mL） 产品应储存在-15℃ 〜-25℃ 为了 1 年。

指示

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需通过杀菌曲线确定。

大肠杆菌：用LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，浓度为125 μ克/毫升。

笔记： 使用嘌呤霉素筛选稳定的大肠杆菌菌株需要精确的 pH 值调节。

建议浓度 嘌呤霉素 盐酸盐

2. 确定 嘌呤霉素 杀伤曲线（以shRNA转染或慢病毒转导为例）

有效筛选浓度 嘌呤霉素 与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢和细胞周期位置有关。筛选稳定表达shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的嘌呤霉素最低浓度是至关重要的，建议初次做实验的客户一定要建立适合自己实验体系的杀伤曲线。

1）第 1 天：24 孔板以 5 个密度接种-8×104 个细胞/孔，并铺板足够数量的孔以进行后续梯度实验。细胞在 37℃。

2）第2天：A）准备筛选培养基：含有不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15 μg/mL，至少 5 个梯度）；B) 过夜孵育后，更换细胞中新鲜配制的筛选培养基；然后将细胞在 37℃。

3）第4天：更换新鲜的选择培养基并观察细胞活力。

4) 根据细胞的生长状态，每2-3天更换一次新鲜的选择培养基。

5)每天监测细胞，观察活细胞率，以确定在抗生素筛选开始后4-6天内有效杀死未转染或所有未转染细胞的最低药物浓度。

3. 哺乳动物稳定转染细胞系的筛选

转染含有pac基因的质粒后，在含有嘌呤霉素的培养基中增殖细胞，以筛选稳定的转染子。

1) 转染48小时后，将细胞（原始或稀释的）培养在含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中。

笔记：当细胞活跃分裂时，抗生素最有效。如果细胞密度过高，抗生素的有效性将显著降低。最好将细胞接种到密度不超过 25% 的培养基中。

2) 取出并更换含有 嘌呤霉素 每2-3天。

3) 筛选后 7 天评估细胞形成的病灶。病变可能需要额外一周或更长时间，具体取决于宿主细胞系和转染筛选效率。

注：每天观察细胞生长情况，嘌呤霉素筛选至少需要48h，嘌呤霉素有效浓度的筛选期一般为3-10天。

4） 将 5-10 个抗性克隆转移并放入 35 毫米培养皿中，继续用选择培养基培养 7 天。此富集培养物是为了准备未来的细胞毒性实验。

文件：

安全数据表

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手册

60209_手册_HB250114_EN.pdf

引文及参考文献：

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