描述
G418硫酸盐又名硫酸庆大霉素，是一种氨基糖苷类抗生素，结构类似于庆大霉素B1。它通过结合80s核糖体并阻止延伸步骤来干扰蛋白质合成。G418硫酸盐对原核和真核细胞均有毒性，包括细菌、酵母、高等植物和哺乳动物细胞，以及原生动物和蠕虫。抗性基因（主要为neo）位于转座子Tn601（903）或Tn5中，来源于细菌，但可以在真核细胞中表达。可通过基因重组技术将抗性基因引入细胞，获得G418的抗性，可用于筛选和维持携带抗性基因的原核或真核细胞培养物。
在哺乳动物细胞中，neo，整合到真核基因组中后编码氨基糖苷3'-磷酸转移酶（APH(3')Ⅱ）的表达，该酶通过共价修饰G418的氨基或羟基功能，抑制抗生素与核糖体相互作用，使抗生素失活，使细胞产生G418抗性。在筛选稳定细胞株实验中，需建立杀伤曲线（剂量反应曲线），确定杀死非耐药细胞的最低有效浓度。
在植物细胞中，可通过转染nptII基因抗性质粒获得抗性。nptII基因还编码氨基糖苷磷酸转移酶，该酶可灭活多种抗生素，包括G418、卡那霉素和帕洛霉素。
特征
纯度≥98％
标准化生产，采用工厂化批量生产模式
用途广泛，可用于分子生物学、组织培养生化实验研究等领域
合作平台覆盖全
确保产品质量稳定性，批次间差异控制在1%以内
应用
稳定转染细胞系的筛选
规格
| CAS 编号 | 108321-42-2 |
| 分子式 | 碳20赫40否4哦10·2小时2所以4 |
| 分子量 | 692.7 克/摩尔 |
| 纯度 | ≥98％ |
| 效力（无水） | >700单位/毫克 |
| 外貌 | 白色或淡白色粉末 |
| 溶解度 | 溶于H2哦 |
| 结构 |
|
成分
| 部件编号 | 姓名 | 60220ES03 | 60220ES08 |
| 60220 | G418 硫酸盐（遗传霉素） | 1 克 | 5 克 |
运输和储存
这 G418 硫酸盐（遗传霉素） 产品应储存在-15℃ 〜-25℃ 为了 3 年。
指示
1. G418储存溶液的制备（50 mg/mL，有效浓度）
1）活动单位的换算
根据以下公式进行转换：（1000/A0）×A1=A2
A0：G418 的效力值，不同批次的产品效力值不同。请参阅批次质量报告或瓶子上的标签。
A1：您想要的活性 G418 浓度。
A2：G418的实际浓度。
例如：该批次的G418活性值为750U/mg，G418的有效浓度为50mg/mL，则实际需配制的粉末浓度为1000/750×50mg/mL=66.67mg/mL，若配制10mL G418储存液（有效浓度50mg/mL），则需称取666.7mg粉末。
2）灭菌保鲜
称量上述换算得到的实际粉末，加入10 mL无菌去离子水，使其完全溶解。
用 5 mL 无菌去离子水预湿润 0.22 μm 针式过滤器，然后通过过滤对 G418 溶液进行除菌。将灭菌后的G418溶液分装并保存于-20℃。
注意事项： ① 浑浊的溶液请勿过滤，因为溶液尚未完全溶解，过滤过程会造成药物损失，降低最终溶液的活性。 ② 不建议使用培养基、磷酸盐溶液或有机溶剂来配制储存液。
2. 常用筛选浓度
一般情况下，筛选转化子时需用高浓度G418，维持培养时则用低浓度。生长条件、细胞种类等环境因素均可能影响G418的有效用量，因此建议通过杀伤曲线（剂量反应曲线）来确定最佳筛选浓度。
一般哺乳动物细胞的筛选范围为200～2000 μg/mL，植物细胞：10～100 μg/mL，酵母细胞：500～1000 μg/mL。
细胞系实验数据
| 细胞类型 | 激活集中力 | 应用 | 参考 |
| 粘菌属 | a) 10 μg/毫升 b) 30 微克/毫升 | a) 培养基 b) 冻干细菌培养 | Hirth 等人， 美国国家科学院院刊， 第 79 卷，7356-7360 页 (1982 年)。 |
| 哺乳动物种类 | a)400 -1000 μg/mL b) 200 μg/毫升 | a) 用于筛选 b) 用于维护 | 迦南和伯格， 美国国家科学院院刊， 第79卷，5166-5170（1982年）。 |
| 植物 | a) 25-50 μg/mL b) 10 μg/毫升 | a) 用于筛选 b) 用于维护 | Ursic 等人， 生物化学与生物物理研究通讯， v.101:3,1031-1037（1981）。 |
| 酵母 | a) 500 μg/毫升 b) 125-200 μg/毫升 | a) 用于筛选 b) 用于维护 | 希门尼斯和戴维斯， 自然， 第287卷，869-871（1980年）。 |
| 细菌 | 16微克/毫升 | 用于筛选 | Waitz 等人， 抗微生物剂化疗， 第 6:5, 579-581 (1974)。 |
3. 杀灭曲线的建立
注：为了筛选出目的蛋白稳定表达的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的最低抗生素浓度，这可以通过建立杀伤曲线（剂量反应曲线）来实现，至少要选定6个浓度。G418在处理有丝分裂细胞时活性最高，因此需要将细胞培养一段时间后再加入G418。
1）第1天：将未转化细胞置于适当的培养板中，细胞密度为20-25％，37℃，CO培养过夜2；
注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可以增加接种量。
2）根据细胞类型在合适的范围内设置G418浓度梯度，哺乳动物细胞可设置为0、50、100、200、400、800、1000 μg/mL。
3)第2天：弃去旧培养基，换上新鲜配制的相应药物浓度的培养基，每个浓度做3个平行实验。
4)然后每3-4天更换一次含有G418的新鲜培养基。
5）以固定周期（如每2天）进行活细胞计数，确定合适的浓度，选择在理想天数内（一般为7-10天）能杀死大部分细胞的最低浓度作为稳定转染细胞筛选的工作浓度。
4. 稳定转染细胞的筛选
1） 转染48 h后,采用含有适当浓度的G418培养基进行传代培养(直接传代或稀释传代)。
注意：为了获得良好的筛选结果，建议稀释细胞的丰度不超过25％。
2）每3-4天更换一次含有药物的筛选培养基。
3) 筛选7天后测量细胞集落形成情况。集落形成可能还需要一周或更长时间，具体取决于宿主细胞类型、转染和筛选效果。
4)挑选5-10个抗性克隆，转移至35mm细胞培养板中，用含药筛选培养基培养7天。
5）更换为正常培养基。
文件：
安全数据表
手册
数字
图1。不同批次间基因霉素稳定性试验及有效浓度验证
实验菌株：大肠杆菌
G69和G99是两个不同的批次
确定基因霉素的使用浓度分别为8mg/L、12mg/L、16mg/L，确定有效最低浓度为16mg/L，可以完美抑制杂菌生长，两批次产品性能一致。
付款和安全
您的付款信息已安全处理。我们无法存储信用卡详细信息，也无法访问您的信用卡信息。
询问
你也可能喜欢
常问问题
The product is for research purposes only and is not intended for therapeutic or diagnostic use in humans or animals. Products and content are protected by patents, trademarks, and copyrights owned by Yeasen Biotechnology. Trademark symbols indicate the country of origin, not necessarily registration in all regions.
Certain applications may require additional third-party intellectual property rights.
Yeasen is dedicated to ethical science, believing our research should address critical questions while ensuring safety and ethical standards.