潮霉素B是由吸水链霉菌合成的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位，诱导mRNA模板错读，抑制蛋白质合成，从而杀死原核生物（如细菌）、真核生物（如酵母、真菌）及高等哺乳动物真核生物。

大肠杆菌中产生的潮霉素抗性基因（hyg或hph）编码潮霉素B磷酸转移酶，该酶能将潮霉素B解毒为无生物活性的磷酸化产物，使其成为筛选和培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或真核细胞的极佳选择标记。此外，由于作用方式不同，潮霉素B常与G418或杀稻瘟菌素S联合使用，以筛选双抗细胞株。潮霉素B还可用作抗病毒剂，因为它能选择性地渗透到因病毒感染而膜通透性增加的细胞中并抑制翻译。它还可以通过与动物饲料混合用作驱虫剂。

本产品为无菌潮霉素B溶液（PBS缓冲液中50mg/mL），可直接与培养基稀释使用。

特征

标准化生产，采用工厂化批量生产模式

应用

无菌

稳定转染细胞系的筛选

规格

成分

运输和储存

这 潮霉素 B（50 毫克/毫升） 产品应储存在 2℃ ~ 8℃ 为了 2 年。

指示

1. 常用筛选浓度

筛选稳定转移菌株的潮霉素B的工作浓度需要根据细胞类型、培养基、生长条件和细胞代谢率而变化，建议浓度为50-1000 μg/mL。对于第一个实验体系，建议采用杀灭曲线，即剂量反应曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞：50-500 μg/mL；细菌/植物细胞：20-200 μg/mL; 真菌：300-1000 μ克/毫升。

2. 杀灭曲线的建立

注：为了筛选稳定细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素的最低浓度。这可以通过建立杀伤曲线（剂量反应曲线）来实现。至少应安排5个浓度。

1)第1天：将未转化细胞以20-25％的细胞密度铺板于合适的培养板中，培养过夜。

注：对于需要更高密度检测活力的细胞，可以增加接种细胞的数量。

2） 根据细胞类型在适当的范围内设置浓度梯度。哺乳动物细胞可以设置50、100、250、500、750、1000 μg/mL，用去离子水或PBS缓冲液按1:10稀释潮霉素B溶液至5mg/mL，然后按下表稀释至相应工作浓度。

3)第2天：更换新鲜配制的相应药物浓度的培养基，每个浓度做3个平行样。

4)然后每3-4天更换一次含有药物的新鲜培养基。

5）每隔一定时间（如每2天）进行一次活细胞计数，确定抑制未转染细胞生长的合适浓度。选择在理想天数内（一般7-10天）能杀死绝大多数细胞的最低浓度作为稳定转染子筛选的工作浓度。

3. 哺乳动物稳定转染细胞系的筛选

1)转染48h后，用含有适当浓度（直接或稀释）潮霉素B的筛选培养基进行传代培养。

注意：抗生素对活跃分裂的细胞最有效。如果细胞太密集，抗生素不会杀死细胞。分裂细胞时，细胞融合度不得超过 25%。

2）每3-4天更换一次筛选培养基。

3) 筛选7天后测量细胞集落形成情况。集落形成可能还需要一周或更长时间，具体取决于宿主细胞类型、转染和筛选效果。

4)挑取5-10个抗性克隆，转移至35mm细胞培养板中，用含药筛选培养基培养7天。

5）更换新鲜且不含药物的培养基进行培养。

文件：

安全数据表

60224_MSDS_HB220420_EN.pdf

手册

60224_手册_HB250115_EN.pdf