描述
金黄色葡萄球菌素A，又称AbA、巴西芬净、布雷霉素A，是从丝状真菌出芽短梗霉R106号中分离得到的环酯肽类抗生素，具有较强的抗真菌能力，是肌醇磷酸化神经酰胺合酶AUR1的抑制剂，即使在较低浓度（0.1-0.5μg/mL）下也对酵母有毒性。对其敏感的真菌种类包括酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑假丝酵母（Candida glabrata）、构巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。其作用机制为：Aureobasidin A抑制真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺（inositolphospylceramide，IPC）合酶活性，干扰鞘脂的合成，从而进一步杀死菌株。目前已研究了更多的编码IPC合酶的基因，如来自酿酒酵母的AUR 1基因和来自A. sinensis的AURA基因，二者具有同源性。突变这些编码基因可使菌株对金黄色葡萄球菌素A产生抗性，如AUR 1-C基因。
金黄色葡萄球菌素 A 非常适合作为筛选阳性克隆的药物选择标记。金黄色葡萄球菌素 A 抗性也是酵母单杂交和双杂交研究中的理想报告基因。本产品是金黄色葡萄球菌素 A 溶于甲醇的溶液，浓度为 1 mg/mL。
特征
纯度≥97％
标准化生产，采用工厂化批量生产模式
应用
酵母双杂交研究
酵母单杂交研究
严格的酵母药物选择标记
金黄色葡萄球菌素 A 抗性是酵母杂交研究的理想报告基因
规格
| CAS 编号 | 127785-64-2 |
| 分子式 | 碳60赫92否8哦11 |
| 分子量 | 1101.42 克/摩尔 |
| 外貌 | 液体溶液 |
| 纯度 | ≥97％ |
| 溶解度 | 该粉末可溶于DMSO和甲醇（0.5-10 mg/mL）；不溶于水 |
| 结构 |
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成分
| 部件编号 | 姓名 | 60231ES03 | 60231ES08 | 60231ES10 |
| 60231 | 金黄色葡萄球菌素A（抗体） | 1毫克（1毫克/毫升） | 5×1毫克（1毫克/毫升） | 10×1毫克（1毫克/毫升） |
运输和储存
这 金黄色葡萄球菌素A（抗体） 产品应储存在 -15℃ ~ -25℃ 为了 2 年。
指示
1. 工作浓度
具体浓度请参考相关文献，并根据自身实验情况（如实验目的、细胞种类、培养特点等）进行探索和优化。
2. 细胞实验（体外实验）
金黄色葡萄球菌素 A 通过神经酰胺中毒和必需肌醇磷酸神经酰胺的缺乏来抑制酵母细胞的生长[1]。
合成了每个 CArG-box 基序的三重串联重复序列。使用合适的限制位点将所有 DNA 片段克隆到 Y1H 载体 pAbAi（Clontech，Mountain View，美国）中。然后，根据酵母转化系统 2 手册（Clontech，Mountain View，美国），用 BstbI 线性化每个组装的 pAbAi 构建体，并转化到酿酒酵母 Y1HGold 菌株中（Clontech，Mountain View，美国）。在补充有浓度为 100 的 Aureobasidin A 的合成尿嘧啶缺失培养基上筛选携带所需 DNA 片段的克隆以进行自激活–900 ng/mL，如图所示（Clontech，山景城，美国）[2]。
扩增SlBES1基因的开放阅读框（ORF），并将其连接到pGBKT7-GAL4BD质粒中。将融合的GAL4BD-SlBES1构建体进一步转化到Y2H Gold酵母细胞中。SD/−使用色氨酸培养基平板培养酵母转化子。这 α转化子的半乳糖苷酶活性通过 X-α-gal，并通过 Aureobasidin A 筛选 AUR1-C 的表达[3]。
3. 金黄色葡萄球菌素对各种酵母的最低抑菌浓度
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| 拉紧 | 最低抑菌浓度 (µg/毫升) |
| 酿酒酵母 | ATCC9763（二倍体） | 0.2-0.4 |
| SH3328（单倍体） | 0.1 | |
| 清酒酵母（二倍体） | 0.1-0.2 | |
| 烧酒酵母（二倍体） | 0.1 | |
| 啤酒酵母（三倍体或四倍体） | 0.1 | |
| 贝克‘酵母（二倍体） | 0.2-0.4 | |
| 裂殖酵母 | JY-745（单倍体） | 0.1 |
| 白色念珠菌 | TIMM-0136（二倍体） | 0.04 |
| 热带栲木是 | TIMM-0324（二倍体） | 0.08 |
4. 操作步骤（针对抗AbA的酵母转化系统）
1） 将 0.5 mL 过夜酵母培养物加入 50 mL YPD 培养基（成分：1 L 液体培养基含 10 g 酵母提取物、20 g 聚蛋白胨、20 g D-葡萄糖；对于固体培养基，再添加 2% 琼脂）。
2） 30 度孵化℃ 约6小时，直至OD660为1-2。当使用二倍体时，测量OD660为2-4。
3） 1000 度离心×g 持续 5 分钟。
4） 将沉淀物悬浮于 10 mL 溶液 A（成分：100 mM 醋酸锂、10 mM Tris-HCl pH 7.5、1 mM EDTA）中，然后以 1,000×g 持续 5 分钟。
5） 埃将沉淀物悬浮在溶液 A 中，直至 OD660 为 150。
6） 将 100 µL 细胞悬浮液分装到试管中，在 30℃ 1小时。
7） 加入 5 µg 载体（环状或线性 DNA）和 150 µg 载体 DNA（已在 100℃ 10 分钟，然后快速冷却）。
注意：pAUR101需要线性DNA进行转化，使用环状DNA会降低转化效率，甚至可能失败。pAUR112和pAUR123需要完整的质粒DNA进行转化。
8） 加入 850 µL 溶液 B（成分：将 40 g 聚乙二醇 4000 溶解于 100 mL 溶液 A 中并充分混合，使用前新鲜配制），轻轻混匀。
9） 30 度孵化℃ 30 分钟，然后 42℃ 15分钟。
10） 在室温下放置 10 分钟。
11） 以 5,000 rpm 的速度离心 1 分钟，然后将沉淀物重新悬浮在 5 mL YPD 培养基中。
12） 30 度孵化℃ 6 小时至过夜。
13） 以 5,000-10,000 rpm 的速度离心，并将沉淀物重新悬浮在 1-10 mL 0.9% NaCl 中。
14） 将 100 μL 细胞悬浮液接种到 YPD 选择性培养基板（含有一定浓度的 AbA，具体取决于菌株类型）。30 度孵化℃ 持续3至4天，直至转变完成。
15） 挑选阳性转化子，和/或确定转化效率（以每微克质粒 DNA 转化的菌落数表示）。
文件：
安全数据表
手册
数字
图1。 酵母平板生长图
实验菌株：GS115
使用量： 0.05微克/毫升、0.1微克/毫升、0.5微克/毫升、1微克/毫升
治疗： 3-5 天3 点0℃
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