操作環境中的氣溶膠污染是造成PCR結果假陽性的最常見原因:美國科學家林達爾在大腸桿菌和枯草芽孢桿菌中開創性地發現尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG),並通過使用帶有dUTP的UDG酶建立了PCR污染預防系統。
目前商業化的UDG酶主要有兩種類型:來自大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的常規UDG酶和來自嗜冷海洋細菌的耐熱UDG酶。常規UDG酶具有較高的耐熱性,即使在95°C處理10分鐘後仍保留少量尿嘧啶-DNA糖基化酶活性,這可能導致含有dU的目標擴增產物的降解。另外,由於採用工程菌株(如大腸桿菌)進行分子酵素的重組表達,這些酵素中存在一定量殘留的宿主基因組DNA。再加上製造環境和人為因素的影響,分子酵素產品極易受到DNA污染。在病原體檢測過程中,污染 DNA 可能會掩蓋低豐度目標核酸或與它們一起被檢測到,從而影響結果的解釋。
Yeasen UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),不耐熱
描述
UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),熱不穩定,1 U/μL(Cat#14466ES) 它源自於嗜冷海洋細菌,是一種超低殘留熱不穩定 UDG 酶,稱為 UCF.ME。使用本產品可避免常規UDG酶失活後殘留的活性在室溫下降解含dU的擴增產物。它還可以防止分子酵素中存在的背景細菌導致 PCR 結果出現假陽性。因此,UCF.ME®超低殘留不耐熱UDG酶的引入,對於準確識別感染性病原體、輔助感染及傳染病的臨床診斷至關重要。
產品優勢
- UCF.ME—E 超低殘留。大腸桿菌基因組DNA殘留<0.1拷貝/U;
- 低核酸酶殘留-無殘留的外切酶、切口酶或 RNase;
- 酶切能力強-0.05 U/T可消化105拷貝/T dU-DNA產物;
- 熱不穩定性好-50℃ 10分鐘、55℃ 5分鐘、95℃ 5分鐘任意條件下均能完全失活;
- 相容於RT-qPCR反應體系-即使在高輸入水準(2U/20μL反應系統)下也不會對偵測系統產生影響。
(1)蛋白質純度≥95%

數位 1. 蛋白質純度(SDS-PAGE)檢測結果
(2)低殘留核酸酶:無殘留外切酶、切口酶或核糖核酸酶
數位 2. 核酸酶殘留檢測結果
(3)E.大腸桿菌基因組DNA殘留<0.1拷貝/U,殘留量明顯低於常規試劑
數位 3. 大腸桿菌基因組DNA殘留檢測結果

數位 4. 總計0.05 U的UDG酶可完全消化10^5拷貝/T的dU-DNA產物。

圖 5. 經50℃,10min;55℃,5min;55℃,10min;95℃,5min熱失活處理,14466ES喪失消化能力。

圖 6. 使用 ORF1ab 和 N 基因的兩個引發探針以及 14466ES 製備 RT-qPCR 混合物。 14466ES以2U/20μL的量注入反應體系時,對RT-qPCR無抑制 反應。
產品推薦—超低殘留PCR酶原料系列
產品定位 | 產品名稱 | 貓 |
預防熱不穩定 UDG 污染 | UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),熱不穩定,1 U/μL | 14466ES |
熱啟動 Taq DNA 聚合酶 | Hieff UCF.ME 熱啟動敏感 Taq DNA 聚合酶 (5 U/μL) | 14314ES |
逆轉錄酶 | Hifair UCF.ME V 反轉錄酶 (200 U/μL) | 14608ES |
小鼠 RNase 抑制劑 | 14672ES |