—點亮你的印跡膜，就在你的指尖！
ECL試劑，即辣根過氧化物酶（HRP）的化學發光底物，是目前Western印跡檢測中最靈敏的試劑。市面上ECL試劑常見的問題包括淬滅、背景高、不穩定、難以檢測低豐度蛋白質等，這些都會影響最終的實驗結果。
產品特性
- 超強靈敏度 — 檢測從皮克到低飛克等級的抗原。
- 更高的信噪比 — 精確的發光基板可降低背景雜訊。
- 抗體效率更高 — 優化底物系統以獲得更高的抗體結合親和力。
- 高性價比 — 更低的價格，更高的性能。
- 卓越的穩定性 — 新的氧化劑確保在4°C下穩定儲存長達一年。
產品原理
ECL試劑檢測的核心原理是氧化反應發光：發光底物的主要成分魯米諾在鹼性條件下透過辣根過氧化物酶（HRP）的催化被H2O2氧化，生成激發態中間體3-氨基鄰苯二甲酸。當它回到基態時，就會發射光子，最大發射波長為425nm。這些光子訊號可以被X光膠片或CCD成像設備捕捉。
選擇指南
那麼，您應該選擇哪一種產品進行實驗呢？
表 1.ECL 試劑選擇指南
| | 增強型 ECL 增強型 | 超級ECL 超敏感型 | 超耐久 耐用型 | 最大訊號 超高靈敏度型 |
| 適用樣品 | 以高豐度常規蛋白質樣本為目標 | 目標豐度低，樣本有限 | 目標豐度低，樣本有限 | 目標物豐度極低，樣品珍貴 |
| 檢測靈敏度 | 中皮克級 | 低皮克級 | 中飛克級 | 低飛克水平 |
| 訊號持續時間 | < 2 小時 | < 12 小時 | < 24 小時 | < 8 小時 |
| 適用檢測系統 | 所有試劑均適用於X光膠片、CCD成像裝置 | |||
| 一抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
| 二抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000
| 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
| 推薦膜 | CNC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
| 儲存穩定性 | 室溫下1年 | 4℃保存1年，室溫保存半年 | ||
| 優點 | 同級別靈敏度中訊號最強 | 最高性價比，適合多數WB實驗 | 訊號持續時間最長，非常適合多次曝光 | 靈敏度極佳，非常適合微量蛋白質的檢測 |
注意：建議的抗體稀釋濃度是基於 1 mg/mL 的抗體庫存濃度。
產品應用
圖1 檢測效果比較
圖2 檢測效果比較
圖 3.檢測效果比較
已出版文獻
[1]王哲, 陸哲, 林珊, 等.表達亮胺酸-tRNA 合成酶 2 的 B 細胞有助於大腸直腸癌的免疫逃脫。免疫。 2022；55(6):1067-1081.e8。 doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017（影響因子：43.474）
[2] 吳哲,劉丹,潘丹等。微型AcidibacillusthiooxidansCas12f1的結構與工程設計[J].自然催化,2023,6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] 姚建，吳德，張聰等。巨噬細胞 IRX3 促進飲食引起的肥胖和代謝發炎。天然免疫學。 2021；22(10):1268-1279。 doi:10.1038/s41590-021-01023-y (影響因子：25.606)
[4] 何曉,李建,週剛等.抑制性中間神經元的突觸可塑性對海馬節律和記憶進行門控。神經元。 2021；109(6):1013-1028.e9。 doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014（影響因子：17.173）
價格優勢
圖 7.價格比較
常見問題
| 遇到的問題 | 原因分析 | 推薦解決方案 |
| 膠卷有反轉影像 | 膠卷有反轉影像 | 膠卷有反轉影像 |
| 膠片上有棕色或黃色條紋 | ||
| 螢光猝滅 | 操作時間過長，膜逐漸乾燥 | 防止膜乾燥 |
| 塑膠包裝、顯影劑或定影劑的污染 | 養成良好的實驗習慣 | |
| 反應體系中HRP不足 | 增加HRP標記物質 | |
| 膠片上無條帶或訊號弱 | 轉移效率低 | 提高轉移效率，使用預染Marker進行判斷 |
| 抗原/抗體不足或不匹配 | 增加抗原/抗體量或選擇適當的抗原/抗體 | |
| X 光膠片問題 | 若曝光後底片全黑（不透明），表示底片已完全曝光；使用新的 X 光膠片 | |
| 開發人員/修復者問題 | 預先曝光膠片進行檢查；如果有問題，請更換新的顯影劑/固定劑 | |
| 反應體系中HRP含量過高 | 稀釋 HRP 標記物質 | |
| 高背景 | 一抗和二抗濃度過高 | 降低抗體濃度，延長阻斷時間 |
| 抗體未徹底清潔 | 增加洗滌次數 | |
| 阻塞不完全 | 最佳化阻塞條件 | |
| 使用了錯誤的阻斷劑 | 使用不同的阻斷劑 | |
| 過度曝露 | 減少曝光時間 | |
| 抗體特異性差 | 用高品質抗體代替 | |
| 反應體系中HRP含量過高 | 稀釋 HRP 標記物質 | |
| 有空位的帶子 | 高濃度抗原和二抗 | 稀釋樣品並重新運行凝膠，或冷卻混合的顯色溶液並將其應用於膜以立即快速顯影。 |
| 不規則帶狀 | 轉移過程中出現氣泡或甲醇水化不均勻（針對 PVDF 膜） | 優化轉移條件。 |
| 電影廣告 | HRP 標記物質的聚集體 | 用0.2μm膜過濾HRP標記物 |
| 非特異性條帶 | 反應體系中HRP含量過高 | 稀釋 HRP 標記物質 |
| SDS 導致非特異性蛋白質結合 | 實驗過程中請勿使用 SDS | |
| 抗體特異性差 | 用高品質抗體代替 | |
| 阻斷不足 | 增加封閉時間或使用不同的封閉劑 |
訂購資訊
| 產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
| 超級ECL檢測試劑 | 36208ES60/76 | 100 毫升/50 毫升 |
| 增強型 ECL 化學發光底物試劑盒 | 36222ES60/76 | 100 毫升/500 毫升 |
| SuperSignal SuperDura 延長使用壽命基板 | 36223ES10/60/70/76 | 10毫升/100毫升/200毫升/500毫升 |
| SuperSignal MaxiSignal 最大靈敏度底物 | 36224ES10/60/70/76 | 10毫升/100毫升/200毫升/500毫升 |