1.背景介紹

鏈黴親和素是一種源自鏈黴菌 (Streptomyces avidinii) 的生物素結合蛋白。其非特異性結合比親和素低得多,且與在中性pH下帶淨正電荷且含有約7%碳水化合物的蛋清親和素相比,鏈黴親和素具有在中性pH下幾乎不帶淨電荷且不含碳水化合物等更為有利的化學性質。因此,它被廣泛用作親和素的替代品。

2.產品特點

四聚體結構:鏈黴親和素以同型四聚體形式存在,大小為66KDa;

高親和力:每個鏈黴親和素分子可以與四個生物素分子高度特異地結合,且它們之間的親和力極強;

廣泛應用: 鏈黴親和素-生物素複合物的解離常數在納摩爾範圍內,這是分子生物學應用中常用的特性;在大多數應用中,它可以與抗體蛋白互換使用;

高品質萃取: 由純化而得 鏈黴菌

圖 1. 鏈黴親和素

產品 應用

應用 1:含鏈黴親和素的純化樹脂

1)應用原理

基於鏈黴親和素與生物素之間的相互作用,鏈黴親和素與6%瓊脂糖高度​​交聯,獨特的製備工藝賦予其更高的物理化學性質,使其能夠承受更高的壓力。它可以在較高的流速下實現目標蛋白質的純化,更適合大規模工業蛋白質純化。

圖2. 鏈黴親和素樹脂純化原理

2)Yeasen 致力於為您提供高效的產品,為您純化更完美的蛋白質。

圖 3. 經鏈黴親和素樹脂純化的蛋白質

3)常見問題

問題

可能的原因

推薦的解決方案

色譜柱背壓過高

填料堵塞

清潔樹脂。

裂解緩衝液含有細小的固體顆粒,建議上樣前先用0.22μm或0.45μm濾膜過濾,或離心去除。

樣品太黏稠。

樣本含有高濃度的核酸,延長裂解時間直至黏度降低,或添加 DNase I(最終濃度為 5 μg/ml)、Mg2+ (最終濃度為 1 mM),在冰上孵育 10-15 分鐘

緩衝液太黏稠

有機試劑或蛋白質穩定劑(如甘油等)可能造成背壓升高,降低操作流速。

洗脫組分中無目的蛋白質

過度切割會使目標蛋白質變性

使用溫和的裂解條件。實驗條件依據經驗。

目標蛋白質聚集產生沉澱

將 DTT 加入預細胞裂解溶液中,最終濃度為 1-10 mM。

目標蛋白未完全洗脫

洗脫體積太小

增加洗脫液體積並降低洗脫流速。

洗脫緩衝液的 pH 值發生變化

使用新鮮配製的洗脫液

洗脫液孵育時間不夠

增加洗脫緩衝液與凝膠的孵育時間。

應用2:螢光基團和酵素結合物標記的鏈黴親和素。

圖 4. 不同的結合鏈黴親和素

1)酵素連結免疫吸附測定
  • 辣根過氧化物酶 (HRP) 結合鏈黴親和素

Ⅰ.採用高純度鏈黴親和素與辣根過氧化物酶經特殊結合技術製成;

Ⅱ.保持過氧化物酶較高的比活力。應用:免疫組織化學(IHC)、免疫細胞化學(ICC)、原位雜交(ISH)等。

建議濃度:WB(化學發光法)0.01-0.1 µg/mL; 1-2µg/mL 用於 ELISA、HC/ICC、WB(底物顯色)

  • 鹼性磷酸酶 (AP) 結合鏈黴親和素

Ⅰ.具有特定的共價鍵,適用於固相分析、組織/細胞染色系統和印跡應用;

Ⅱ.該結合物穩定、活性高。

應用:免疫組織化學 (IHC)、免疫細胞化學 (ICC)、酵素連結免疫斑點試驗 (ELISPOT)、酵素連結免疫吸附試驗 (ELISA)、原位雜交 (ISH) 和印跡應用。

建議濃度:ELISA、IHC/ICC 為 1-2 µg/mL; 0.1-1 µg/mL(用於免疫印跡)

2)螢光團結合鏈黴親和素
  • Fluor® 螢光素偶聯鏈黴親和素

Ⅰ.建議常規進行免疫螢光檢查;

Ⅱ.純度高,具有極低的非特異性結合特性;

Ⅲ.對生物素有較高的親和力;

應用:免疫螢光(IF)、原位雜交(ISH)、流式細胞儀(Flow Cyt)。

建議濃度:0.5-2 µg/mL (IF)

  • DyLight™ 染料結合鏈黴親和素

Ⅰ.可用於免疫螢光、原位雜交、流式細胞儀等應用中檢測生物素化的二抗體等大分子;

Ⅱ.純度高,具有極低的非特異性結合特性;

Ⅲ.對生物素有極高的親和力;

Ⅳ.光穩定性高,對pH不敏感,螢光更明亮;

應用:免疫螢光(IF)、原位雜交(ISH)、流式細胞儀(Flow Cyt)。

建議濃度:0。5-2 微克/毫升(中頻)

產品資訊

產品系列

產品編號

產品名稱

規格

鏈黴親和素

35099ES

鏈黴親和素(粉末)

100毫克/1克

35101ES

鏈黴親和素 (5mg/ml)

1 毫克/5 毫克/10 毫克/100 毫克/1 克

酵素結合鏈黴親和素

35105ES

HRP 鏈黴親和素

100 μL

35106ES

AP鏈黴親和素

100 μL

螢光標記的鏈黴親和素

35102ES

DyLight 405™ 鏈黴親和素

100 μL

35103ES

氟化物商標 488-結合鏈黴親和素

100 μL

35104ES

氟化物商標 647 結合鏈黴親和素

100 μL

35107ES

氟化物商標 584 結合鏈黴親和素

100 μL

35108ES

Cy3 結合的鏈黴親和素

1毫克

鏈黴親和素純化系列

20512ES

鏈黴親和素瓊脂糖樹脂 6FF

5毫升/5毫升×5/100毫升

20513ES

BiotSep 鏈黴親和素 6FF 層析管柱,1ML

1毫升/1毫升×5

20514ES

BiotSep 鏈黴親和素 6FF 層析管柱,5ML

5毫升/5毫升×5

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