ما هو أوريوباسيدين أ
Aureobasidin A (AbA) هو مضاد حيوي ببتيدي حلقي معزول من الفطر الخيطي Aureobasidium pullulans No. R106، والذي يتمتع بخصائص مضادة للفطريات قوية ويمكن أن يكون سامًا للخميرة عند تركيزات منخفضة (0.1-0.5 ميكروجرام/مل). آلية عمل AbA هي من خلال تثبيط نشاط إينوزيتول فوسفوريل سيراميد سينثاز (IPC synthase)، وهو إنزيم مشفر بواسطة جين AUR1 في الخميرة، مما يمنع تخليق السيراميد إلى فسفوليبيدات إينوزيتول، مما يؤدي إلى نقص السفينجوليبيدات وتمزق غشاء الخلية، وبالتالي قتل السلالة. تشمل الأنواع الفطرية الحساسة لـ AbA Saccharomyces cerevisiae وSchizosaccharomyces pombe وCandida glabrata وAspergillus nidulans وA. niger.
الشكل 1 الصيغة البنيوية لـ AbA، CAS#127785-64-2
وقد وجدت الأبحاث أن جين AUR1 من الخميرة Saccharomyces cerevisiae وجين AURA من Aspergillus nidulans متماثلان، وكلاهما يشفر إنزيم IPC synthase. وبالتالي، فإن الطفرات في هذين الجينين يمكن أن تمنح مقاومة قوية لـ AbA للسلالات، مثل الجين المتحور AUR1-C. يعد AbA مناسبًا جدًا كعلامة اختيار للأدوية لفحص المستنسخات الإيجابية، ولا يتطلب تحسين الحالة، مع خلفية منخفضة جدًا. تعد مقاومة AbA أيضًا بمثابة مراسل مثالي لدراسات الخميرة الهجينة المفردة/المزدوجة ومتوافقة مع أنظمة الخميرة الهجينة التي تحمل مقاومة مقابلة.
ما هو نظام الخميرة الهجين المفرد/المزدوج؟
تم إنشاء نظام الخميرة الهجين المزدوج (اختبار الخميرة الهجين المزدوج) بواسطة فيلدز وسونغ وآخرين بناءً على خصائص التنظيم النسخي في حقيقيات النوى. يمكنه تحليل التفاعلات بين البروتينات المعروفة بسرعة وبشكل مباشر ويُستخدم على نطاق واسع في دراسة تفاعلات المستضد والأجسام المضادة واكتشاف بروتينات جديدة ووظائف بروتينية جديدة وفحص أهداف الأدوية وإنشاء خرائط ارتباط البروتين الجينومي. مبدأ الخميرة الهجين المزدوج هو أن المنشط النسخي لحقيقيات النوى يحتوي على مجالين هيكليين مختلفين: مجال ربط الحمض النووي (مجال ربط الحمض النووي، DNA-BD) ومجال تنشيط نسخ الحمض النووي (مجال التنشيط، AD)، والذي يمكن فصلهما بشكل مستقل دون التأثير على وظيفة كل منهما. لا يمكن لـ BD وAD بمفردهما تنشيط الاستجابة النسخية، فقط عندما يكون الاثنان قريبين مكانيًا بدرجة كافية، يُظهران نشاط المنشط النسخي الكامل، مما يسمح بنسخ الجين المصب. من خلال بناء البلازميدات الاندماجية للبروتينين قيد الدراسة (بروتين X وبروتين Y) مع مجالات BD وAD على التوالي والتعبير عنها في نفس خلية الخميرة، إذا لم يكن هناك تفاعل بين البروتينين، فلن يتم نسخ الجين المراسل؛ إذا تفاعل البروتينان، فسيكون مجالا BD وAD قريبين مكانيًا، وبالتالي يتم نسخ الجين المراسل.
الشكل 2 الرسم التخطيطي الأساسي للخميرة الهجينة ثنائية الخلية [1]
تقنية الخميرة الهجينة هي أداة لدراسة تفاعلات الأحماض النووية والبروتينات، تم تطويرها على أساس الخميرة الهجينة الثنائية، وتستخدم على نطاق واسع لدراسة تنظيم التعبير الجيني في الخلايا حقيقية النواة، مثل تحديد ما إذا كان هناك تفاعل بين الحمض النووي المعروف والبروتينات المعروفة؛ عزل البروتينات الجديدة التي ترتبط بعنصر تنظيم السيس المستهدف أو مواقع ربط الحمض النووي القصيرة الأخرى؛ تحديد مواقع ربط الحمض النووي التي ثبت تفاعلها بدقة وتحليل مجالات ربط الحمض النووي للبروتينات. مبدأها الأساسي هو بناء عنصر السيس المعروف المؤثر قبل المروج الأساسي (المروج الأدنى، Pmin) وربط الجين المراسل أسفل Pmin. يتم دمج cDNA المشفر لعامل النسخ المراد اختباره مع ناقل تعبير مجال AD في الخميرة وإدخاله إلى خلايا الخميرة.إذا كان منتج هذا الجين قادرًا على الارتباط بالعنصر المؤثر cis، فإنه يمكن تنشيط مُحفز Pmin، مما يسمح بالتعبير عن الجين المراسل.
الشكل 3 الرسم التخطيطي الأساسي للخميرة الهجينة أحادية الخلية [2]
بالنسبة لدراسات الخميرة الهجينة المفردة/المزدوجة، تقدم Yeasen المنتج 60231ES أوريوباسيدين أ (AbA)، وهو عبارة عن محلول من AbA مذاب في الميثانول بدرجة نقاء ≥ 97% وتركيز 1 مجم/مل. يوصي Yeasen بتركيز مثبط لـ AbA يتراوح بين 100-1000 نانوجرام/مل في تجارب الخميرة الهجينة المفردة/المزدوجة، ويعتمد التركيز العامل المحدد على حساسية الخلايا المضيفة (انظر الجدول التالي، الحد الأدنى لتركيزات المثبطة (MIC) لـ AbA لسلالات الخميرة المختلفة).
| بإجهاد بكتيري | ميك (نجرام/مل) | |
| خميرة سيريفيسياي | ايه تي سي سي 9763 (ثنائي الصبغيات) | 200-400 |
| SH3328 (أحادي الصيغة الصبغية) | 100 | |
| خميرة الساكي (ثنائي الصبغيات) | 100-200 | |
| خميرة الشوتشو (ثنائي الصبغيات) | 100 | |
| خميرة البيرة (ثلاثي أو رباعي الصبغيات) | 100 | |
| خميرة الخباز (ثنائي الصبغيات) | 200-400 | |
| شيزو بومبي | جي واي-745 (أحادي الصيغة الصبغية) | 100 |
| الكافور الأبيض | تيم-0136 (ثنائي الصبغيات) | 40 |
| C. تروبيكاليس | تيم-0324 (ثنائي الصبغيات) | 80 |
حالة التطبيق
لدراسة موقع ارتباط بروتين GmWRKY31 بمروج جين GmSAGT1، في تجربة الخميرة الهجينة الوحيدة، تم إدخال تسلسل الحمض النووي المستهدف في ناقل pBait-AbAi الذي يحتوي على جين مراسل اليوراسيل Ura3، الموجود أعلى جين AUR1-C. بعد تحويل الخميرة بالبلازميد المقابل، تم تعليقه في محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9%، وتم ضبط OD600 إلى 0.005. بعد ذلك، تم نشر 100 ميكرولتر من العينة على أطباق تحتوي على 500 نانوجرام/مل من AbA، مقلوبة، وزرعت عند 30 درجة مئوية لمدة 3-5 أيام[3].
الشكل 3 تفاعل بروتين GmWRKY31 مع سلالات الخميرة التي تحتوي على شظايا F16، F20، F73، delF16، delF20، أو delF73.
المقالات المنشورة باستخدام كواشفنا
[1] شونان تشانج، يوي تشانج، كانجننج لي، وآخرون. النيتروجين يتوسط وقت الإزهار وكفاءة استخدام النيتروجين من خلال المنظمات الزهرية في الأرز، علم الأحياء الحالي، المجلد 31، العدد 4، 2021, https://doi.org/10.1016/j.cub.2020.10.095. (لو:10.834)
[2] جياينج كوانج، ينج تشون شو، ييدان ليو، وآخرون. شبكة تنظيمية مركزها NnSnRK1 لإنهاء الإزهار المبكر الناجم عن الظل في اللوتس، علم النبات البيئي والتجريبي، المجلد 221، 2024، 1057-25، https://doi.org/10.1016/j.envexpbot.2024.105725. (لو:5.7)
المنتجات ذات الصلة
| اسم المنتج | قطة# | مواصفة |
| سيبروفلوكساسين هيدروكلوريد | 60201ES05/25/60 | 5/25/100 جرام |
| أمبيسيلين، ملح الصوديوم | 60203ES10/60 | 10/100 جرام |
| هيكلات الدوكسيسيكلين | 60204ES03/08/25 | 1/5/25 جرام |
| كلورامفينيكول، درجة USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100 جرام |
| كبريتات كاناميسين | 60206ES10/60 | 10/100 جرام |
| تيتراسيكلين هيدروكلوريد تيتراسيكلين هيدروكلوريد (USP) | 60212ES25/60 | 25/100 جرام |
| فانكومايسين هيدروكلوريد | 60213ES60/80/90 | 100 ملغ/1 جرام/5 جرام |
| ملح كبريتات الجنتاميسين | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 جرام |
| سبكتينوميسين هيدروكلوريد | 60215ES08 | 5 جرام |
| فليوميسين (20 ملغ/مل في المحلول) | 60217ES20/60 | 20/5×20مجم |
| بلاستيسيدين س (بلاستيسيدين) | 60218ES10/60 | 10/10×10مجم |
| نيستاتين | 60219ES08 | 5 جرام |
| كبريتات G418 (جينيتيسين) | 60220ES03/08 | 1/5 جرام |
| بوروميسين (محلول 10 ملغ/مل) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 مل |
| بيوروميسين ديهيدروكلوريد | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 ملغ / 1 غرام |
| هيجروميسين ب (50 ملغ/مل) | 60224ES03 | 1 جرام (20 مل)/10×1 جرام (20 مل) |
| هيجروميسين ب | 60225ES03/10 | 1/10 جرام |
| إريثروميسين | 60228ES08/25 | 5/25 جرام |
| تيمنتين | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2 جرام |
| أوريوباسيدين أ (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1مجم |
| كبريتات بوليميكسين ب | 60242ES03/10 | 1/10وحدة دولية |
وثائق مرجعية
[1] Paiano A، وآخرون. اختبار الخميرة الهجين المزدوج لتحديد البروتينات المتفاعلة. Curr Protoc Protein Sci. 2019 فبراير؛ 95 (1): e70.
[2] جون س، وآخرون. تجارب الخميرة الهجينة الوحيدة: منظور تاريخي وتقني. الأساليب. أغسطس 2012؛ 57 (4): 441-447.
[3] Dong H، وآخرون. تحليل النسخ الجيني لعوامل النسخ الوراثية لفول الصويا WRKY استجابة لعدوى Peronospora manshurica. Genomics. 2019 ديسمبر؛ 111 (6): 1412-1422.