بوروميسين هو مضاد حيوي أمينوغليكوزيدي ينتجه Streptomyces alboniger. وهو نظير للطرف 3' من جزيء aminoacyl-tRNA ويمكنه الارتباط بموقع A في الريبوسوم، والاندماج في سلسلة الببتيد الممتدة، مما يعطل انتقال الببتيد على الريبوسوم، مما يتسبب في إنهاء السلسلة قبل الأوان أثناء الترجمة، وبالتالي تثبيط تخليق البروتين.
الشكل 1 الصيغة البنيوية للبيورومايسين (رقم CAS 53-79-2)
تم العثور على جين pac، الذي يشفر إنزيم puromycin N-acetyltransferase (pac)، في البكتيريا المنتجة للبيورومايسين Streptomyces alboniger، مما يمنحها مقاومة للبيورومايسين. تُستخدم هذه الخاصية الآن على نطاق واسع لفحص سلالات الخلايا المستقرة المتحولة التي تحمل البلازميدات باستخدام جين pac. يرتبط الاستخدام الواسع النطاق للبيورومايسين في فحص سلالات الخلايا المستقرة بخصائص ناقلات الفيروسات العدسية، والتي تحمل معظمها جين pac في ناقلات الفيروسات العدسية التجارية. في حالات معينة محددة، يمكن أيضًا استخدام البيورومايسين لفحص سلالات E. coli المحولة بالبلازميدات التي تحمل جين pac. يعمل البيورومايسين بسرعة ويمكن أن يسبب موت الخلايا بسرعة عند تركيزات منخفضة. تكون الخلايا الثديية الملتصقة حساسة لتركيزات تتراوح من 2 إلى 5 ميكروجرام/مل. من البروميسين، في حين أن الخلايا المعلقة حساسة بالفعل لتركيزات منخفضة تصل إلى 0.5-2 ميكروجرام/مل من البروميسين. يمكن توليد خلايا ثديية ذات مقاومة مستقرة للبروميسين في غضون أسبوع.
فحص خط الخلايا المستقرة
المبدأ التجريبي
من خلال استنساخ DNA/shRNA الخارجي في ناقل يحمل جين pac، يتم نقل الناقل المعاد تركيبه إلى الخلايا المضيفة ودمجه في كروموسوماتها، ونقله بشكل مستقر مع انقسام الخلايا، وأخيراً يتم فحصه باستخدام البيوروميسين.
التحضير والتجربة المسبقة
1 تركيزات الاستخدام الموصى بها
الخلايا الثديية: 1-10 ميكروجرام/مل، يجب تحديد التركيز الأمثل عن طريق التجربة المسبقة.
E.coli: لفحص E.coli المتحولة المستقرة التي تحمل جين pac على وسط أجار LB، استخدم تركيز 125 ميكروجرام/مل. يلزم ضبط درجة الحموضة بدقة لفحص البيوروميسين للمتحولات المستقرة E.coli.
2 طريقة الذوبان
قم بإذابة البيوروميسين في الماء المقطر لتحضير محلول مخزون بتركيز 50 ملغ/مل، ثم قم بالتعقيم بالترشيح باستخدام فلتر 0.22 ميكرومتر، ثم قم بتخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية.
3 تحديد منحنى قتل البيوروميسين (باستخدام تحويل shRNA أو التحويل الفيروسي العدسي كمثال)
إن تركيز الفحص الفعال للبيورومايسين مرتبط بنوع الخلية وحالة النمو وكثافة الخلية واستقلاب الخلية وموضع دورة الخلية. ومن الأهمية بمكان تحديد الحد الأدنى لتركيز البيورومايسين الذي يقتل الخلايا غير المحولة. ومن الضروري إجراء تجربة فحص مسبقة لتدرج البيورومايسين للتجربة الأولى لتحديد منحنى القتل.
- خلايا الصفائح بكثافة 5~8×104الخلايا/البئر في لوحة مكونة من 24 بئرًا والثقافة طوال الليل.
- تحضير وسط الفحص: وسط طازج يحتوي على تركيزات مختلفة من البيوروميسين (على سبيل المثال، 0-15 ميكروجرام/مل، على الأقل 5 تدرجات).
- استبدل بوسط الفحص المعد حديثًا، واستمر في الزراعة، ولاحظ نمو الخلايا، وقم بتغيير وسط الفحص الطازج كل 2-3 أيام.
- راقب بقاء الخلية يوميًا؛ تركيز الدواء الذي يقتل بشكل فعال جميع الخلايا غير المحولة خلال 4-6 أيام هو الحد الأدنى للتركيز.
فحص الكائنات الحية المستقرة
- بعد الإصابة بالفيروسات العدسية لمدة 48-72 ساعة (تركيز 70-80%)، يتم زرع الخلايا في وسط يحتوي على تركيز مناسب من البيوروميسين لمدة 48 ساعة على الأقل. عندما تموت جميع الخلايا في المجموعة الضابطة غير المحولة بالبيورومايسين، تصبح الخلايا المتبقية في المجموعة المصابة بالفيروس خلايا إيجابية.
【ملاحظة】: ① يكون تأثير المضادات الحيوية أكثر وضوحًا عندما تكون الخلايا في مرحلة انقسام نشطة. ستقل فعالية المضادات الحيوية بشكل كبير إذا كانت الخلايا كثيفة للغاية. يجب ألا تتجاوز كثافة الخلايا 25٪. ② راقب حالة نمو الخلايا يوميًا ؛ يتطلب فحص البيوروميسين 48 ساعة على الأقل، وعادةً ما يستمر التركيز الفعال لفحص البيوروميسين من 3 إلى 10 أيام. كلما زاد MOI للفيروس، زاد عدد نسخ shRNA وجين مقاومة البيوروميسين التي تحتوي عليها كل خلية. عند إجراء فحص البيوروميسين، كلما زاد MOI، زاد عدد نسخ pac التي تحتوي عليها الخلايا، وزاد تركيز البيوروميسين الذي يمكنها تحمله. اضبط تركيز البيوروميسين لفحص الخلايا المحولة، ولكن يجب ألا يكون تركيز البيوروميسين أقل من الحد الأدنى للتركيز الفعال لمنحنى القتل؛
- أضف وسطًا ثقافيًا يحتوي على الحد الأدنى من تركيز البيوروميسين لتوسيع الخلايا، وبعد التأكد من نتائج اختبار qPCR، انتقل إلى الحفظ بالتبريد.
| منتجس اسم | قطة# | مواصفة | مظهر |
| بوروميسين ثنائي هيدروكلوريد رقم CAS:58-58-2 | 60210ES25 | 25 ملغ | أبيض إلى مسحوق أبيض اللون |
| 60210ES60 | 100 ملغ | ||
| 60210ES72 | 250 ملغ | ||
| 60210ES76 | 500 ملغ | ||
| 60210ES80 | 1 ج | ||
| بوروميسين (محلول 10 ملغ/مل) رقم CAS:58-58-2 | 60209ES10 | 1×1 مل | المحلول (10 ملغ/مل في H)2أو) |
| 60209ES50 | 5×1 مل | ||
| 60209ES60 | 10×1 مل | ||
| 60209ES76 | 50×1 مل |
توصية المنتج
المنشورات التي نشرها العملاء الذين يستخدمون هذا المنتج (إحصائيات جزئية: بعضها)
[1] Zhang D، Liu Y، Zhu Y، وآخرون. مسار cGAS -STING-PERK غير التقليدي يسهل البرنامج الترجمي المهم للشيخوخة وتليف الأعضاء. نات سيل بيول . 2022;24(5):766- 782. دوى:10.1038/s41556-022-00894-z (إذا: 28.824)
[2] Lu T، Zhang Z، Zhang J، وآخرون. يحدد CD73 في الحويصلات خارج الخلية الصغيرة المشتقة من سرطان الخلايا الحرشفية للرأس والرقبة تثبيط المناعة المرتبط بالورم بوساطة الخلايا البلعمية في البيئة المحيطة. ج- حويصلات خارج الخلية . 2022;11(5):e12218. دوى:10.1002/جيف2.12218 (إذا: 25.841)
[3] منغ إف، يو زي، تشانغ د، وآخرون.يؤدي الفصل الطوري المستحث للطفرات NF2 إلى حبس آلية cGAS-STING لإلغاء المناعة المضادة للورم. خلية مولية . 2021;81(20):4147-4164.e7.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.040 (إذا: 17.970)
[4] Chen S، Liu S، Wang J، وآخرون. استهداف DRP1 بوساطة TBK1 يمنح استشعار الحمض النووي لإعادة برمجة ديناميكيات الميتوكوندريا وعلم وظائف الأعضاء. خلية مولية . 2020;80(5):810-827.e7.doi:10.1016 /j.molcel.2020.10.018 (إذا:15.584)
[5] Zhao Q، Zheng K، Ma C، وآخرون. PTPS يسهل النترتة S-LTBP1 المقسمة ويعزز نمو الورم تحت نقص الأكسجين. خلية مولية . 2020;77(1):95-107.e5. دوى:10.1016/j.molcel.2019.09.018 (إذا:14.548)
[6] Mo J، Liu F، Sun X، وآخرون. تثبيط مجمع FACT يستهدف إشارات القنفذ الشاذة ويتغلب على مقاومة المضادات الملساء. بحث عن السرطان . 2021;81(11):3105-3120. دوى:10.1158/0008-5472.CAN-20-3186 (إذا: 12.701)
[7] Zou Y، Wang A، Shi M، وآخرون. تحليل المناظر الطبيعية وديناميكيات الأكسدة والاختزال في الخلايا الحية وفي الجسم الحي باستخدام أجهزة استشعار فلورية مشفرة وراثيًا. بروتوكول نات . 2018;13(10):2362-2386. دوى:10.1038/s41596-018-0042-5 (إذا: 12.423)
[8] Mao L، Chen J، Lu X، وآخرون. يكشف التحليل البروتيني لخلايا سرطان الرئة عن دور حاسم لـ BCAT1 في نقائل الخلايا السرطانية. العلاج التشخيصي. 2021;11(19):9705-9720. تم النشر في 27 سبتمبر 2021. دوى:10.7150/thno.61731 (إذا: 11.556)
[9] هان إل، تشانغ إف، ليو واي، وآخرون. يرتبط بروتين الجلوبيولين الرحمي 1 (UGRP1) بالبودوبلانين (PDPN) لتعزيز مسار التهاب جديد أثناء الإصابة بالمكورات الرئوية. الطب والترجمة السريرية 2022;12(6):e850. دوى:10.1002/ctm2.850 (إذا:11.492)
[10] Zhang M، Liu F، Zhou P، وآخرون. ينظم مسار إشارات MTOR تمايز الخلايا البلعمية من أسلاف النخاع العظمي لدى الفئران عن طريق تثبيط الالتهام الذاتي. الالتهام الذاتي . 2019؛15(7):1150-1162. doi:10.1080/15548627.2019. 1578040 (إذا:11.059)
[11] Zhang S، Yang Z، Bao W، وآخرون. SNX10 (فرز نيكسين 10) يمنع بدء سرطان القولون والمستقيم وتطوره من خلال التحكم في التحلل الذاتي لـ SRC. الالتهام الذاتي . 2020؛16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122 (إذا:11.059)
[12] Zhang Y، Ding H، Wang X، وآخرون. يعزز MK2 تحلل Tfcp2l1 عبر ربيط يوبيكويتين β-TrCP لتنظيم تجديد الخلايا الجذعية الجنينية للفأر. ممثل الخلية . 2021;37(5):109949. دوى:10.1016/j.celrep.2021.109949 (إذا: 9.423)
[13] Jiang Y، Dong Y، Luo Y، وآخرون. الفسفرة التي توسطها AMPK على 53BP1 تعزز c-NHEJ. ممثل الخلية . 2021;34(7):108713. دوى:10.1016/j.celrep.2021.108713 (إذا: 9.423)
[14] صن كيو، يي واي، غوي أ، وآخرون. مورتالين-كاليفورنيا 2+ المحور يحرك مقاومة الريتوكسيماب الفطرية في سرطان الغدد الليمفاوية المنتشر ذو الخلايا البائية الكبيرة. رسالة عن السرطان . 2022;537:215678. دوى:10.1016/j.canlet.2022.215678 (إذا: 8.679)
[15] Jin R، Zhao A، Han S، وآخرون. تفاعل S100A16 وGRP78 النشطين في إجهاد الشبكة الإندوبلازمية من خلال مسار IRE1α/XBP1 في التليف الأنبوبي الخلالي الكلوي. مرض موت الخلية . 2021؛12(10):942. نُشر في 13 أكتوبر 2021. doi: 10.1038/s41419-021-04249-8 (إذا: 8.469)
[16] Zhang P، Zhang Z، Fu Y، وآخرون.يخفف يوبيكويتين DYRK1A المرتبط بـ K63 من تدهور مستقبلات عامل نمو البشرة EGFR بوساطة TRAF2 Sprouty 2. مرض موت الخلية . 2021؛12(6):608. نُشر في 11 يونيو 2021. doi:10.1038/s41419-021-03887-2 (إذا: 8.469)
[17] Zhao T، Li Y، Shen K، Wang Q، Zhang J. يؤدي إسقاط OLR1 إلى إضعاف عملية التمثيل الغذائي التحللي لقمع تكاثر خلايا سرطان القولون ومقاومة العلاج الكيميائي عن طريق تقليل تنظيم SULT2B1 عبر c-MYC. مرض موت الخلية 2021؛13(1):4. نُشر في 17 ديسمبر 2021. doi: 10.1038/s41419-021-04174-w (إذا: 8.469)
[18] Zhou R، Wu Q، Wang M، وآخرون. يقوم بروتين الفوسفاتيز PPM1A بإزالة الفسفرة وتنشيط YAP للتحكم في تجديد الأمعاء والكبد لدى الثدييات. بلوس بيول . 2021؛ 19(2):e3001122. نُشر في 25 فبراير 2021. doi:10.1371/journal.pbio.3001122 (إذا: 8.029)
[19] وو إس، وانغ إس، ولين إكس، ويانغ إس، وبا إكس، وشيونغ دي، وشياو إل، ولي آر. يمنع لاناتوسيد سي تكاثر فيروس الهربس البسيط 1 عن طريق تنظيم توزيع NRF2 داخل الخلايا. الطب النباتي. 2024 فبراير؛124:155308. doi: 10.1016/ج.فيميد.2023.155308. (لو:7.9)
[20] Shen K، Song W، Wang H، Wang L، Yang Y، Hu Q، Ren M، Gao Z، Wang Q، Zheng S، Zhu M، Yang Y، Zhang Y، Wei C، Gu J. فك تشفير الإمكانات النقيلية والعلاج المساعد الأمثل بعد العملية الجراحية للورم الميلانيني على أساس درجة ورم خبيث. اكتشاف موت الخلية. 2023 أكتوبر 25؛9(1):397. doi: 10.1038/س41420-023-01678-6. (لو:7.0)
المنتجات ذات الصلة
| اسم المنتج | قطة# | مواصفة |
| سيبروفلوكساسين هيدروكلوريد | 60201ES05/25/60 | 5/25/100 جرام |
| أمبيسيلين، ملح الصوديوم | 60203ES10/60 | 10/100 جرام |
| هيكلات الدوكسيسيكلين | 60204ES03/08/25 | 1/5/25 جرام |
| كلورامفينيكول، درجة USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100 جرام |
| كبريتات كاناميسين | 60206ES10/60 | 10/100 جرام |
| تيتراسيكلين هيدروكلوريد تيتراسيكلين هيدروكلوريد (USP) | 60212ES25/60 | 25/100 جرام |
| فانكومايسين هيدروكلوريد | 60213ES60/80/90 | 100 ملغ/1 جرام/5 جرام |
| ملح كبريتات الجنتاميسين | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 جرام |
| سبكتينوميسين هيدروكلوريد | 60215ES08 | 5 جرام |
| فليوميسين (20 ملغ/مل في المحلول) | 60217ES20/60 | 20/5×20مجم |
| بلاستيسيدين س (بلاستيسيدين) | 60218ES10/60 | 10/10×10مجم |
| نيستاتين | 60219ES08 | 5 جرام |
| كبريتات G418 (جينيتيسين) | 60220ES03/08 | 1/5 جرام |
| بوروميسين (محلول 10 ملغ/مل) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 مل |
| بيوروميسين ديهيدروكلوريد | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 ملغ / 1 غرام |
| هيجروميسين ب (50 ملغ/مل) | 60224ES03 | 1 جرام (20 مل)/10×1 جرام (20 مل) |
| هيجروميسين ب | 60225ES03/10 | 1/10 جرام |
| إريثروميسين | 60228ES08/25 | 5/25 جرام |
| تيمنتين | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2 جرام |
| أوريوباسيدين أ (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1مجم |
| كبريتات بوليميكسين ب | 60242ES03/10 | 1/10وحدة دولية |