مع التطور السريع لـ صروتين سإن تقنية تنقية البروتين تلعب دورًا حيويًا بشكل متزايد في مجال البحث البيولوجي وصناعة التكنولوجيا الحيوية. وباعتبارها تقنية أساسية، فإنها تنطوي على دمج المعلومات المشفرة للبروتين المستهدف في الخلايا المضيفة من خلال أساليب الهندسة الوراثية، بحيث يمكن حثها على إنتاج البروتينات المطلوبة بكفاءة. بعد ذلك، يتم تنفيذ سلسلة من خطوات التشغيل المتطورة في المختبر لتحقيق استخلاص عالي النقاء للبروتينات. تمكن تنقية البروتين العلماء من عزل أنواع فردية من البروتينات، وهو أمر بالغ الأهمية للدراسات المتعمقة حول بنية ووظيفة البروتينات، وتطوير الأدوية الجديدة، وتشخيص الأمراض وتعزيز تطبيق التكنولوجيا الحيوية. لا تضمن هذه التكنولوجيا دقة التجارب العلمية فحسب، بل إنها تدفع أيضًا باستمرار تطوير علوم الحياة.
الشكل 1. مخطط تخطيطي للكروماتوغرافيا التقاربية[1]
في مجال هندسة البروتينات، تعمل علامات الاندماج كأداة قوية يمكنها تسهيل العديد من الأغراض التجريبية من خلال الارتباط بالبروتينات المستهدفة. يتم سرد وظائف علامات الاندماج الشائعة في الجدول أدناه للرجوع إليها. ومع ذلك، بمجرد بقاء هذه العلامات على بروتينات الاندماج بعد الوفاء بوظائفها المساعدة الأولية، فقد يكون لها تأثيرات سلبية على التجارب اللاحقة، مثل التدخل في التجارب المناعية الحيوانية أو التأثير على النشاط البيولوجي للبروتينات. لذلك، من الأهمية بمكان إزالة علامات الاندماج غير الضرورية هذه لضمان الوظيفة الطبيعية للبروتينات ودقة التجارب.
الجدول 1. مقدمة لوظائف علامات الاندماج المشتركة وطرق انقسام الإنزيم
| علامة الاندماج | مقاس (ك دأ) | وظيفة | طرق الانقسام الأنزيمي الشائعة |
| له | 0.84 | مفيد للتطهير، قادر على تنقية البروتينات القابلة للذوبان/المتضمنة في الجسم. | بروتياز TEV |
| علَم | 1.01 | الغرض من البروتين المندمج مع Fتأخر يمكن التعرف على العلامة بواسطة الأجسام المضادة ضد Fتأخر، بحيث يحتوي البروتين المندمج على Fتأخر يمكن الكشف عن العلامة وتحديدها بواسطة Western Blot وELISA وطرق أخرى. | إنتيروكيناز |
| ضريبة السلع والخدمات | 26 | تعزيز ذوبان البروتين، قادر فقط على تنقية البروتينات القابلة للذوبان وحماية البروتينات السامة. | الثرومبين |
| م ب ب | 44.4 | تعزيز ذوبان البروتين وحماية البروتينات السامة. | بروتياز TEV |
| نوسا | 55 | تعزيز ذوبان البروتين وحماية البروتينات السامة. | الثرومبين |
| السومو | 11.2 | تعزيز قابلية ذوبان البروتينات، وتعزيز عملية التحلل البروتيني التحلل المائي، وتحسين استقرار البروتينات. | سومو بروتياز |
اليوم، يسعدنا أن نقدم لك منتجًا متطورًا لإزالة علامات الاندماج بكفاءة ودقة - UCF.MEالعلامة التجارية إنزيم بروتياز rTEV. بفضل إجراءاته التجريبية البسيطة وسهلة التشغيل، يستطيع هذا الإنزيم أن يفصل بسهولة العلامات غير الضرورية من البروتينات المندمجة، وبالتالي الحصول على بروتينات مستهدفة عالية النقاء.
UCF.MEالعلامة التجارية بروتياز rTEV
إن إنزيم بروتياز TEV هو إنزيم بروتياز يستخدم على نطاق واسع في تقسيم علامات اندماج البروتين المعاد تركيبه، وهو معروف بخصوصيته العالية للموقع. فهو يتعرف بدقة على تسلسل الأحماض الأمينية السبعة EXXYXQ↓(G/S) ويقوم بتقسيم دقيق بين الجلوتامين والجلايسين أو السيرين. إن التسلسل الأكثر شيوعًا للأحماض الأمينية السبعة هو Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly. وتضمن هذه الخصوصية الدقة والكفاءة في إجراء معالجة البروتين.
الشكل 2. مخطط تخطيطي لآلية عمل بروتياز TEV[2]
UCF.MEالعلامة التجارية إن إنزيم بروتياز rTEV عبارة عن إنزيم بروتياز معاد التركيب تم هندسته وراثيًا وتنقيته بدقة. فهو لا يحتفظ بالنشاط الوظيفي الكامل لإنزيم TEV الطبيعي فحسب، بل إنه يتميز أيضًا بثبات وخصوصية ممتازين على نطاق أوسع من درجات الحرارة. ال بقايا الحمض النووي المضيف من تمنتجه هو جداً منخفضة، مما يضمن كفاءة قطع أعلى لعلامات اندماج البروتين في التطبيقات العملية ويقلل بشكل فعال من خطر إدخال بقايا المواد الخارجية. UCF.MEالعلامة التجارية يُظهِر بروتياز rTEV نشاطًا مثاليًا في ظل ظروف درجة الحموضة 7.0 و30 درجة مئوية. ومع ذلك، فإنه يحافظ على نشاطه حتى في ظل مجموعة واسعة من الظروف بدرجة حموضة 6.0-8.5 ودرجة حرارة 4-30 درجة مئوية، لتلبية متطلبات معالجة البروتين المختلفة. ومن الجدير بالذكر أن UCF.MEالعلامة التجارية يحتوي بروتياز rTEV على علامة 6×His عند الطرف الأميني الخاص به، والتي يمكن إزالتها بكفاءة بواسطة راتنج Ni-NTA، وبالتالي تحقيق تنقية دقيقة للبروتين المستهدف.
عرض الأداء
1. كفاءة انقسام عالية: يتم انقسام علامة البروتين بشكل أكثر شمولاً
استخدام بروتين الاندماج (3 ميكروجرام) الذي يحتوي على UCF.MEالعلامة التجارية موقع انقسام البروتياز rTEV كركيزة، UCF.MEالعلامة التجارية تم إضافة بروتياز rTEV بتركيزات 10 و5 و3 وحدة على التوالي، وتم إجراء التفاعل عند 30 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. تم الكشف عن تأثير الانقسام عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام الأجار. أظهرت النتائج أن Yخففموقع UCF.MEالعلامة التجارية يمكن لإنزيم البروتياز rTEV أن يشق الركيزة بكفاءة عندما كانت كمية المدخلات أكبر من 3 وحدات، مع كفاءة انشقاق تزيد عن 90%.
الشكل 3. التحقق من نشاط انقسام UCF.MEالعلامة التجارية بروتياز rTEV
2. بقايا gDNA منخفضة للمضيف: تقلل بشكل فعال من خطر إدخال بقايا المواد الخارجية
عن طريق اختبار المضيف (الإشريكية القولونية) بقايا gDNA في دفعات مختلفة من UCF.MEالعلامة التجارية أظهرت النتائج أن بقايا gDNA المضيفة لـ UCF.MEالعلامة التجارية كان مستوى بروتياز rTEV أقل بكثير من <1 نسخة/وحدة.
الشكل 4. نتائج بقايا gDNA المضيفة في UCF.MEالعلامة التجارية بروتياز rTEV
3. ظروف تطبيق واسعة: قادرة على تلبية متطلبات معالجة البروتين المختلفة.
من خلال التحقق من نشاط انقسام UCF.MEالعلامة التجارية أظهرت النتائج أن rTEV Protease في ظل ظروف مختلفة، UCF.MEالعلامة التجارية أظهر بروتياز rTEV نشاطًا قويًا في ظل ظروف تتراوح من 4 إلى 30 درجة مئوية، مما قد يلبي متطلبات التطبيقات المختلفة للعملاء.
| وقت رد الفعل (ح) | نشاط الانقسام تحت درجات حرارة مختلفة (%) | |||
| 4 درجة مئوية | 16 درجة مئوية | 21 درجة مئوية | 30 درجة مئوية | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
يخففمنتجات البروتين المقطوعة الموصى بها من شركة Fusion Tag
| منتج اسم | منتج نبني مصفر | |
| تيف البروتياز | UCF.MEالعلامة التجارية بروتياز rTEV | 20427اللغة الاسبانية |
| إنتيروكيناز | إنتيروكيناز، معاد التركيب | 20395ES |
| سومو بروتياز | سومو بروتياز | 20410ES |
| 3C البروتياز | 3C البروتياز | 20409ES |
مراجع:
[1] باريخ الأول، كواتريكاساس ب. كروماتوغرافيا التقارب [م]. فوكس سانجوينيس، 1972، 23 (1-2): 141-146. DOI: 10.1159/000466530.
[2] Paththamperuma C، Page R C. اختبار إزالة التتابع الفلوري لنشاط بروتياز TEV[J]. الكيمياء الحيوية التحليلية، 2022، 659: 114954.