الأخبار العاجلة! لقد نجحت Yeasen Biology ، بالتعاون مع شركة Molefuture التابعة لها ، إلى تطور Ligase T4 DNA عالي الحرار ، مما أدى إلى مدة صلاحية أطول

نبذة عن T4 DNA Ligase

ومع ذلك، لا يزال T4 DNA Ligase يواجه بعض التحديات في التطبيقات العملية، بما في ذلك ضعف الاستقرار، أو الربط العالي بين المحول والمحول، أو انخفاض إنتاج مكتبة الحمض النووي. قد تؤدي هذه المشكلات إلى انخفاض الكفاءة التجريبية، وانخفاض جودة البيانات، وضعف إمكانية تكرار النتائج التجريبية، وانخفاض نقاء المنتج، وبالتالي التأثير على الفعالية الإجمالية لتجارب البيولوجيا الجزيئية ودقة بيانات التسلسل. لمعالجة هذه المشاكل، قامت Yeasen، استنادًا إلى برنامج ZymeEditor المبتكر التابع لشركتها الفرعية Molefuture، بتطوير برنامج جديد يسمى ZymeEditor.™ قامت منصة تطور الإنزيم بإجراء تطور إنزيمي على رباط الحمض النووي T4.

الشكل 1 رسم تخطيطي لمبدأ تفاعل إنزيم ربط الحمض النووي T4[1]

الفحص التجريبي الرطب والجاف المتكرر للحصول على إنزيم T4 DNA Ligase عالي الأداء

إن إنزيم ربط الحمض النووي T4، وهو إنزيم ربط يعتمد على ATP، يتألف من مجال ربط الحمض النووي الحلزوني المضغوط (DBD)، ومجال نيوكليوتيديل ترانسفيراز (NTase)، ومجال OB-fold. بناءً على بنية البروتين، فإن Yeasen's فريق تم تحليل البقايا التي تمتد على مسافات تتراوح من 5 إلى 20 أنجستروم حول ركيزة الحمض النووي، ثم تم إجراء فحص حاسوبي وتحليل البنية والوظيفة باستخدام أدوات حسابية متقدمة. خلال هذه العملية، قام الفريق لقد لاحظوا حلقة مرنة تقع بعيدًا عن الجيب النشط. وبتوجيه من حسابات الطاقة، تمكن الفريق من تحديد صمم الفريق عمليات قطع في منطقة الحلقة هذه، وافترضوا أنها قد لا تؤثر بشكل كبير على وظيفة الربط ولكنها قد تؤثر على الاستقرار الهيكلي العام. وعلاوة على ذلك، وقد قمنا بدمج تسلسلات الإجماع المتوافقة لتصميم الطفرات، وربط هذا التحليل بالاعتبارات البنيوية والوظيفية، كما هو موضح في الشكل أدناه.

الشكل 2 بنية رباط الحمض النووي T4

بالإضافة إلى التصميم العقلاني، تم إجراء التطور الموجه لـ T4 DNA ligase باستخدام طريقة MTPS من خلال فحص الاستقرار والنشاط والنشاط المتبقي. ومكتبة تضم أكثر من 104 تم فحص الطفرات. وبعد تحليل شامل لبيانات الطفرات، تم اختيار المرشحين الواعدين للتنقية والاختبار الدقيق. ثم خضعت جميع الفائزين الذين تم الحصول عليهم من خلال التصميم العقلاني والتطور الموجه لتوصيف مفصل بعد تنقية دقيقة، شملت تقييمات النشاط والاستقرار وربط المحول الذاتي وربط شظايا الحمض النووي وإنتاج الحمض النووي. بناءً على الطفرات G1، قام الفريق بتحليل الطفرات التي تم الحصول عليها من خلال التصميم العقلاني والتطور الموجه. أجرى الباحثون عملية خلط الحمض النووي وتصميم الطفرة الموجهة المجمعة للحصول على طفرات استثنائية تلبي متطلبات التطبيقات المتنوعة.

من الطفرة إلى المنتج التسويقي من خلال جولات متعددة من التحقق من التسلسل

ال محرر زيمالعلامة التجارية نجحت منصة تطور الإنزيم في تطوير طفرة ربط الحمض النووي T4 بنجاح مع استقرار حراري عالي، وإنتاجية مكتبة عالية، وربط ذاتي منخفض للمحول من خلال تقنية تطور الإنزيم. تم إطلاق T4 DNA Ligase المحسن حاليًا بنجاح - Hieff® Versatile T4 DNA Ligase (600 U/μL) (Cat#12996ES). يتفوق هذا المنتج على إنزيم T4 DNA Ligase البري التقليدي من حيث كفاءة الربط والاستقرار الحراري، وقد تم التحقق منه من خلال التسلسل عالي الإنتاجية، مما يضمن جودة ممتازة.

عرض البيانات

1.استقرار حراري أعلى

تم إخضاع طفرات T4 DNA Ligase من Yeasen للمعالجة الحرارية عند 42 درجة مئوية لمدة 0 و2 و4 ساعات، وتمت مقارنتها مع Ligases DNA T4 من البائع Q وN وA وT.وبعد ذلك، تم إنشاء مكتبة DNA كاملة الجينوم باستخدام 1 ميكروجرام من gDNA البقري المجزأ باستخدام مجموعة إنشاء مكتبة DNA من Yeasen (رقم القطعة 12927ES) لمقارنة الاستقرار الحراري لـ T4 DNA Ligase.

الشكل 3 اختبار الاستقرار الحراري عند 42 درجة مئوية

نتائج:

الاستقرار الحراري: Yeasen ≈ البائع N ≈ البائع A > البائع T > البائع Q.

2. زيادة إنتاجية المكتبة

تم اختبار الطفرة T4 DNA Ligase من Yeasen لإنتاج المكتبة عند مستويات إدخال DNA العالية والمنخفضة، مقارنةً بـ T4 DNA Ligases من البائع Q وN وA وT. تم استخدام مجموعة إنشاء مكتبة DNA من Yeasen (رقم القطعة 12927ES)، مع إدخال 1 ميكروجرام و0.5 نانوجرام من gDNA البقري المجزأ لإنشاء مكتبات DNA.

الشكل 4 تحليل إنتاج مكتبة الحمض النووي
نتائج:
عائد المكتبة (1 ميكروغرام من gDNA): Yeasen > البائع Q ≈ البائع T ≈ البائع A > البائع N. عائد المكتبة (0.5 ميكروغرام من gDNA): Yeasen ≈ البائع Q ≈ البائع A ≈ البائع T > البائع N.

3. ربط المحول السفلي ذاتيًا

تمت مقارنة الطفرة T4 DNA Ligase من Yeasen مع T4 DNA Ligases من Vendor Q وN وA وT للربط الذاتي للمحول. تم استخدام مجموعة بناء مكتبة الحمض النووي Yeasen (رقم القطعة 12927ES)، مع إدخال 0 نانوغرام و0.5 نانوغرام من gDNA البقري المجزأ لبناء مكتبات الحمض النووي للجينوم الكامل.

الشكل 5 بيانات الربط الذاتي للمحول مع مدخلات gDNA بمقدار 0 نانوجرام (يسار) و0.5 نانوجرام (يمين)
نتائج:
1) معدل ربط المحول الذاتي (0 نانوجرام من الحمض النووي الجيني): البائع N > Yeasen > البائع T > البائع A > البائع Q.
2) معدل ربط المحول الذاتي (0.5 نانوجرام من الحمض النووي الجيني): Yeasen > البائع T > البائع Q ≈ البائع N > البائع A.

اتصل بنا

لقد نجحت شركة Yeasen في التغلب على القيود التي تفرضها ربيطات الحمض النووي T4 التقليدية، حيث تقدم منتج ربيطات الحمض النووي T4 الذي يتميز بالاستقرار الحراري، وإنتاجية المكتبة، والربط الذاتي للمحول. وفي هذه العملية، جمعت الشركة مكتبة غنية من الطفرات، مما يوفر للباحثين مجموعة متنوعة من الخيارات لتلبية الاحتياجات التجريبية المختلفة. إذا كنت مهتمًا بمنتجاتنا أو طفرات ربيطات الحمض النووي T4، فلا تتردد في الاتصال بنا من خلال الطرق التالية.
بريد إلكتروني: order1@Yeasen.com (نحن)
الهاتف: +1 240-472-6069 (الولايات المتحدة)
بالإضافة إلى ذلك، تقدم شركة Yeasen مجموعة من منتجات سلسلة T4 DNA ligase. انقر فوق رابط المنتج للاستعلام عن معلومات المنتج

سلسلة منتجات Yeasen T4 DNA Ligase

وضع المنتج

اسم المنتج

رقم القط.

استقرار حراري عالي ومعدل ربط ذاتي منخفض

هييف® ربطة الحمض النووي T4 متعددة الاستخدامات (600 وحدة/ميكرولتر)

12996ES

ربط سريع وفعال، وبقايا منخفضة، ومناسب تمامًا لاحتياجات الكشف عن مسببات الأمراض.

ربطة الحمض النووي T4 السريعة (400 وحدة/ميكرولتر)

10299ES

نموذج عالمي

ربطة الحمض النووي السريعة T4 (400 وحدة/ميكرولتر)

10301ES

مراجع

[1] شومان س. رباطات الحمض النووي: التقدم والآفاق[ج].مجلة الكيمياء الحيوية، 2009، 284(26):17365-17369.

سؤال