1. مادة الإنزيم الأساسية - بوليميراز الحمض النووي Taq

مع توسع مجالات اختبار التطبيقات وزيادة الطلب في السوق، لم يعد بوليميراز الحمض النووي Taq من النوع البري قادرًا على تلبية المتطلبات بالكامل. قامت منصة تعديل الإنزيم ZymeEditor™ من Yeasen بتعديل بوليميراز الحمض النووي Taq بشكل شامل وموجه لتلبية احتياجات التطبيقات المختلفة، مما أدى إلى إطلاق سلسلة من بوليميرازات الحمض النووي Taq ذات البداية الساخنة المناسبة للتطبيقات المختلطة مسبقًا والمقاومة للمثبطات والنظيفة للغاية وغيرها.

• استقرار فائق: تم تركيبه في محلول مسبق الخلط كامل يحتوي على بادئات ومجسات، بعد العلاج عند 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام، لا يوجد تغيير في الكشف عن التركيز المنخفض.

الشكل 1: باستخدام حمض HBV النووي كقالب، تم تحضير محلول خليط مسبق كامل لـ qPCR باستخدام 10726ES، وتم اختبار جميع المكونات باستثناء القالب من أجل الثبات المتسارع عند 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام. أظهرت النتائج عدم وجود تغييرات كبيرة في قيم Ct وقيم الفلورسنت عند تركيزات عالية ومتوسطة ومنخفضة، مما يشير إلى أن محلول الخليط المسبق المحضر باستخدام 10726ES يتمتع بأداء مستقر.

• بقايا gDNA المضيفة منخفضة: يكون الحمض النووي الجينومي المتبقي لـ E. coli أقل من 0.5 نسخة لكل 100 وحدة.

الشكل 2: النطاق الخطي للحمض النووي الجينومي لـ E. coli: 30 بيكو جرام/ميكرولتر إلى 300 بيكو جرام/ميكرولتر، مع معامل ارتباط R2 يبلغ 0.9999. (ب) الحمض النووي الجينومي المتبقي لـ E. coli في ثلاث دفعات من بوليميراز Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA أقل من 0.5 نسخة لكل 100 وحدة.

2. مادة الإنزيم الأساسية - النسخ العكسي

باعتبارها أحد المكونات الرئيسية لتفاعل RT-qPCR، يجب أن تتمتع النسخ العكسي بسرعة نسخ عكسي أسرع، وعائد تخليق أعلى، ومقاومة أفضل للحرارة. للحصول على نسخ عكسي أكثر ملاءمة لتفاعل RT-qPCR، طورت Yeasen Biotech سلسلة Hifair® من النسخ العكسي القائمة على M-MLV من خلال التعديل الجيني.تتميز هذه الإنزيمات بنشاط RNaseH أقل، واستقرار حراري أعلى، وقدرات تخليق مستمرة أقوى.

• يمكنه تحمل درجة حرارة التفاعل البالغة 58 درجة مئوية وهو مناسب للنسخ العكسي لقوالب الحمض النووي الريبي المعقدة

الشكل 3: تم تحضين Hifair® V Reverse Transcriptase والعلامة التجارية المستوردة T* reverse transcriptase عند 55 درجة مئوية و58 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة للكشف عن نشاط الإنزيم المتبقي. تظهر النتائج أن Hifair® V Reverse Transcriptase يحافظ على نشاط بنسبة 70% بعد الحضانة عند 58 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، متجاوزًا العلامة التجارية المستوردة بشكل كبير.

• معدل اكتشاف متفوق في RT-qPCR مقارنة بالعلامات التجارية الأخرى، مع نطاق اكتشاف يتراوح من 1 بيكو جرام إلى 1 ميكروجرام

الشكل 4: باستخدام إجمالي الحمض النووي الريبي لخلايا 293T بتركيزات تتراوح من 1 بيكو جرام إلى 1 ميكروجرام (7 تدرجات) كقالب، تم إجراء النسخ العكسي باستخدام Hifair® V one-step RT-gDNA digest SuperMix لـ qPCR (Cat#11142)، V*، وT*. ثم تم إخضاع cDNA الناتج لـ qPCR للتحليل الكمي. تشير النتائج إلى أن حساسية 11142ES يمكن أن تصل إلى 1 بيكو جرام، مع معدل اكتشاف يفوق معدل المنتجات المنافسة.

3. إنزيمات أخرى ومثبطات الإنزيم: مثبط RNase، إنزيم UDG

تقدم شركة Yeasen Biotech مجموعة متنوعة من الإنزيمات ومثبطات الإنزيمات التي تم التحقق من صحتها لتطبيقات التشخيص المخبري الصناعي، بما في ذلك مثبطات RNase وإنزيمات UDG، مما يوفر مجموعة غنية من حلول المواد الخام عالية الجودة لتطوير وإنتاج مجموعة واسعة من منتجات التشخيص المخبري. تُستخدم هذه المنتجات المرتبطة بالإنزيمات على نطاق واسع في حماية منتجات هدف الكشف الجزيئي.

RNase المانع:تقوم شركة Yeasen بتنقية مثبطات RNase المعاد تركيبها من الفئران/الخنازير في صورة قابلة للذوبان داخل البكتيريا القولونية، والتي يمكنها تثبيط أنواع مختلفة من RNases (RNase A، B، C) على نطاق واسع دون تثبيط نشاط البوليميرازات. وقد تم التحقق من صحة هذه المثبطات للاستخدام على نطاق واسع في تطبيقات متعددة مثل RT-PCR/qPCR، وRNA-seq، واستنساخ cDNA، وبناء المكتبة. بالإضافة إلى مثبطات RNase التقليدية، طورت شركة Yeasen أيضًا مثبطات RNase المعالجة بتقنية UCF.ME® ذات البقايا المنخفضة للغاية، والتي تحتوي على بقايا مضيفة أقل وهي مناسبة للتطبيقات ذات المتطلبات الأكثر صرامة للبكتيريا الخلفية، مما يساعد في حل تدخل البكتيريا الخلفية في الكشف عن مسببات الأمراض وتعزيز دقة الكشف.

جليكوزيلاز اليوراسيل DNA (إنزيم UDG/UNG):يمكن أن يؤدي استخدام إنزيم يوراسيل-دي إن إيه جليكوزيلاز (UDG) مع dUTP إلى إنشاء نظام لمنع تلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل. يمكن أن يتجنب إنزيم ييشينغ منخفض UDG، والذي يتميز بالحرارة، النشاط المتبقي لإنزيمات UDG التقليدية بعد التعطيل، والذي قد يتسبب في تدهور منتجات التضخيم المحتوية على dU في درجة حرارة الغرفة. كما يمنع النتائج الإيجابية الكاذبة في نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل الناتجة عن البكتيريا الخلفية الموجودة في الإنزيمات الجزيئية. وهذا أمر بالغ الأهمية لتحديد مسببات الأمراض المعدية بدقة والمساعدة في التشخيص السريري للعدوى والأمراض المعدية.

جسم مضاد لبوليميراز الحمض النووي Taq:يعد التضخيم غير المحدد أحد القضايا الرئيسية التي تؤثر بشكل كبير على أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل، ويمكن لتقنية البدء الساخن أن تقلل بشكل فعال من التضخيم غير المحدد. يتميز إنزيم البدء الساخن المعدل بالأجسام المضادة بكفاءة إغلاق عالية وأداء ممتاز، حيث يكون مستقرًا في درجة حرارة الغرفة مع معدل إطلاق سريع لنشاط الإنزيم.لا يعمل إنزيم Taq ثنائي الأجسام المضادة الذي طورته شركة Yisheng Biotech على إغلاق نشاط بوليميراز 5'→3' لإنزيم Taq فحسب، بل إنه يعمل أيضًا على إغلاق نشاط إكسونوكلياز 5'→3' في نفس الوقت. يمنع هذا النهج المزدوج بشكل فعال التضخيم غير المحدد الناجم عن الاقتران الخاطئ أو ثنائيات البادئ، كما يمنع أيضًا توليد إشارات غير محددة بسبب تدهور المجسات أو البادئات، وبالتالي تعزيز استقرار الكواشف بشكل مضاعف.

4. مزيج رئيسي عالمي عالي الأداء من أنبوب واحد qPCR

تقدم شركة Yeasen Biotech كواشف qPCR عالية الجودة، تتميز ببوليميراز Taq عالي الأداء مع نظام تخزين محسن. توفر الشركة مجموعة من المنتجات، بما في ذلك مخاليط رئيسية عالمية ومخاليط رئيسية متعددة الأغراض ومخاليط رئيسية للتصنيف الجيني ومخاليط رئيسية مجففة بالتجميد. تتميز هذه الكواشف بسهولة الاستخدام والحساسية العالية والاستقرار القوي، مما يسرع من تطوير منتجات التشخيص الجزيئي الخاصة بك.

• تنوع جيد：مناسب لأنواع متعددة من البادئات والمجسات المتعددة (تم التحقق من أكثر من 40 نوعًا مختلفًا من الأهداف)، وله أداء تضخيم ممتاز؛
• ل استقرار الخلطة المسبقة بالكامل: الثبات عند 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا، و4 درجات مئوية لمدة 28 يومًا، والتجميد والذوبان المتكرر 50 مرة؛

• حساسية عالية وخصوصية جيدة: الحساسية يمكن أن تكشف عن 0.25 نسخة/ميكرولتر، وخصوصية 48 حفرة ليس لها ذروة سلبية؛
• دعم البرنامج السريع:متوافق مع البرنامج السريع، 30 دقيقة يمكن أن تنتج نتائج؛
• نظام مكافحة التلوث dUP/UDG: تم تقديم نظام مكافحة التلوث dUTP/UDG لمنع تلوث الهباء الجوي بشكل فعال؛
• تطبيق متعدد المنصات والأنظمة: بيو-راد CFX96، ABI Q5، 7500، سلان، تيانلونغ، إلخ.

الشكل 5: بناءً على دراسة استقرار الكاشف المختلط مسبقًا، تمت معالجة 16710ES بثلاث طرق مختلفة (4 درجات مئوية، و37 درجة مئوية، ودورات التجميد والذوبان). تمت معالجة المجموعات التجريبية عند 4 درجات مئوية و37 درجة مئوية لمدة 7 أيام على التوالي، وخضعت لـ 50 دورة تجميد وذوبان، بينما تم تقييم مجموعة التحكم (المخزنة عند -20 درجة مئوية) من حيث الاستقرار تحت أربعة أنظمة تضخيم متعددة (المجموعات 1 و2 و4 هي أنظمة تضخيم رباعية، والمجموعة 3 هي نظام تضخيم ثلاثي). أظهرت النتائج أن انحراف قيم Ct (ΔCt) بين المجموعتين التجريبية والضابطة كان في حدود ±0.5، وكان انحراف قيمة الفلورسنت في حدود 15٪، مما يثبت أن الكاشف المختلط مسبقًا من Yeasen يتمتع بثبات ممتاز في التضخيم المتعدد.

5. مزيج رئيسي عالمي عالي الأداء لـ RT-qPCR

تدمج كواشف RT-qPCR بخطوة واحدة الأداء المتفوق لإنزيمات النسخ العكسي والإنزيمات ذات البداية الساخنة، بالإضافة إلى نظام تخزين مؤقت محسن، مما يتيح الكشف السريع والحساس عن قوالب النسخ أحادية الرقم. وقد تم التحقق من صحة هذه الكواشف من قبل أسواق العملاء المختلفة بما في ذلك أمراض الجهاز التنفسي والأوبئة الحيوانية وأنظمة البحث، ويمكنها تلبية احتياجات اتجاهات التطبيق المختلفة.

• تنوع جيد：مناسب لتضخيم qPCR والكشف عن الأحماض النووية للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض والجينومات البشرية والنباتات والأنواع الأخرى؛
• حساسية عالية：يعمل نظام التخزين المؤقت المحسن بعناية على تحسين حساسية الكشف عن القوالب ذات التركيز المنخفض حتى 250 نسخة / مل؛
• نظام مكافحة التلوث dUP/UDG：تم تقديم نظام UDG المضاد للتلوث الحراري dUTP/ لتقليل تلوث الهباء الجوي للمنتجات بكفاءة، وتقليل النتائج الإيجابية الكاذبة، وضمان نتائج حقيقية؛
• دعم البرنامج السريع: متوافق مع البرنامج السريع، 40 دقيقة يمكن أن تنتج نتائج؛
• استقرار فائق: يتم تخزينها في درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا، مع تكرار التجميد والتذويب 10 مرات.

تقييم حساسية الكشف

الشكل 6: باستخدام مزيج RT-qPCR من Yeasen (16630ES) ومنتج مماثل من Supplier-A، تم الكشف عن أربعة أهداف مسببة للأمراض في وقت واحد (فيروس نظير الإنفلونزا البشري HPIV2، وفيروس نظير الإنفلونزا البشري HPIV4، وفيروس الجهاز التنفسي المخلوي HRVA، وفيروس الراينو RSVA). أشارت النتائج إلى أن حساسية الكشف لمنتج 16630ES كانت أعلى من حساسية منتج Supplier-A.

توصية المنتج

ملاك类型	产品名称	ملاك
سلسلة إنزيمات تفاعل البوليميراز المتسلسل	بوليميراز الحمض النووي Hieff UNICON® Hotstart E-Taq، 5 وحدة/ميكرولتر	10726ES
	Hifair® V النسخ العكسي (200 وحدة/ميكرولتر)	11300ES
	جليكوزيلات اليوراسيل DNA (UDG/UNG)، غير قابلة للتأثر بالحرارة، 1 وحدة/ميكرولتر	10303ES
	مثبط RNase الفأري (40 وحدة / ميكرولتر)	10603ES
	مزيج dNTP (25 مليمول لكل منهما)	10125ES
سلسلة إنزيمية أحادية فائقة النظافة من تفاعل البوليميراز المتسلسل مع بقايا مضيفة منخفضة للغاية	بوليميراز الحمض النووي Taq الحساس من Hieff UCF.ME® Hotstart (5 وحدة/ميكرولتر)	14314ES
	إنزيم النسخ العكسي Hifair UCF.ME® V (200 وحدة/ميكرولتر)	14608ES
	UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG)، قابل للتغير بالحرارة، 1 وحدة/ميكرولتر	14466ES
	جامعة وسط فلوريدا.مثبط الريناز الفأري ME® (40 وحدة/ميكرولتر)	14672ES
سلسلة Lyo-Ready PCR أحادية الإنزيم	بوليميراز الحمض النووي Hieff UNICON® HotStart E-Taq، خالٍ من الجلسرين (5 وحدة/ميكرولتر)	14316ES
	Hifair® V Reverse Transcriptase، خالٍ من الجلسرين (600 وحدة/ميكرولتر)	11301ES
	جليكوزيلات اليوراسيل DNA (UDG)، غير قابلة للتأثر بالحرارة (1 وحدة/ميكرولتر، خالية من الجلسرين)	10707ES
	مثبط RNase الفأري (200 وحدة / ميكرولتر، خالٍ من الجلسرين)	10703ES
مزيج رئيسي من RT-qPCR	طقم اختبار RT-qPCR متعدد المراحل Hifair® C203P1 (UDG Plus)	16630ES
	طقم اختبار RT-qPCR من Hifair® V Multiplex One Step (UDG Plus)	11899ES
	طقم Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR	11831ES
مزيج رئيسي من qPCR	مزيج Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR (أنبوب واحد)	16710ES
	مزيج رئيسي متعدد الاستخدامات Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR (UDG plus)	13891ES
	مزيج Hieff Unicon® Superpro 1 TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11827ES
	مزيج Hieff Unicon® Purepro 1 TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11853ES
	مزيج رئيسي متعدد الاستخدامات Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR (UDG plus)	11893ES