تتميز تقنية التشخيص الجزيئي عن طرق الكشف المختلفة بحساسيتها وخصوصيتها الاستثنائية. ومع ذلك، تعاني الكواشف التشخيصية السائلة التقليدية من عيوب مثل تكاليف النقل المرتفعة ومدة الصلاحية المحدودة، مما يحد من فائدتها. استجابةً لاحتياجات السوق المتطورة والتقدم التكنولوجي، ظهرت كواشف الاختبار التشخيصي الجزيئي المجففة بالتجميد. توفر المنتجات المجففة بالتجميد العديد من المزايا مقارنة بكواشف الاختبار السائلة التقليدية، بما في ذلك:
- مستقرة في درجة حرارة الغرفة - الهيكل ثلاثي الأبعاد ثابت، مما يضمن استقرار الإنزيم ونظام التفاعل في درجة حرارة الغرفة. لا حاجة إلى النقل والتخزين في سلسلة التبريد في الثلاجات أو التخزين البارد، مما يمكن أن يطيل العمر الافتراضي للمنتجات.
- سهل الاستخدام- لا حاجة إلى عمليات التجميد والتذويب المتكررة، وتوزيع السوائل، وما إلى ذلك.
- انخفاض التكلفة- لا حاجة إلى النقل البارد والتخزين المجمد، مما يقلل بشكل فعال من تكاليف النقل والتخزين.
- دقة عالية- يتم استخدام نواة مجهرية مجففة بالتجميد في تفاعل واحد لتقليل خطأ التركيب أثناء تحضير الكاشف، وتقصير وقت التشغيل، ومنع فقدان النشاط البيولوجي أثناء تحضير السائل، وتحسين الدقة بشكل أساسي.
- الاستخدام المرن- لا يقتصر على عدد العينة، بل يمكن أيضًا تحميل عينة واحدة.
غالبًا ما تتضمن الإنزيمات الجزيئية التقليدية أو الخلطات الجاهزة تركيزات عالية من الجلسرين كعامل حماية من التجمد ومثبت. ومع ذلك، فإن وجود الجلسرين في الكاشف يمكن أن يعطل سلامة بنية الماء، مما يجعل من الصعب التخلص من الماء بشكل فعال. وهذا بدوره له تأثير ضار على بنية واستقرار المنتج المجفف بالتجميد. لذلك، عند اختيار التجفيف بالتجميد، يُنصح باختيار الكواشف الخالية من الجلسرين.
علاوة على ذلك، في التطبيقات الحساسة بشكل خاص لتركيبة الكواشف، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي، فإن استخدام إنزيمات عالية التركيز خالية من الجلسرين يمكن أن يخفف بشكل أكبر من تأثير الجلسرين على تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي. لا يقلل هذا النهج من التداخل فحسب، بل يوسع أيضًا من إمكانية تحسين نظام كاشف الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي.
YEASEN خالي من الجلسرين محلول انزيم جزيئي
أنشأت شركة YEASEN منصة شاملة للبحث والتطوير والإنتاج للإنزيمات الجزيئية الخالية من الجلسرين، وحققت إنتاجًا واسع النطاق للعديد من الإنزيمات الجزيئية الخالية من الجلسرين من خلال اختيار المواد والتحكم البيئي وتحسين العملية وضمان الجودة.
- تجربة عملية غسيل الكلى
تحسين عملية غسيل الكلى لحجم ثابت من إنزيم الجلسرين:
- البحث عن محلول غسيل الكلى الأمثل للإنزيمات الجزيئية المختلفة؛
- البحث عن حلول تخزين مستقرة للإنزيمات الجزيئية المختلفة للسماح بالتخزين طويل الأمد عند 4 درجات مئوية أو -20 درجة مئوية.
- تضخيم عملية الترشيح بالتدفق المماسي
بناءً على فحص عملية غسيل الكلى، يمكن تحديد مكونات عازل غسيل الكلى الأمثل وحلول التخزين المثلى الخاصة بها. بعد ذلك، يمكن استخدام عملية الترشيح بالتدفق المماسي (المعروفة أيضًا باسم UFDF) لاستبدال عازل المحلول.
تدور العوامل الحاسمة في تطوير عملية الترشيح بالتدفق المماسي حول اختيار صيغة محلول التخزين وصيغة محلول الغسيل والترشيح، بالإضافة إلى ضغط الغشاء ومعدل التدفق المطبق أثناء الترشيح. وقد أسست شركة YEASEN نهجًا موحدًا للترشيح بالتدفق المماسي، مما يتيح التحديد السريع لحجم الغسيل والترشيح ومعايير الوقت بناءً على محتوى الجلسرين المطلوب في الإنزيم الجزيئي المستهدف. يساعد هذا النهج في توفير المواد والوقت.
- ضبط الجودة
تم تصميم عمليات التحضير المختلفة الموضحة أعلاه لاستيعاب المتطلبات المتنوعة لأحجام وأنواع مختلفة من المنتجات. لتقييم استقرار المنتج عبر دفعات مختلفة وفي نفس العملية، طورت YEASEN نظامًا شاملاً لتوصيف معلمات الأداء. يسمح هذا النظام بإجراء تقييم شامل لتأثير التدابير الخالية من الجلسرين من وجهات نظر متعددة. تشمل طرق التوصيف تحديد كمية البروتين، وتقييم نشاط الإنزيم (معدل الاسترداد)، وتحليل محتوى الجلسرين، وتقييم محتوى العامل الوقائي، وتقييم أداء الإنزيم، من بين أمور أخرى.
منتجات إنزيم جزيئي خالية من الجلسرين من YEASEN
لقد اعتمدت شركة YEASEN طريقة تحضير إنزيم جزيئي خالٍ من الجلسرين لإنتاج إنزيمات لا تحتوي على الجلسرين من تلك التي تحتوي في البداية على الجلسرين. وفي الوقت الحالي، يمكننا توفير كميات كبيرة من المواد الخام الإنزيمية الخالية من الجلسرين المناسبة لتطبيقات qPCR/RT-qPCR وLAMP/RT-LAMP. وقد تم تصميم هذه المواد الخام للتجفيف بالتجميد في الاختبارات التشخيصية، مع الحفاظ على نفس مستوى الجودة والأداء مثل نظيراتها السائلة.
منتجات إنزيمية جزيئية خالية من الجلسرين
تم تحضير خلطات qPCR الأولية باستخدام ييسن 14316ES بوليميراز الحمض النووي E-Taq والإنزيمات الخالية من الجلسرين المقابلة، على التوالي، ونموذج 105، 104 و 103 تم تضخيم عدد النسخ/مل في نفس الوقت. أظهرت النتائج أن تأثير التضخيم لـ 14316ES الخالي من الجلسرين كان متوافقًا مع تأثير الجلسرين المحتوي على تم إجراء اختبار الاستقرار المتسارع لـ 14316ES عند 37 درجة مئوية. أظهرت النتائج أن أداء التوسع لـ 14316ES كان متسقًا مع أداء التحكم غير المتسارع بعد 54 يومًا من المعالجة المتسارعة عند 37 درجة مئوية. أظهرت النتائج أعلاه أنه لم يكن هناك فرق في أداء الإنزيم الخالي من الجلسرين والإنزيم المحتوي على الجلسرين النظير، وكان الاستقرار جيدا.
- منتجات مجففة بالتجميد باستخدام تقنية RT-qPCR: يتم تسريعها عند درجة حرارة 50 درجة مئوية لمدة 25 يومًا، وتتمتع المنتجات المجففة بالتجميد بثبات في الشكل والأداء
تم تحضير Yeasen 14316ES في محلول RT-qPCR مخلوط مسبقًا، والذي تم تجفيفه بالتجميد واختباره من أجل الثبات المتسارع عند 50 درجة مئوية لمدة 25 يومًا. في نفس الوقت، تم إنتاج 105، 104 و 103 تم تضخيم نسخ/مل من قالب الفيروس الكاذب لفيروس كورونا الجديد.وأظهرت النتائج أن مورفولوجيا المنتج وقيمة Ct وقيمة الفلورسنت لم تشهد أي تغيير كبير قبل وبعد التجفيف بالتجميد، وكان منتج التجفيف بالتجميد يتمتع بثبات جيد.
الشكل 4: بيانات اختبار الاستقرار المتسارع لمنتجات RT-qPCR المجففة بالتجميد- منتجات مجففة بالتجميد باستخدام RT-LAMP: يتم تسريعها عند 45 درجة مئوية لمدة 30 يومًا، وتتمتع المنتجات المجففة بالتجميد بثبات في الشكل والأداء
تم تحضير خليط RT-LAMP باستخدام YEASEN 14405ES و11297ES، وتم إجراء اختبار الأداء بعد التجفيف بالتجميد. كانت فتحة التفاعل الإيجابي برتقالية وكانت فتحة التفاعل السلبي أرجوانية، مما أظهر تباينًا كبيرًا، وتم تفسير النتيجة بوضوح. بالإضافة إلى ذلك، لم يتغير شكل المنتجات المجففة بالتجميد بشكل كبير بعد 30 يومًا من التسارع عند 45 درجة مئوية. أظهرت النتائج أن المنتج المجفف بالتجميد كان مستقرًا في الشكل والأداء.
معلومات المنتج
| تصنيف | نأمي | رقم الكتالوج |
| منتجات إنزيمية خالية من الجلسرين لـ qPCR/RT-qPCR | طقم Hifair™ Lyo Multiplex One Step RT-qPCR -11831ES | 11831ES |
| بوليميراز الحمض النووي Hieff UNICON® HotStart E-Taq، خالٍ من الجلسرين | 14316ES | |
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| منتجات إنزيمية خالية من الجلسرين لـRT-LAMP | إنزيم النسخ العكسي Hifair® III، 600 وحدة/ميكرولتر، خالٍ من الجلسرين | 11297ES |
| بوليميراز الحمض النووي Bst Plus المجفف بالتجميد (60 وحدة/ميكرولتر، خالٍ من الجلسرين) | 14405ES |