إن تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الفلوري هو تجربة شديدة الحساسية تتطلب درجة عالية من الدقة في التشغيل من قبل العاملين في المختبر. لذلك، أثناء عملية تجربة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي، نواجه حتمًا مشاكل:
أولا: القضايا المتعلقة بالعوامل غير التجريبية
- يحتوي المختبر على العديد من مشاريع تجارب qPCR، والأجهزة مشغولة، مما يترك مخاليط التفاعل المعدة بعناية دون طريقة واضحة للتخلص منها.
- هناك العديد من العينات الكمية، ومهمة إضافة العينات شاقة، وهناك خطر حدوث أخطاء في إضافة العينات بسبب الدوار، مما يؤدي إلى نتائج تجريبية غير موثوقة.
- لا يمكن إكمال أوقات تشغيل الماكينة الطويلة، والعدد المحدود من التشغيلات التجريبية، والمهام التجريبية كما هو مخطط له على أساس منتظم.
- يتم استبدال المعدات المعملية بأجهزة جديدة، وهناك أجهزة كمية متعددة في المختبر، والكواشف الكمية غير متوافقة مع الأجهزة.
ثانياً: القضايا التي تحدها العوامل التجريبية
قضايا تحديد الكميات مع الجينات ذات الوفرة المنخفضة. تصميم البادئ المعقد وعمليات الفحص، والحساسية، وإمكانية إعادة إنتاج الآبار المكررة...
باعتبارها شركة مصنعة متمرسة مخصصة للبحث والتطوير في كواشف qPCR، فإن YEASEN لقد طورت بعناية محلولًا مسبقًا عالي الأداء لـ qPCR - هييف يونيكون™ مزيج ماستر SYBR Green qPCR أزرق عالمي، والذي يمكنه حل المشكلات التجريبية المذكورة أعلاه دفعة واحدة. يحل Universal ROX المستخدم في هذا المنتج محل ROX التقليدي، مما يعوض عن اختلافات المسار الضوئي عبر منصات الأجهزة المختلفة، مما يجعله مناسبًا لجميع أجهزة qPCR. بالإضافة إلى ذلك، يستخدم المنتج طريقة تعديل الأجسام المضادة ويتضمن إضافات تعزز تضخيم الجينات، مما يحسن بشكل كبير من أداء تضخيم المنتج. إنه يوازن بشكل مثالي بين احتياجات الأداء العالي للباحثين في المجتمع العلمي ومتطلبات الكفاءة العالية للمؤسسات الصناعية.
مميزات المنتج
- واسع أداة التوافق: ال خليط مسبق يتضمن أ محدد يكتب ل مرجع صبغ، إزالة ال يحتاج ل يُعدِّل ال روكس تركيز.
- سهل التتبع: ال أزرق خليط مسبق يسمح ل مباشر التصور ل يميز سواء ال عينة لديه كان تمت الإضافة، ببساطة بواسطة مراقبة ال لون.
- عالي استقرار: ال نظام يكون مُعد في غرفة درجة حرارة، و ال مختلط نظام يستطيع يكون مخزنة في 4 درجة مئوية ل أعلى ل 24 ساعات بدون أي يتغير في ال امتحان نتائج.
- سريع يثبت: متناسق مع كلاهما معيار و سريع البرامج، السماح ال كمي تجربة ل يكون مكتمل في مثل سريع مثل 46 دقائق.
- ممتاز التضخيم أداء: عالي تضخيم كفاءة، جيد الخصوصية، قادر ل الكشف الجينات في ال أعزب ينسخ رقم.
معلومات الطلب
تحديد موقع المنتج | اسم المنتج | قطة# |
خليط مسبق كمي عالمي عالي الحساسية | مزيج Hieff UNICON™ Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix | 11184ES |
تتبع الألوان حساسية عالية الفلورسنت كمية خليط مسبق | 11188ES | |
11189ES | ||
11190ES |
أداء المنتج
1. حساسية عالية: قادرة على اكتشاف نسخة واحدة فقط

الشكل 1. Hieff UNICON™ يمكن لمزيج Universal Blue المسبق الكشف بفعالية عن نطاق كمية القالب عبر 7 أوامر من حيث الحجم، مع كفاءة تضخيم عالية وعلاقة خطية جيدة ضمن نطاق خطي واسع. كان القالب المستخدم عبارة عن 2 ميكرولتر من البلازميد بتركيز 10^6 إلى 10^0 نسخة، مما أدى إلى تضخيم جين IL23R البشري.
2.ال كشف معدل و خصوصية نكون جيد: على نطاق واسع ملائم ل مكبرات الصوت مع 30-70% جي سي محتوى
الشكل 2. Hieff UNICON™ يُعد خليط Universal Blue المسبق الاستخدام على نطاق واسع في مكبرات الصوت التي تحتوي على نسبة 30-70% من GC، مما يضمن معدل اكتشاف عالي للغاية. باستخدام 2 ميكرولتر من 293T cDNA كقالب، تم تصميم 1000 زوج من البادئات لمكبرات الصوت التي يبلغ طولها 200 زوج قاعدي (محتوى GC 30%-70%) باستخدام برنامج Primer5، وتم تضخيم 27 من هذه المكبرات بشكل عشوائي.
3. دقة عالية: يمكن التمييز بدقة بين الاختلافات في تركيز القالب بمقدار 2 أضعاف
الشكل 3. هييف يونيكون™ بريمكس يونيفرسال بلو يمكن التمييز بدقة بين الاختلافات في تركيز القالب بمقدار ضعفين. كان القالب المستخدم عبارة عن تخفيف متدرج بمقدار ضعفين بمقدار 2 ميكرولتر من محلول مخزون cDNA 293T، مما أدى إلى تضخيم جين GAPDH.
4. إمكانية إعادة إنتاج الآبار المكررة بشكل جيد: 90 بئرًا مكررة
الشكل 4. Hieff UNICON™ يُظهِر خليط Universal Blue المسبق قابلية ممتازة للتكرار، حيث تُظهر منحنيات التضخيم لـ 90 بئرًا مكررة تطابقًا كبيرًا، وانحرافًا معياريًا لقيم Ct أقل من 0.2. باستخدام 1 ميكرولتر من cDNA 293T كقالب، تم تضخيم جين GAPDH.
5.استقرار جيد: يظل الخليط المسبق غير متأثر بأداء التضخيم حتى بعد تجميده وإذابته 50 مرة
دورات التجميد والذوبان | 0 مرة | 10 مرات | 30 مرة | 50 مرة |
متوسط القطر | 23.11 | 23.17 | 23.18 | 23.25 |
▲ق.ت | - | 0.06 | 0.07 | 0.14 |
الشكل 5. Hieff UNICON™ لا يظهر خليط Universal Blue المسبق أي تغيير في أداء التضخيم بعد تجميده وإذابته 50 مرة. باستخدام 1 ميكرولتر من cDNA 293T كقالب، تم تضخيم جين C2orf68 بخليط مسبق خضع لعدد مختلف من دورات التجميد والذوبان.
عميل فرد فعل
مصدر العينة: سلالة خلايا سرطان المبيض لدى الفئران ID8، HM1
مصدر العينة: الحمض النووي الريبوزي الدهني البربخي للفأر
مصدر العينة: RNA لأوراق نبات أرابيدوبسيس ثاليانا
الأدبيات ذات عامل التأثير المرتفع المنشورة جزئيًا باستخدام YEASEN qPCR Mix
[1] Li Y, Wang D, Ping X, et al. العلاج بالحرارة الموضعية يحفز تحول الدهون البيضاء إلى اللون البني ويعالج السمنة. Cell. 2022؛185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.(إذا = 66.850)
[2] Seki T, Yang Y, Sun X, et al. Brown-fat-mediated tumour suppressor by cold-altered global metabolism. Nature. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3. (إذا = 69.504)
[3] Chen P، Wang W، Liu R، وآخرون. التجربة الحسية الشمية تنظم تكوين الخلايا الدبقية عبر عامل النمو الشبيه بالأنسولين 1 العصبي. Nature. 2022؛606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.إذا = 69.504)
[4] Dong W، Zhu Y، Chang H، وآخرون. تحدد وحدة SHR-SCR مصير الخلايا القشرية البقولية لتمكين تكوين العقد. Nature. 2021؛ 589 (7843): 586-590. doi: 10.1038/s41586-020-3016-z.إذا = 69.504)
[5] Lu XY، Shi XJ، Hu A، وآخرون. التغذية تحفز تخليق الكوليسترول عبر المحور mTORC1-USP20-HMGCR. Nature. 2020؛ 588 (7838): 479-484. doi: 10.1038/s41586-020-2928-y.إذا = 69.504)
[6] Bi X، Wang K، Yang L، وآخرون. تتبع البصمات الجينية لهبوط الفقاريات في أسماك الزعانف الشعاعية غير العظمية. Cell. 2021؛ 184(5): 1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.(إذا = 66.850)
[7] Liu S, Hua Y, Wang J, et al. RNA polymerase III مطلوب لإصلاح كسور السلسلة المزدوجة للحمض النووي عن طريق إعادة التركيب المتماثل. Cell. 2021؛ 184(5): 1314-1329.e10. doi:10.1016/j.cell.2021.01.048.إذا = 66.850)
[8] Liu CX، Li X، Nan F، وآخرون. بنية وتحلل الحمض النووي الريبوزي الدائري ينظمان تنشيط PKR في المناعة الفطرية. Cell. 2019؛ 177 (4): 865-880.e21. doi: 10.1016 / j.cell.2019.03.046.إذا = 66.850)
[9] هان إكس، وانغ آر، وتشو واي، وآخرون. رسم خريطة أطلس خلايا الفأر بواسطة ميكروويل-سيك. 2018؛ 172(5): 1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.إذا = 66.850)
[10] Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. A bacterial phospholipid phosphatase inhibits host pyroptosis by hijacking ubiquitin. Science. 2022؛378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.(إذا = 63.714)
[11] Yu Q، Liu S، Yu L، وآخرون. إزالة ميثيل الحمض النووي الريبي تزيد من إنتاجية وكتلة نباتات الأرز والبطاطس في التجارب الميدانية. Nat Biotechnol. 2021؛ 39 (12): 1581-1588. doi: 10.1038/s41587-021-00982-9.إذا = 68.164)
[12] Han F، Liu X، Chen C، et al. Hypercholesterolemia risk-associated GPR146 هو مستقبل مقترن بالبروتين G يتيم ينظم مستويات الكوليسترول في الدم لدى البشر والفئران. Cell Res. 2020؛30(4):363-365. doi:10.1038/s41422-020-0303-z.(إذا=46.297)
[13] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2-expressing B cells Contributor to colonrectal cancer immunovesion. Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.(إذا = 43.474)
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G, et al. Microglia-derived PDGFB promotes neuronal potasylate currents to suppress basal sympathetic tonic and limit hypertension. Immunity. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.(إذا = 43.474)
[15] Wang X، Ni L، Wan S، وآخرون. درجة الحرارة المحمومة تتحكم بشكل حاسم في تمايز الخلايا التائية المساعدة 17 ومرضيتها. المناعة. 2020؛ 52(2): 328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006.(إذا = 43.474)
[16] Xiao J، Li W، Zheng X، وآخرون. استهداف 7-Dehydrocholesterol Reductase يدمج عملية التمثيل الغذائي للكوليسترول وتنشيط IRF3 للقضاء على العدوى. المناعة. 2020؛ 52 (1): 109-122.e6. doi: 10.1016 / j.immuni.2019.11.015.إذا = 43.474)
[17] Zhang X، Zhang C، Qiao M، وآخرون. استنفاد BATF في خلايا CAR-T يعزز النشاط المضاد للأورام من خلال تحفيز المقاومة ضد الإرهاق وتكوين خلايا الذاكرة المركزية. Cancer Cell. 2022؛40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.إذا = 38.585)
[18] Wang XY، Wei Y، Hu B، وآخرون. تعمل عملية تحلل الجلوكوز التي يقودها c-Myc على استقطاب الخلايا التنظيمية الوظيفية B التي تحفز الاستجابات الالتهابية المسببة للأمراض. Signal Transduct Target Ther. 2022؛7(1):105. نُشر في 18 أبريل 2022. doi:10.1038/s41392-022-00948-6.إذا = 38.104)
[19] Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. نُشر في 24 نوفمبر 2020. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.(إذا = 38.104)
[20]Ren Y, Wang A, Wu D, et al. التثبيط المزدوج للمناعة الفطرية والموت الخلوي المبرمج بواسطة بروتين الفيروس المضخم للخلايا البشرية UL37x1 يمكّن من تكاثر الفيروس بكفاءة. Nat Microbiol. 2022؛7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.إذا = 30.964)