مع التطور السريع للتكنولوجيا الحيوية، اجتذب علاج mRNA، كطريقة علاج ناشئة، الكثير من الاهتمام بسبب قابليته القوية للبرمجة وسرعة الاستجابة السريعة. في مجالات لقاحات mRNA والعلاج الجيني، يعد التوليف الفعال لـ mRNA عالي الجودة خطوة أساسية في تحقيق الأهداف العلاجية. خلال هذه العملية، يلعب بوليميراز T7 RNA (T7 RNAP) دورًا أساسيًا، حيث يمكنه تحفيز التوليف المختبري لـ mRNA بكفاءة.
على الرغم من أن T7 RNAP يلعب دورًا حاسمًا في تخليق mRNA، إلا أنه غالبًا ما ينتج RNA مزدوج السلسلة (dsRNA) كمنتج ثانوي في الممارسة العملية. dsRNA هو أحد السمات المميزة للعديد من الفيروسات، وبالتالي يتم التعرف عليه بسهولة بواسطة البروتينات المرتبطة بـ dsRNA داخل الخلايا، مما يؤدي إلى استجابات مناعية فطرية وردود أفعال التهابية. هذا يعني أنه إذا كانت تركيبات mRNA تحتوي على مستوى أعلى من dsRNA، فقد يؤدي ذلك إلى تنشيط مناعي غير ضروري، مما قد يؤثر على الفعالية العلاجية أو يسبب آثارًا جانبية خطيرة. يمكن أن يتداخل dsRNA المفرط أيضًا مع الوظيفة الطبيعية لـ mRNA، بما في ذلك كفاءة الترجمة واستقرار mRNA، مما يؤثر بشكل غير مباشر على فعالية علاج mRNA.
الشكل 1: تأثير المنتجات الثانوية لـ dsRNA وتفاعل T7 RNAP الأمثل.
لذلك، فإن تطوير وتبني أساليب فعّالة للحد من إنتاج dsRNA يشكل جزءًا أساسيًا من تطوير تقنية mRNA. وقد طور الباحثون استراتيجيات مختلفة، بما في ذلك استخدام بوليميرازات T7 RNA المحسنة، ونوكليوتيدات التعديل، وتحسين مخازن النسخ IVT، وعمليات التنقية اللاحقة. تستفيد Yeasen Biology من قدرات منصة التطور الموجهة ZymeEditor الخاصة بها لتطوير المادة الخام الأساسية للإنزيم بشكل مستمر لتخليق mRNA في المختبر - بوليميراز T7 RNA. لقد قمنا بتطوير بوليميراز RNA T7 منخفض dsRNA والذي يعمل على قمع نشاط RDRP لبوليميراز RNA T7، مما يقلل بشكل أساسي من تكوين dsRNA، وبالتالي خفض محتوى dsRNA بشكل كبير.
بيانات المنتج
العائد: أكثر من 9 ملغ/مل
محتوى dsRNA: تم تقليل محتوى dsRNA بشكل كبير بما لا يقل عن 10 مرات
كفاءة التغطية: أكثر من 99%
بوليميراز الحمض النووي الريبوزي ثنائي الرنا T7 منخفض عملية الفرز:
1) إنشاء مكتبة عشوائية وطريقة فحص عالية الإنتاجية FADS، ومكتبة طفرة عشوائية تضم أكثر من 10^6 تم عرضه.
2) تم استخدام التصميم شبه العقلاني وتقنية اللوحة الدقيقة لفحص مكتبة مشبعة بالموقع. أسفرت كلتا الطريقتين عن طفرات بوليميراز RNA T7 منخفضة في dsRNA. مع مراعاة محتوى dsRNA مع ضمان عدم انخفاض المؤشرات الأخرى (مثل النزاهة/كفاءة التغطية/العائد، وما إلى ذلك)، تم اختيار العديد من الطفرات وتم استخدام واحدة تسمى CleaScrip™ T7 للتطبيق التجاري.
بيانات المنتج
في سيناريوهات تطبيق الطول المختلفة، أظهر بوليميراز RNA T7 منخفض dsRNA انخفاضًا كبيرًا مقارنةً بكل من WT T7 والمنتجات التنافسية، مع ضمان عدم انخفاض العائد والنزاهة.
| طول القطعة | T7 RNA بول | أَثْمَر(ملجم/مل) |
نزاهة(%) | محتوى dsRNA (نانوغرام من dsRNA المنتج لكل 1 ميكروغرام من RNA) |
| 4ك | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
| كليسكريبت™ ت7 | 12.1 | 89.9 | 0.0129 | |
| شركة أ | 11.0 | 87.8 | 0.0323 | |
| 9 كيلو | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
| كليسكريبت™ ت7 | 9.0 | 82.0 | 0.0379 | |
| شركة أ | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
استخدام مع تركيز غطاء يبلغ 2.5 مليمول، لا يزال من الممكن تحقيق كفاءة تغطية ممتازة عبر أطوال مختلفة للشظايا مقارنة بالحيوانات البرية. بالإضافة إلى ذلك، لوحظ أيضًا أداء تعبير بروتيني متفوق على المستوى الخلوي.
| مدخل تناظري للغطاءمم) | كفاءة التغطية%)4ك | |
| وزن | انخفاض مستوى dsRNA | |
| 10 | 100 | 100 |
| 5 | 100 | 100 |
| 2.5 | 100 | 100 |
تم تقديم براءة اختراع في الولايات المتحدة.
معلومات المنتج
| اسم المنتج | رقم الكتالوج | مواصفة | مقدار |
| كليسكريبتالعلامة التجارية بوليميراز الحمض النووي الريبوزي T7 (dsRNA منخفض، 250 وحدة/ميكرولتر) | 10628ES | 100/2500/25000 وحدة دولية | 400 ميكرولتر/10 مل/100 مل |
| كليسكريبتالعلامة التجارية بوليميراز T7 RNA بدرجة GMP (dsRNA منخفض، 250 وحدة/ميكرولتر) | 10629ES | 100/2500/25000 وحدة دولية | 400 ميكرولتر/10 مل/100 مل |