يعتبر تحديد كمية الأحماض النووية، باعتباره أحد التجارب الأساسية في علم الأحياء الجزيئي، مؤثرًا بشكل مباشر على نتائج التجارب اللاحقة. تعد دقة تحديد كمية الأحماض النووية أمرًا بالغ الأهمية. في الوقت الحاضر، هناك طريقتان رئيسيتان لتحديد كمية مكتبة NGS، طريقة الامتصاص فوق البنفسجية، وطريقة الصبغة الفلورية.

تستخدم طريقة الامتصاص فوق البنفسجي مطيافًا ضوئيًا لقياس الامتصاص عند 260 نانومتر للحمض النووي والحمض النووي الريبي لتحديد الكميات. كما تقوم بتقدير نقاء الأحماض النووية عن طريق حساب نسبة OD260/OD280. ومع ذلك، فإن القيم المكتشفة معرضة بشدة للتداخل من الملوثات الأخرى مثل النيوكليوتيدات الحرة والأملاح والمركبات العضوية.

تعتمد عملية تحديد الكميات الفلورية باستخدام كيوبت على صبغات فلورية ترتبط بشكل خاص بالحمض النووي ثنائي السلسلة أو الحمض النووي أحادي السلسلة أو الحمض النووي الريبي أو البروتينات. عند الإثارة بواسطة مصدر ضوء بطول موجي محدد، تصدر الصبغات فلورية لا تتأثر بجزيئات الشوائب الأخرى التي قد تكون موجودة في العينة. وتتناسب شدة الفلورية مع تركيز الجزيئات المستهدفة في العينة.

الجدول 1. مقارنة بين طرق قياس الأحماض النووية السائدة

هدف	مضاد للأشعة فوق البنفسجية (نانودروب)	كيوبت DNA HS	كيوبت DNA BR	كيوبت RNA	كيوبت ssDNA
نوع الحمض النووي	DNA،RNA	الحمض النووي ثنائي الترابط	الحمض النووي ثنائي الترابط	الحمض النووي الريبوزي	الحمض النووي أحادي السلسلة، قليل النوكليوتيدات
تركيز العينة (نانوغرام/ميكروليتر)	2 نانوجرام/ميكرولتر-15 ميكروجرام/ميكرولتر	10 بيكو جرام/ميكرولتر-100 نانوجرام/ميكرولتر	0.1 نانوجرام/ميكرولتر-1000 نانوجرام/ميكرولتر	250 بيكو جرام/ميكرولتر-1000 نانوغرام/ميكرولتر	50 بيكو جرام/ميكرولتر-200 نانوجرام/ميكرولتر
ميزة	الحد الأعلى للكمية	خصوصية جيدة	مجموعة واسعة من القياس الكمي	انتقائية للغاية للحمض النووي الريبي	جيد التحمل
القيود	تحديد ضعيف	حماية من الضوء أثناء الاستخدام	حماية من الضوء أثناء الاستخدام	حماية من الضوء أثناء الاستخدام	خصوصية ضعيفة وترتبط أيضًا بـ dsDNA

إن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية وتقدير الكميات الفلورية باستخدام Qubit لكل منهما مزاياه ويمكن أن يكمل كل منهما الآخر. بالنسبة للتقدير الأولي لعينات الأحماض النووية الروتينية لتحديد التركيز والنقاء ووجود الملوثات، يمكن اختيار طريقة تقدير الكميات الامتصاصية. تعد عملية تحديد كمية البتات أكثر ملاءمة للعينات الثمينة ذات التركيز المنخفض أو التحديد الدقيق المطلوب للتجارب اللاحقة، مثل التسلسل من الجيل التالي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي.

ياسين أطلقت العديد من منتجات قياس الكميات Qubit: مجموعة اختبار dsDNA HS لـ Qubit^® (Cat#12640)، جاهز للاستخدام: 1 × مجموعة اختبار dsDNA HS لـ Qubit^® (رقم القطعة 12642)، مجموعة اختبار الحمض النووي أحادي السلسلة لـ Qubit^® (Cat#12645)، ومجموعة تحليل dsDNA BR (Cat#12643)، والتي حظيت بإشادة واسعة النطاق منذ إطلاقها.

الحل 1 - تحديد الحساسية العالية لـ dsDNA HS

خليط جاهز للاستخدام لقياس كمية dsDNA—1× مجموعة اختبار dsDNA HS لجهاز Qubit^®

^{تشغيل سهل: خليط جاهز للاستخدام، لا حاجة للخلط المسبق؛}

^{حساسية عالية: تركيز قابل للكشف يصل إلى 50 بيكو جرام/ميكرولتر؛}

^{استقرار جيد: تستمر إشارة الفلورسنت لمدة 3 ساعات، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 يومًا لا يؤثر على دقة القياس الكمي؛}

^{أ. استقرار ممتاز: التخزين في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوعين يحافظ على الاستقرار (القيمة المقاسة تنحرف عن القيمة النظرية بأقل من 10%).}

الجدول 2. اختبار الاستقرار لعينات مختلفة عند 4 درجات مئوية ودرجة حرارة الغرفة مقارنة بالمنافسين

الكواشف الكمية	عازم تركيز من λDNA (نانوغرام/ميكرولتر)
	0د		1د		3D	7د			10د		14د
ت* 4 درجة مئوية	0.51		0.496		0.524	0.534			0.495		0.499
ياسين 4 درجة مئوية	0.51		0.508		0.513	0.475			0.48		0.495
ياسين درجة حرارة الغرفة تخزين	0.51		0.517		0.506	0.486			0.506		0.523
الكواشف الكمية	عازم تركيز من الحمض النووي للعجل (نانوغرام/ميكرولتر)
	0د	1د		3D			7د	10د		14د
ت* 4 درجة مئوية	55.3	53.5		55.40			57.9	55.8		58
ياسين 4 درجة مئوية	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59.8
ياسين درجة حرارة الغرفة تخزين	59	55.7		61.3			58	58.7		56.1

ب. حساسية عالية، واستقرار جيد من دفعة إلى أخرى

الجدول 3.اختبار استقرار الدفعات المختلفة

بأتش	عينة	ل*			ياسين			خطأ
		التركيز 1 (نانوغرام/ميكرولتر)	التركيز 2 (نانوغرام/ميكرولتر)	متوسط ​​(نانوغرام/ميكرولتر)	التركيز 1 (نانوغرام/ميكرولتر)	التركيز 2 (نانوغرام/ميكرولتر)	متوسط ​​(نانوغرام/ميكرولتر)
د9801060	الحمض النووي	0.3160	0.3250	0.3205	0.320	0.320	0.320	0.16%
د8801050		0.3310	0.3320	0.3315	0.319	0.306	0.3125	5.73%
د7813110		0.345	0.358	0.352	0.334	0.329	0.332	-6.03%

الحل 2 dsDNA BR نطاق واسع من القياس الكمي

مجموعة أدوات تحليل dsDNA BR لقياس كمية dsDNA على نطاق واسع

حساسية عالية: تركيز قابل للكشف يصل إلى 50 بيكو جرام/ميكرولتر؛

خطية ممتازة: خطية جيدة ضمن نطاق 2-1000 نانوجرام؛

قدرة تحمل قوية للملوثات: يمكنها تحمل الملوثات الشائعة.

الجدول 4. الاستقرار والتحمل للملوثات مقارنة بالمنافسين

ياسين البرازيل						ت* البرازيل
معيار	الاتحاد الرجائي رقم 1	الاتحاد الروسي لكرة القدم 2	متوسط	خطأ		معيار	الاتحاد الرجائي رقم 1	الاتحاد الروسي لكرة القدم 2	متوسط	خطأ
س1	159.63	160.71	160.17	1%		س1	216.17	211.56	213.865	-2%
س2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		س2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
قياس						قياس
الملوث	التركيز في عينة 10 ميكرولتر	التركيز1	التركيز2	متوسط	ليتم اختباره/التحكم فيه	الملوث	التركيز في عينة 10 ميكرولتر	التركيز1	التركيز2	متوسط	ليتم اختباره/التحكم فيه
التحكم (ح2و)	/	49	48.6	48.8	0.0%	التحكم (ح2و)	/	49.8	48	48.9	0.0%
جمعية الكشافة البريطانية	1 ملغ/مل	51.8	52	51.9	6.4%	جمعية الكشافة البريطانية	1 ملغ/مل	54	51.2	52.6	7.6%
الإيثانول	20%	44.6	44	44.3	-9.2%	الإيثانول	20%	44.8	43.4	44.1	-9.8%
كلوروفورم	4.00%	49.0	49.8	49.4	1.2%	كلوروفورم	4.00%	50.0	47	48.5	-0.8%
ورقة بيانات السلامة الصحية	0.2%	46.6	45.8	46.2	-5.3%	ورقة بيانات السلامة الصحية	0.2%	53.2	51.6	52.4	7.2%
تريشن-X100	0.20%	41.6	40.6	41.1	-15.8%	تريشن-X100	0.20%	53	51	52.0	6.3%
dNTPs	2 مليمتر	44.2	45	44.6	-8.6%	dNTPs	2 مليمتر	47.8	46.4	47.1	-3.7%

الحل 3 تحديد كمية الحمض النووي أحادي السلسلة

الاختيار المثالي لقياس كمية الحمض النووي أحادي السلسلة - مجموعة اختبار الحمض النووي أحادي السلسلة عالية الأداء والتكلفة لـ Qubit^®

^{حساسية عالية: تركيز قابل للكشف يصل إلى 50 بيكو جرام/ميكرولتر؛
خطية ممتازة: خطية جيدة ضمن نطاق 0-200 نانوجرام؛
إشارة مستقرة: صبغة ممتازة مقترنة بمحلول عازل مُحسَّن ومُحسَّن، يمكنها الحفاظ على كثافة فلورية مستقرة في درجة حرارة الغرفة، وهي قابلة للتطبيق بدرجة كبيرة حتى في بيئات التلوث الشائعة مثل الأملاح أو النيوكليوتيدات الحرة أو المذيبات أو المنظفات أو البروتينات، مما يضمن دقة القياس؛
استقرار جيد: لا يوجد تغيرات كبيرة في الأداء بعد 6 أشهر من العلاج عند 4 درجة مئوية أو 25 درجة مئوية؛
نطاق تطبيق واسع: عملية تشغيل بسيطة، تمكن من القياس السريع للأليغونوكليوتيدات، والبادئات، والحمض النووي المشوه، والحمض النووي الدائري أحادي السلسلة، وما إلى ذلك.}

أ. القدرة على التكرار الجيد: القياس الكمي في أجهزة Qubit المختلفة، وأنواع مختلفة من العينات باستخدام ياسين تم اختبار دفعات متعددة من Cat#12645. في نطاق 0-200ng، تم تكرار القياسات من أجهزة Qubit المختلفة بشكل جيد.