مع التطور السريع لبحوث البروتينات السكرية والأدوية المضادة، اجتذب تعديل الجليكوزيل أيضًا الكثير من الاهتمام. يتم إكمال الاتصال بين الخلايا والخلايا، وبين الخلايا ومسببات الأمراض بشكل أساسي من خلال تفاعل السكريات والبروتينات، ويحدد الجليكوزيل خصائص التصاق الجليكوزل. في IgG، يعد الجليكوزيل المرتبط بالنيتروجين المحفوظ في Asn297 في منطقة Fc أمرًا بالغ الأهمية لنشاطه. بالإضافة إلى ذلك، تحتوي بعض الأجسام المضادة أيضًا على N-glycans إضافية، والتي تؤثر، جنبًا إلى جنب مع الموقع المحفوظ في Asn297 في منطقة Fc، على التعرف ونصف العمر والاستجابة المناعية للجسم المضاد.
إن جليكوزيل البروتين هو تعديل معقد بعد الترجمة يتضمن ربط سلاسل الجليكان في مواقع محددة على البروتينات. اعتمادًا على نوع سلسلة الجليكان، تنقسم الجليكوبروتينات إلى جليكوبروتينات مرتبطة بالنيتروجين، وجليكوبروتينات مرتبطة بالأوكسجين، وما إلى ذلك؛ علاوة على ذلك، يتأثر جليكوزيل البروتين أيضًا بنوع الخلية المضيفة وظروف التخمير (مثل وسط الثقافة، وقيمة الرقم الهيدروجيني، ودرجة الحرارة، وما إلى ذلك). لذلك، عادةً ما يكون للجليكوبروتينات تباين في أنماط الجليكوزيل، بما في ذلك مواقع الجليكوزيل، ومستويات الجليكوزيل، والبنية المحددة لسلاسل الجليكان، مما يجعل تحليل سلسلة الجليكان وتوصيف البنية عملاً صعبًا للغاية. للحصول على أقصى قدر من المعلومات البنيوية لسلسلة الجليكان، فإن الاستراتيجية الرئيسية لتحليل سلسلة الجليكان هي أولاً تحرير سلاسل الجليكان من البروتينات ثم إجراء تحليل وتوصيف مفصلين. في هذه الاستراتيجية، تعد طريقة إزالة الجليكان الفعالة والدقيقة والمستقرة أمرًا بالغ الأهمية.
تُستخدم الطرق الأنزيمية حاليًا على نطاق واسع لإزالة الجليكوزيل. بالنسبة للجليكانات المرتبطة بالنيتروجين، تشمل الإنزيمات المستخدمة بشكل شائع PNGase F، وEndo H، وEndo S.
مقدمة المنتج
PNGase F هي الطريقة الأنزيمية الأكثر فعالية لإزالة جميع المواد المرتبطة بالنيتروجين تقريبًا السكريات القليلة التسكر في الجليكوبروتينات، والتي يمكنها أن تشق جليكوبروتينات قليلة التسكر عالية المانوز، والهجينة، والمعقدة المرتبطة بالأسباراجين، على وجه التحديد إزالة الجليكانات المرتبطة بالنيتروجين. موقع الانقسام هو: الرابطة الأميدية بين N-acetylglucosamine الداخلي (GlcNAc) وبقايا الأسباراجين، أثناء تحويل الأسباراجين الموجود على البروتين بعد التحلل الأنزيمي إلى حمض الأسبارتيك.
عندما يقع فوكوز α1-6 في قلب GlcNAc، يمكن لـ PNGase F أيضًا القطع؛ فقط عندما يقع فوكوز α1-3 في قلب GlcNAc (شائع في جليكوبروتينات النباتات والحشرات)، لا يمكن لـ PNGase F القطع.
شركتنا تقدم عادي PNGase F (الفئة رقم 20407ES)ومع ذلك، فإن التفاعل الأنزيمي التقليدي لإنزيم PNGase F يتطلب عدة ساعات لإطلاق جليكانات N-الأجسام المضادة، وبسبب تفضيل إطلاق الجليكانات، قد يؤدي عدم اكتمال إزالة الجليكوزيل إلى نتائج متحيزة، وقد لا يمثل توزيع الجليكان الناتج التركيب الصحيح للأجسام المضادة العلاجية. لذلك، فإن الحصول على ملف تعريف دقيق لجليكانات N-الأجسام المضادة في أسرع وقت ممكن أمر بالغ الأهمية لمراقبة الجليكوزيل أثناء عملية إنتاج الأجسام المضادة وبروتينات اندماج الأجسام المضادة وغيرها من العوامل العلاجية الحيوية.
PNGase F سريع (القط رقم 20406ES) هو عبارة عن كاشف مُعاد التركيب مُحسَّن يمكنه إزالة الجليكوزيلات من الأجسام المضادة والغلوبولينات المناعية والبروتينات المندمجة والجليكوبروتينات الأخرى بسرعة وبشكل كامل في بضع دقائق. يمكن لهذا الإنزيم إزالة جميع الجليكوزيلات N بسرعة ودون تفضيل ويمكن استخدامه مباشرة للتحليل الكروماتوغرافيا اللاحقة أو مطياف الكتلة.
مميزات المنتج:
سريع: إزالة الجليكوزيل بشكل كامل وسريع في بضع دقائق.
نقاء عالي: لا تلوث بالبروتياز أو الجليكوسيداز، نقاء ≥95%.
غير انتقائي: قم بإزالة جميع N-glycans بسرعة ودون تفضيل.
التوافق الجيد: يتم استخدامه مباشرة لتحليل الكروماتوغرافيا اللاحقة أو تحليل مطياف الكتلة.
إندو هـ هو جليكوزيداز معاد التركيب يمكنه تقسيم بنية نواة الكيتوبيوس في المانوز العالي وبعض السكريات الهجينة في الجليكوبروتينات N، وإزالة المانوز العالي المرتبط بالـ N من الجليكوبروتينات.
تقدم شركتنا حاليًا Endo H (Cat#20414ES) المعبر عنه من الخميرة.
إن إندو إس عبارة عن جليكوزيداز عالي التخصص يمكنه تقسيم السكريات المرتبطة بالنيتروجين بين هياكل نواة الكيتوبيوس لسلاسل IgG الثقيلة من النوع البري. لا يعتمد نشاط جليكوزيداز إس بشكل صارم على الببتيد، لذا يمكن أن يكون إكس بروتينًا أو ببتيدًا أو أسباراجينًا أو أوليجوساكاريد حر. يكون جليكوزيداز إس نشطًا بغض النظر عن وجود ألفا 1-6 فوكوز نواة أو أسيتيل جلوكوزامين مقسم على الركيزة. ومع ذلك، فهو غير نشط ضد الأوليغوساكاريد التي يتم سياليلتها ونزعها من السيالات ثلاثية أو رباعية الهوائيات.
تقدم شركتنا حاليًا منتج Endo S (Cat#20413ES) المعاد التعبير عنه من E.coli.
دليل الشراء
| لون المنتج | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| اسم المنتج | ||||
| مصدر | التعبير عن الخميرة المعاد تركيبها | التعبير عن الخميرة المعاد تركيبها | التعبير عن الخميرة المعاد تركيبها | هـ.كولاي التعبير المؤتلف |
| نشاط محدد | غير قابل للتطبيق | 100000 وحدة/مل | 1000000 وحدة/مل | 8000 وحدة/ملجم |
| موقع الانقسام | تقريبا جميع الجليكان المرتبطة بالنيتروجين | تقريبا جميع الجليكان المرتبطة بالنيتروجين | جليكانات مانوز عالية مرتبطة بالنيتروجين | ينقسم داخل بنية ثنائي السكاريد الأساسية للسلسلة الثقيلة IgG |
| وقت الهضم | 10 دقيقة | 1-3 ساعات | 1-3 ساعات | 1 ساعة |
| الغليكوزيل | مناسب | مناسب | مناسب | مناسب |
| بنية البروتين | مناسب | مناسب | مناسب | مناسب |
بيانات الاختبار
1. PNGase F السريع امتحان
1: علامة البروتين (رقم القط 20350ES) 2: منافس + ركيزة أو جسم مضاد 3: منافس + ركيزة أو جسم مضاد
4: Yeasen Fast PNGase F + الركيزة أو الجسم المضاد 5: Yeasen Fast PNGase F + الركيزة أو الجسم المضاد 6: الركيزة أو الجسم المضاد 7: Yeasen Fast PNGase F 8: المنافس
2. اختبار Endo H
الشكل 2. إندو إتش تأثير الانقسام الأنزيمي (الركيزة)
3. اختبار Endo S
معلومات المنتج
| اسم المنتج | رقم المنتج | مواصفة |
| 20406ES20/50 | 20 طن/50 طن | |
| 20407ES01/02 | 15000 وحدة / 75000 وحدة | |
| 20414ES92/97 | 10000 وحدة / 50000 وحدة | |
| 20413ES80/90 | 1000 وحدة/5 × 1000 وحدة |