مقدمة عن الأجسام المضادة للعلامات
تُستخدم الأجسام المضادة للوسوم للكشف عن تسلسلات الوسم وتنقيتها على ناقلات التعبير التجارية المختلفة لتحليل وتحديد مستويات التعبير ووظائف البروتينات المستهدفة. والمبدأ وراء استخدامها هو تفاعل المستضد والجسم المضاد، حيث يمكن لهذه الأجسام المضادة للوسوم أن ترتبط بشكل خاص بالبروتينات المندمجة بالوسوم المقابلة. فيما يلي قائمة مختصرة ببعض العلامات البروتينية الشائعة المناسبة للاستخدام مع الأجسام المضادة للوسوم:
الجدول 1. مقدمة عن العلامات البروتينية المختلفة
| العلامة | تسلسل | سمات | السيناريوهات القابلة للتطبيق |
| علَم | هل فهمت؟ | 1. وزن جزيئي صغير، لا يغير وظيفة البروتين المندمج، أكثر محبة للماء من العلامات المماثلة؛ 2. يحتوي على موقع التعرف على الإنتيروكيناز (DDDDK)، وهو مناسب لإزالة العلامة عند اندماجه في الطرف الأميني للبروتين المستهدف. | مناسب لتنقية واكتشاف بروتينات الاندماج ذات مستوى التعبير المنخفض في أنظمة التعبير حقيقية النواة. |
| ها | يبيدفيديا | مشتق من مستضد سطح الهيماجلوتينين المحدد لفيروس الأنفلونزا؛ تجنب استخدامه في التجارب المتعلقة بالخلايا الميتة. | مناسب لتنقية البروتين والكشف عنه. |
| ميك | غلو-غلن-ليس-لو-إيل-سر-غلو-غلو-آسب-ليو | مشتق من الجين الأولي البشري Myc؛ يجب تجنب استخدامه في التجارب المتعلقة بالخلايا البشرية. | لا يستخدم بشكل عام لتنقية البروتين، ولكنه مناسب للكشف. |
تُصنع منتجات تنقية الأجسام المضادة للعلامة التجارية Yeasen من أجسام مضادة وحيدة النسيلة من نوع IgG عالية الجودة كمواد خام. ومن خلال عملية تسمى "الاقتران التساهمي"، يتم ربط هذه الأجسام المضادة بشكل اتجاهي وفعال بمصفوفات الأجار أو أسطح الخرز المغناطيسي النانوي. وهذا لا يقلل فقط من ارتباط البروتين غير المحدد ولكنه يحقق أيضًا حمولة أجسام مضادة أعلى على الوسط. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يوفر منتجات تنقية الأجسام المضادة للعلامة التجارية المناسبة لمتطلبات التنقية المختلفة، بما في ذلك راتنجات تنقية الأجسام المضادة للعلامة التجارية المختلفة والخرز المغناطيسي المناعي، مما يسهل تنقية البروتينات الموسومة وتجارب الترسيب المناعي باستخدام طرق يدوية أو آلية.
دليل اختيار منتج تنقية الأجسام المضادة Yeasen Tag
| سلسلة المنتجات | سلسلة راتنجات التنقية | سلسلة حبات المناعة المغناطيسية | |||||
| رقم المنتج | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| اسم المنتج | حبات مغناطيسية مضادة لحمض الهيالورونيك | حبات مضادة للميكروبات | |||||
| الأربطة | أجسام مضادة وحيدة النسيلة من نوع IgG عالية الجودة للفأر | أجسام مضادة أحادية النسيلة عالية الجودة مضادة لـ GFP/Flag/HA/Myc | |||||
| قدرة ربط البروتين | ≥1.1 ملغ من بروتين الاندماج المُعَلَّم بالعلم/مل جل ≥1.5 ملغ من بروتين الاندماج الموسوم بـ HA/مل جل ≥0.9 ملغ من بروتين الاندماج المُوسوم بـ Myc/مل جل | ≥0.8 ملغ من بروتين الاندماج الموسوم بـ GFP/ملغ خرز ≥0.6 ملغ بروتين الاندماج المُعَلَّم بالعلم/حبيبات ملغ ≥0.4 ملغ بروتين الاندماج الموسوم بـ HA/ملجم حبيبات ≥0.5 ملغ بروتين الاندماج الموسوم بـ Myc/ملغ خرز
| |||||
| المصفوفة | جل أجاروز مترابط بنسبة 4% | خرزات مغناطيسية تعتمد على السيليكا | |||||
| حجم الجسيمات | 45-165 ميكرومتر | 200 نانومتر | |||||
| المزايا | ارتباط غير محدد منخفض، سعة عالية | نقاء عالي، سعة عالية، خصوصية عالية، استخدام مريح مع رف مغناطيسي | |||||
| التطبيقات الموصى بها | تنقية التقارب لبروتينات الاندماج الموسومة بأي مقياس، الترسيب المناعي (IP) | الترسيب المناعي (IP)، الترسيب المناعي المشترك (COIP) | |||||
بيانات الاختبار
1. اختبار مقارنة تنقية جل Yeasen Anti-Flag Affinity (20584ES) مقابل العلامة التجارية S*.
الشكل 1. صورة اختبار مقارنة بين جل مضاد للعلم من Yeasen (أ) وBrand S* (ب)
M: علامة البروتين؛ 1: مستخلص ما قبل العمود لبروتينات Flag-N، M، C؛ 2: نفاذية ما بعد العمود لبروتينات Flag-N، M، C؛ 3: الإيلوشن (إيلوشن بدرجة حموضة 2.7)؛ 4: الإيلوشن (إيلوشن بدرجة حموضة 12)
2. تشير الأسهم في الشكل أدناه إلى البروتينات المستهدفة المحددة، والأشرطة الثلاثة من الأعلى إلى الأسفل بعد غلي الخرز المغناطيسي مباشرة هي BSA، والسلسلة الثقيلة من الأجسام المضادة، والسلسلة الخفيفة من الأجسام المضادة.
شكل 2. تنقية البروتينات التي تحمل علامة العلم باستخدام MagBeads المضادة للعلم
1: محلول E. coli يحتوي على بروتين مُوسم بعلامة Flag 10 ميكرولتر؛ 2: سائل فوقي بعد حضانة محلول E. coli يحتوي على بروتين مُوسم بعلامة Flag مع حبيبات مغناطيسية 10 ميكرولتر؛ 3: غليان مباشر للبروتين المُوسم بعلامة Flag مع حبيبات MagBeads المضادة للعلامة 10 ميكرولتر؛ 4: غليان مباشر لحبيبات MagBeads المضادة للعلامة؛ 5: علامة
3.
شكل 3. تنقية البروتينات التي تحمل علامة GFP باستخدام MagBeads المضادة لـ GFP
1: مستخلص الإشريكية القولونية المحتوي على بروتين مُوسوم بـ GFP 10 ميكرولتر؛ 2: السائل العلوي بعد حضانة مستخلص الإشريكية القولونية المحتوي على بروتين مُوسوم بـ GFP باستخدام حبيبات مغناطيسية 10 ميكرولتر؛ 3: الغليان المباشر للبروتين المُوسوم بـ GFP باستخدام حبيبات مغناطيسية مضادة لـ GFP 10 ميكرولتر؛ 4: الغليان المباشر لحبيبات مغناطيسية مضادة لـ GFP؛ 5: العلامة
معلومات المنتج
| اسم المنتج | رقم المنتج | مواصفة |
| 20584ES03/08/25 | 1 مل/5 مل/25 مل | |
| 20586ES03/08/25 | 1 مل/5 مل/25 مل | |
| 20587ES03/08/25 | 1 مل/5 مل/25 مل | |
| 20565ES03/08 | 1 مل/5 مل | |
| حبات مغناطيسية مضادة لحمض الهيالورونيك | 20566ES03/08 | 1 مل/5 مل |
| حبيبات مغناطيسية مضادة للميكروبات | 20567ES03/08 | 1 مل/5 مل |
| 20564ES03/08 | 1 مل/5 مل |