وصف الخلفية

تنقية البروتين هي عملية عزل البروتين المستهدف من إجمالي البروتينات في العينة التجريبية مع الاحتفاظ بالنشاط البيولوجي والسلامة الكيميائية للبروتين المستهدف. أثناء بناء المتجهات، بالإضافة إلى بعض عناصر التعبير الضرورية، من الضروري أيضًا مراعاة تحسين الكودون واختيار العلامات. اختيار العلامة الصحيحة ليس مفيدًا فقط لتنقية البروتين وتعزيز ذوبان البروتين، بل يجب أيضًا ألا يؤثر على بنية ووظيفة البروتين والتطبيقات اللاحقة. يركز هذا القسم على تقديم علامات His وGST.

الجدول 1. مقدمة عن علامة His وGST

العلامة	الحجم كيلو دالتون	تسلسل	نقاء	الذوبان	إزالة العلامة	أنزيم انقسام العلامة
له	~0.84	ه ...	+	+	ليس مطلوبا	بروتياز TEV
ضريبة السلع والخدمات	26	مكونة من 211 الأحماض الأمينية	++	++	مطلوب	3C بروتياز/PSP

علامة بروتينية لتنقية الألفة

يعتمد راتنج الآجاروز HisSep Ni-NTA على هلام الآجاروز المترابط بشكل كبير كمصفوفة، مقترن كيميائيًا بحمض النيتريلوترياسيتيك رباعي التنسيق (NTA) كربيطة، وبعد استخلاب أيونات النيكل (Ni²⁺)، فهو يشكل بنية ثماني السطوح مستقرة للغاية مع أيونات النيكل في مركز ثماني السطوح. يمكن لهذه البنية حماية أيونات النيكل من هجمات الجزيئات الصغيرة. وبالمقارنة مع راتنج Ni-IDA، فهو أكثر استقرارًا ويمكنه تحمل تركيزات معينة من عوامل الاختزال أو عوامل التشويه أو عوامل الاقتران في ظل ظروف قاسية. وبالمقارنة مع راتنج Ni-TED، فإنه يتمتع بسعة امتصاص أكبر للبروتينات المستهدفة. لقد أصبح أحد الراتنجات التي لا غنى عنها لتنقية البروتينات التي تحمل علامة His في المختبرات.

الشكل 1. مخطط مبدأ المنتج لراتينج His.

الجدول 2. ياسين دليل اختيار منتجات التنقية

رقم المنتج	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
اسم المنتج	راتنج الآجاروز HisSep Ni-NTA	HisSep Ni-NTA راتنج الاغاروز 6FF	عمود التحليل اللوني HisSep Ni-NTA 6FF، 5 مل / 1 مل	خرزات ماج من نوع HisSep Ni-NTA
المصفوفة	جل أجاروز مترابط بنسبة 6%	جل أجاروز 6% عالي الارتباط	جل أجاروز 6% عالي الارتباط	كرات أجاروز مغناطيسية
مقاومة الضغط	0.1 ميجا باسكال, 1 حاجِز	0.3 ميجا باسكال, 3 حاجِز	0.3 ميجا باسكال, 3 حاجِز	غير متاح
سعة	>40 مجم 6× بروتين مُوسوم بـHis/مل مصفوفة	>40 مجم 6× بروتين مُوسوم بـHis/مل مصفوفة		> 40 خرزات مغناطيسية بوزن 6 ملجم × بروتين مُوسم بـHis/مل
اقتراح للتطهير	المصفوفة مع مقاومة الضغط المتوسطة، مناسبة لطريقة الحضانة، وتنقية عمود الجاذبية على نطاق صغير	مصفوفة ذات مقاومة عالية للضغط، يمكن استخدامها لتنقية البروتين الصناعي على نطاق واسع باستخدام أداة تنقية البروتين		تنقية البروتين بشكل سريع ومريح من خلال الفصل المغناطيسي
تسامح	8 مولار من اليوريا، 6 مولار من حمض الهيدروكلوريك، 0.5-1 مليمولار من DTT، 1 مليمولار من EDTA، إلخ.
طلب	تنقية البروتين المسمى بـ His هو الخيار الأول، ذو حمولة عالية، وتحمل متوسط، ومناسب بشكل خاص لنظام تنقية التعبير عن البروكاريوتيك

الملحق: ميزات المنتج HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)

1. بالمقارنة مع الأعمدة والراتنجات المعبأة مسبقًا التقليدية، ليست هناك حاجة لعمليات الطرد المركزي المتعددة للعينات والتحكم في معدل تدفق العينة، مما يقلل بشكل كبير من وقت التنقية.
2. يمكن تحقيق نقاء يزيد عن 95% من البروتين المستهدف من خلال عملية التنقية بخطوة واحدة.
3. إنتاجية عالية من البروتين المستهدف: يمكن أن تصل الإنتاجية إلى 70-80%.
4. يمكن إعادة استخدامها حتى 5 مرات.
5. من السهل ضبط تركيز وحجم البروتين المستهدف.
6. فقدان صغير للبروتين، ولا يوجد خطر من تحلل البروتين أو ترسبه.

وسائط تنقية بروتينات علامة GST

تستخدم كروماتوغرافيا تقارب بروتين علامة GST التقارب التساهمي بين بروتين الاندماج GST والجلوتاثيون الثابت (GSH) من خلال روابط الكبريت، وتنقي على أساس مبدأ استخلاص تبادل GSH. في هذه التنقية، يتم دمج الجلوتاثيون مع ذراع الجل من خلال رابطة الكبريت، ثم يتم استخدام قوة العمل النوعية بين الجلوتاثيون وجلوتاثيون S-ترانسفيراز (أي علامة GST) لجعل بروتين الاندماج الموسوم بـ GST يتحد مع الجلوتاثيون الذراع على الجل، وبالتالي فصل البروتين المسمى عن البروتينات الأخرى. عادة ما يكون الجلوتاثيون مؤكسدًا من GSSG ومختزلًا من GSH. عندما نستخدم استخلاص GSH، سيتنافس GSH مع الجلوتاثيون الموجود في الجل ليتحد مع بروتين الاندماج، وبالتالي استخلاص البروتين المستهدف.

راتنج أجاروز الجلوتاثيون GSTSep هو راتنج تنقية بروتين علامة GST، مصنوع هيكليًا عن طريق الجمع الكيميائي التساهمي بين الجلوتاثيون المختزل مع هلام أجاروز 6٪ كمصفوفة من خلال ذراع مكون من 12 ذرة. لقد أدى هذا التصميم إلى تحسين كفاءة تنقية الراتينج بشكل كبير، مما مكنه من حمل أكثر من 20 مجم من بروتين اندماج GST لكل مليلتر من الوسط. يتمتع المنتج بخصوصية جيدة وأداء من حيث التكلفة، ويمكن استخدامه لتنقية مختلف الجلوتاثيون S-transferase والبروتينات المعتمدة على الجلوتاثيون ومشتقات الجلوتاثيون المعاد تركيبها في خطوة واحدة.

الجدول 3. ياسين دليل اختيار منتجات تنقية GST

رقم المنتج	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
اسم المنتج	راتنج أجار الجلوتاثيون GSTSep	راتنج أجاروز الجلوتاثيون GSTSep 4FF	عمود كروماتوغرافيا الجلوتاثيون 4FF GSTSep، 1 مل / 5 مل	GSTSep الجلوتاثيون ماجبيدز
المصفوفة	جل أجاروز مترابط بنسبة 6%	جل أجاروز 4% عالي الارتباط	جل أجاروز 4% عالي الارتباط	كرات أجاروز مغناطيسية مجهرية
مقاومة الضغط	0.1 ميجا باسكال, 1 حاجِز	0.3 ميجا باسكال, 3 حاجِز	0.3 ميجا باسكال, 3 حاجِز	غير متاح
سعة	>20 ملغ من بروتين GST (40 كيلو دالتون) / مل مصفوفة	>10 ملغ من بروتين GST (40 كيلو دالتون)/مل مصفوفة		5-10 ملغ من بروتين الاندماج GST/مل خرزات مغناطيسية
طلب	حمولة عالية، مصفوفة مع مقاومة متوسطة للضغط، مناسبة لطريقة الحضانة، وتنقية عمود الجاذبية على نطاق صغير، يوصى بها للعملاء على نطاق المختبر	تطبيق حمولة منخفضة، مقاومة عالية لضغط المصفوفة، يمكن استخدامه لتنقية البروتين على نطاق واسع صناعيًا باستخدام أداة تنقية البروتين، أسهل في التوسع		أقل حمل، وتنقية البروتين بسرعة وسهولة من خلال الفصل المغناطيسي

الملحق: GSTSep Glutathione MagBeads (رقم الصنف 20562ES) ميزات المنتج

1. تنقية البروتينات المستهدفة عالية النقاء مباشرة من العينات البيولوجية من خلال الفصل المغناطيسي في خطوة واحدة، مما يبسط إلى حد كبير عملية التنقية ويحسن كفاءة التنقية، ومناسب لتنقية بروتين الاندماج GST بشكل مريح في مجالات البحث العلمي والصناعي.
2. باستخدام هذه الخرزة المغناطيسية في تجارب GST Pull-down، نظرًا لأن الفصل المغناطيسي لا يتطلب عمليات طرد مركزي متعددة وأوقات حضانة طويلة، فإن العملية أبسط وأسرع وأكثر أتمتة مقارنة بطرق الكروماتوغرافيا التقليدية.

معلومات المنتج

تحديد موقع المنتج	اسم المنتج	رقم المنتج	مواصفة
علامة تنقية البروتين	هيسيب ني-إن تي إيه أجاروز الراتنج	20502ES10/50/60	10 مل/50 مل/100 مل
	هيسيب ني-إن تي إيه أجاروز راتنج 6FF	20503ES10/50/60	10 مل/50 مل/100 مل
	عمود التحليل اللوني HisSep Ni-NTA 6FF، 5 مل	20504ES08/25	5 مل/5×5 مل
	عمود التحليل اللوني HisSep Ni-NTA 6FF، 1 مل	20505ES03/08	1 مل/5×1 مل
	خرزات ماج من نوع HisSep Ni-NTA	20561ES08/25	5 مل/25 مل
تنقية البروتين من علامة GST	راتنج أجار الجلوتاثيون GSTSep	20507ES10/50/60	10 مل/50 مل/100 مل
	راتنج أجاروز الجلوتاثيون GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 مل/50 مل/100 مل
	عمود كروماتوغرافيا الجلوتاثيون 4FF GSTSep، 1 مل	20509ES03/08	1 مل/5×1 مل
	عمود كروماتوغرافيا الجلوتاثيون 4FF GSTSep، 5 مل	20510ES08/25	5 مل/5×5 مل
	حبيبات الجلوتاثيون المغناطيسية GSTSep	20561ES08/25	5 مل/25 مل