إن UCF.ME™ UltraNuclease، المعروف أيضًا باسم نوكلياز متعدد القدرات، ونوكلياز واسع الطيف، ونوكلياز مثبط غير محدود، نشأ من Serratia Marcescen ولكن تم إعادة هندسته وإنتاجه لاحقًا بواسطة فريق Yeasen للبحث والتطوير، معبرًا عنه في E. coli. يمتلك وزنًا جزيئيًا يبلغ 26.5 كيلو دالتون ونقطة تساوي الجهد الكهربي 6.85. ومن اللافت للنظر أنه يتمتع بالقدرة على تحلل الحمض النووي تمامًا إلى أوليجونوكليوتيدات أحادية الفوسفات 5' تتراوح من 2 إلى 5 قواعد في الطول. يعمل كل من UltraNuclease وSalt Active UltraNuclease كبديل ممتاز لـ Benzonase.
1. ما هي النوكلياز متعددة القدرات؟
2. ما هي سيناريوهات استخدام النوكلياز متعدد القدرات؟
3. ما هي المزايا التي يجب أن تتمتع بها النوكلياز متعددة القدرات؟
4. الأسئلة الشائعة
5. المنتجات ذات الصلة
1. ما هي النوكلياز متعددة القدرات؟
إن النوكليازات متعددة القدرات عبارة عن نوكليازات نهائية معدلة وراثيًا تتمتع بالقدرة على تحلل مجموعة واسعة من أشكال الأحماض النووية، بما في ذلك الأحماض النووية أحادية السلسلة والمزدوجة السلسلة والخطية والأصلية والمحولة. وهي تنتج أوليجونوكليوتيدات أحادية الفوسفات 5' بأطوال تتراوح من 3 إلى 5 قواعد ولا تظهر أي قدرة على التعرف على القواعد المحددة. تتميز هذه النوكليازات متعددة الاستخدامات بثبات قوي ونشاط هضم في ظروف مختلفة، مما يجعلها فعالة للغاية في التخلص من بقايا الأحماض النووية في العينات أو المنتجات. وهذا يعزز نقاء العينة والفعالية البيولوجية للمنتجات، مما يجعل النوكليازات متعددة القدرات المستحضر الإنزيمي المفضل للبحث العلمي واللقاحات والصناعات مثل الأدوية البروتينية والبولي سكاريد.
علاوة على ذلك، تلعب النوكليازات متعددة القدرات دورًا حاسمًا في إزالة الأحماض النووية أثناء تحضير اللقاحات والأجسام المضادة والعلاج الخلوي وغيرها من المنتجات البيولوجية، مما يضمن الامتثال للوائح إدارة الغذاء والدواء التي تنص على أن الأحماض النووية المتبقية في المنتج النهائي للاستخدام العلاجي يجب ألا تتجاوز 10 بيكو جرام/جرعة. من خلال تحلل الأحماض النووية، تعمل النوكليازات متعددة القدرات على تقليل لزوجة محاليل الخلايا، مما يسهل عملية الترشيح/الترشيح الفائق للمحلول أثناء تنقية الجسيمات المشتقة من الخلايا مثل الفيروسات ونواقل فيروس الغدة الدرقية والأجسام المتضمنة. يعمل هذا على تبسيط المعالجة وتحسين الطرد المركزي وتعزيز كفاءة فصل الترسيب والسائل العلوي وتعزيز فعالية التنقية الكروماتوغرافية، مما يؤدي في النهاية إلى زيادة الغلة ونقاء المنتج.
2. ما هي سيناريوهات استخدام النوكلياز متعدد القدرات؟
يتمتع UltraNuclease بمجموعة واسعة من التطبيقات وهنا سيناريوهات الاستخدام المحددة.
2.1 تنقية الفيروسات (الفيروسات العدسية، فيروس الغدة الدرقية، لقاح الفيروس الغدي المعاد تركيبه، الفيروس المعطل، الفيروس المحلل للأورام، إلخ.)
إن استخدام الفيروسات في القطاع الطبي الحيوي يتوسع بشكل كبير، ويمتد إلى تطبيقات مثل اللقاحات والعلاج الخلوي والعلاج الجيني والعديد من المجالات الأخرى. الخلايا المضيفة المسؤولة عن إنتاج الفيروسات هي في الغالب خلايا مرور مستمر (CCLs). تُظهر CCLs استعدادًا وراثيًا للنمو غير المنظم، مما يمنحها القدرة على التكاثر إلى أجل غير مسمى. ومع ذلك، فإن وجود الحمض النووي المتبقي من CCLs يمكن أن يشكل مخاطر محتملة، مثل تكاثر الخلايا البشرية غير المنضبط مما يؤدي إلى تكوين الورم. علاوة على ذلك، قد تحتوي شظايا الحمض النووي المتبقية هذه على جينومات فيروسية معدية، مما يثير المخاوف بشأن خطر العدوى إلى جانب تكوين الورم. وبالتالي، فإن تدابير الرقابة الصارمة ضرورية لإدارة الحمض النووي المتبقي في المنتجات البيولوجية، وضمان سلامتها. في هذا الصدد، UCF لدينا.يوفر ME™ UltraNuclease حلاً آمنًا لتنقية الفيروسات.
يلعب الملح دورًا محوريًا في التخفيف من تراكم البروتين أو الفيروسات، مما يسهل فصل الحمض النووي والحمض النووي الريبي عن البروتينات والمكونات الخلوية الأخرى. يُظهر Salt Active UltraNuclease، كونه نوكليازًا داخليًا غير محدد، نشاطًا مثاليًا عند تركيزات عالية من الملح. في ظروف الملح العالي، تكتسب الإنزيمات وصولًا أفضل إلى الحمض النووي والحمض النووي الريبي المنطلقين، مما يعزز تحللهما. أثبتت النوكليازات ذات النشاط المتزايد في البيئات عالية الملح أنها أكثر فعالية في تحسين عمليات التنقية. يمكن استخدام Salt Active UltraNuclease لتقليل اللزوجة في العوالق الخلوية والمحاليل، مما يعزز كفاءة التنقية في ظل ظروف الملح العالي. يقلل هذا الإنزيم أيضًا من بقايا الأحماض النووية المضيفة إلى مستوى بيكوغرام، وبالتالي يعزز أداء وسلامة تطبيقات المنتجات البيولوجية المختلفة، بما في ذلك تنقية الفيروسات، وتصنيع اللقاحات، وإنتاج الأدوية البروتينية والبولي سكاريد.
2.2 تنقية البروتين المعاد تركيبه المعبر عنه في الإشريكية القولونية
تميل بعض البروتينات المعبر عنها في البكتيريا الإشريكية القولونية إلى التجمع في أجسام تضمينية، مما يعقد عملية التنقية لأنها غالبًا ما تتشابك مع الحمض النووي للمضيف. يمكن أن تظهر الخلايا البكتيرية الممزقة الناتجة لزوجة عالية، مما يقلل بشكل كبير من كفاءة تنقية البروتين. ومع ذلك، من خلال إدخال 10-50 وحدة / مل من UCF.ME™ UltraNuclease إلى المحلول البكتيري أثناء التعطيل بالموجات فوق الصوتية وحضن العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة أو 4 درجات مئوية طوال الليل بعد اكتمال التعطيل، يمكن تقليل اللزوجة في المحلول البكتيري بشكل فعال. وهذا بدوره يعزز بشكل كبير من كفاءة عملية التنقية. باختصار، يمكنك الاعتماد على UCF.ME™ UltraNuclease لتسهيل تنقية البروتين بشكل فعال.
2.3 منع تكتل الخلايا
في السنوات الأخيرة، زاد استخدام خلايا الدم المحيطية الأحادية النواة المحفوظة بالتبريد في الاختبارات المناعية بشكل كبير. أهم ما يميز خلايا الدم المحيطية الأحادية النواة هو أنها تتكتل بسهولة بعد الإنعاش، مما قد يؤدي بسهولة إلى انخفاض جودة الخلايا ونتائج الاختبار غير الموثوقة. عندما يتم إنعاش الخلايا، تتم إضافة التركيز المناسب (25-50 وحدة/مل) من UCF.ME™UltraNuclease إلى وسط الثقافة ويتم زراعة الخلايا معًا، مما يمكن أن يمنع تكتل الخلايا بشكل فعال. وبالتالي، يمكنك الاستفادة القصوى من UCF.ME™ UltraNuclease لزيادة احتمالات الحصول على نتيجة ناجحة.
3. ما هي المزايا التي يجب أن تتمتع بها النوكلياز متعددة القدرات؟
3.1 مجموعة واسعة من التطبيقات
يمكن لـ UCF.ME™ UltraNuclease قطع وتحليل أشكال مختلفة من الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA في ظل مجموعة متنوعة من الظروف التجريبية ويمكن تطبيقه لإزالة الأحماض النووية المتبقية في العديد من المنتجات البيولوجية.
3.2 نقاء عالي ونشاط إنزيمي عالي
بالنسبة لمنتجنا UCF.ME™ UltraNuclease، فإن نقاء الإنزيم الخاص به أكبر من أو يساوي 99% (HPLC)، ونشاط الإنزيم الخاص به أكبر من أو يساوي 1.5*106 وحدة/ملجم (باستخدام طريقة كمية مطلقة للركيزة العامة).
3.3 قدرة قوية على التكيف
يتمتع UCF.ME™ UltraNuclease بثبات عالٍ أثناء التخزين والتجميد والذوبان. نقوم بتخزين UCF.ME™ UltraNuclease عند -20 درجة مئوية، و4 درجات مئوية، و37 درجة مئوية لاكتشاف اتجاه نشاط الإنزيم. عند وضعه عند 37 درجة مئوية لمدة أسبوعين، لم يكن هناك تغيير كبير في نشاط الإنزيم.وفي الوقت نفسه، لضمان استقرار الإنزيم، نستخدم مزيجًا من الثلج الجاف + كيس ثلج لـ ينقل UCF.ME™ UltraNuclease مناسب لمكانك. كما يتمتع بقدرة تحمل عالية ويمكنه التكيف مع مجموعة متنوعة من ظروف التشغيل.
3.4 الامتثال لدستور الأدوية
يتم تصنيع UCF.ME™ UltraNuclease في UCF.ME (مصنع فائق النظافة. إنزيم جزيئي) وهو نوع من الإنزيمات فائقة النظافة. ما هو الإنزيم فائق النظافة؟ إنه إنزيم جزيئي يحقق معايير الجودة التي لا تحتوي على HCD وHCR وHCP وDNASE وRNASE وخالي من بقايا البروتياز وخالي من بقايا الميكروبات وخالي من مسببات الأمراض وخالي من أصل حيواني وتلوث بالمضادات الحيوية وبقايا السموم الداخلية المنخفضة للغاية ونشاط إنزيمي مرتفع ونقاء عالٍ وما إلى ذلك. وبالتالي، يمكنك الوثوق بمنتجاتنا بأمان وموثوقية.
3.5 إنتاج GMP
يتم إكمال عملية إنتاج UltraNuclease بالكامل في ورشة إنتاج GMP، ويتم تنفيذ خطة فحص الجودة بدقة من قبل دستور الأدوية الطريقة، تلبية الطلب واسع النطاق من البحث والتطوير إلى الإنتاج.
UCF.ME™ شريك UltraNuclease —— مجموعة UltraNuclease ELISA
في خطوات التنقية العادية، UCF.ME™ ألترانوكليز يتم إزالته بسهولة باعتباره شوائب. للكشف عن بقايا UCF.ME™ قامت شركة YEASEN بتطوير مجموعة UltraNuclease ELISA الداعمة، والتي يمكنها الكشف بدقة عن بقايا UCF.ME™ UltraNuclease في العينة. تتميز المجموعة بخطية ممتازة وقابلية للتكرار ومعدل استرداد وخصوصية.
ألترانوكليز طقم اليزا
النطاق الخطي هو بين 0.047 و 3 نانوغرام / مل، و R2 أكبر من 0.99. مع قابلية إعادة إنتاج جيدة بين الدفعات، نضيف تركيزًا ثابتًا من UltraNuclease إلى العينة ونستخدم 3 دفعات مختلفة من مجموعات ELISA للكشف. معدل استرداد الكشف هو بين 70٪ و 110٪ عندما يكون تركيز النوكلياز بين 3 و 0.186 نانوغرام / مل، و CV أقل من 10٪. علاوة على ذلك، فإن معدلات استرداد العينة المحاكاة لـ UltraNuclease بتركيزات مختلفة تتراوح جميعها بين 70٪ و 130٪ وهي أفضل من العلامات التجارية الأخرى. كما أن لديها خصوصية قوية حيث قمنا بتقييم الارتباط غير النوعي لجسم مضاد UltraNuclease بـ 8 عينات شائعة. تداخلت نتائج مجموعة التداخل والمجموعة الضابطة ولم يُلاحظ أي تداخل.
بعد تقديم UltraNuclease لملف DMF، حصلت YEASEN على ملفات DMF الخاصة بـ نيوكلياز نشط بالملح من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية.
رقم الملف هو:
| رقم | اسم المنتج | رقم الملف |
| 1 | ألترانوكليز | م ف 037298 |
| 2 | ملح نشط الترا نيوكلياز | م ف037815 |
4. الأسئلة الشائعة
س1: في أي خطوة نضيف UltraNuclease؟
ج: يعتمد ذلك على العينات التي تتعامل معها. في تنقية الفيروسات، يُضاف عادةً بعد توضيح الفيروسات؛ وفي تنقية بروتين الإشريكية القولونية، يمكن إضافته عند تحلل الخلايا؛ وفي التعامل مع تكتل الخلايا، يمكن إضافته مباشرة إلى الوسط للزراعة المشتركة مع الخلايا.
س2: إذا لم تصل درجة حرارة التفاعل إلى 37 درجة مئوية، فكيف يتم استخدامها؟
أ: يتأثر النشاط الإنزيمي لـ UltraNuclease بدرجة الحرارة ووقت المعالجة ووحدات النشاط الإنزيمي. إذا لم تتمكن درجة الحرارة من الوصول إلى 37 درجة مئوية، فيمكن إضافة كمية الإنزيم بشكل مناسب، أو يمكن تمديد وقت الحضانة.
س3: هل الترانوكليز متوافق مع مثبطات البروتيناز؟
أ: متوافق، ولكن انتبه إلى أن العديد من مثبطات البروتيناز تحتوي على EDTA. عندما يبدأ EDTA في الارتفاع عن 1mM، فإن EDTA يثبط نشاط بعض النوكليازات.
س4: كيفية إزالة UltraNuclease؟
أ: ويمكن إزالته بطرق مثل TFF، والغسيل الكلوي، والأعمدة الكروماتوغرافية.
س5: هل يمكن استخدام مجموعة UltraNuclease ELISA للكشف عن علامات تجارية أخرى من بقايا النوكلياز متعددة القدرات؟
أ: لا نوصي بذلك. تم تطوير مجموعة ELISA بالكامل بناءً على UltraNuclease ويمكنها تحديد كمية UltraNuclease بدقة. قد تختلف النوكليازات متعددة القدرات من العلامات التجارية الأخرى عن UltraNuclease من حيث التسلسل وعملية الإنتاج، وقد تكون نتائج الاختبار غير دقيقة.
5. المنتجات ذات الصلة
المنتجات التي تقدمها شركة Yeasen هي كما يلي.
الجدول 1 المنتجات ذات الصلة
| اسم المنتج | رقم المنتج | تحديد |
| 20157ES25/60/80/90 | 25 وحدة/100 وحدة/1 وحدة/5 وحدات | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25 وحدة/100 وحدة/1 وحدة/5 وحدات | |
| 36701ES59 | 96 طن | |
| الملح النشط مجموعة ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96 طن |