وصف
Quick T4 DNA Ligase هو منتج إنزيمي واحد يمكن استخدامه لربط شظايا الحمض النووي والمحولات في عملية بناء مكتبة NGS. تم التحقق من هذا المنتج من خلال التسلسل عالي الإنتاجية وله جودة ممتازة. بالنسبة للعملاء الذين لا يحتاجون إلى تعديل النظام التجريبي، يوصى بشراء وحدة ربط الحمض النووي Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).
مكونات المنتج
| رقم المكون | عناصر | 10301ES40 | 10301ES42 |
| 10301-أ | ربطة الحمض النووي السريعة T4 (400 وحدة/ميكرولتر) | 100 ميكرولتر | 1 مل |
| 10301-ب | 10 × T4 DNA Ligase Buffer | 250 ميكرولتر | 2×1250 ميكرولتر |
الشحن والتخزين
يتم شحن المنتج مع أكياس الثلج ويمكن تخزينه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة عامين.
تعريف الوحدة
في نظام تفاعل ربط 20 ميكرولتر، عندما يتم تفاعل 6 ميكروجرام من λDNA-Hind Ⅲ عند 16 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، تم تعريف كمية الإنزيم المطلوبة لإعطاء أكثر من 50% من ربط شظايا الحمض النووي على أنها وحدة واحدة (U).
تحذيرات
1. إذا حدثت كمية صغيرة من الأمطار عند ذوبان العازل، يرجى قلبه وخلطه جيدًا قبل الاستخدام؛
2. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء المعاطف المخبرية والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العمل.
3. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط!
تعليمات
1. لا يتم عمومًا تنقية مجموعات بناء مكتبة الحمض النووي السائدة الحالية بعد إصلاح النهاية ومعالجة A-Tailing، وتقوم مباشرة بربط المحول. يرجى الرجوع إلى التحضير التالي لنظام التفاعل. قم بالدوامة جيدًا، ثم قم بالتدوير لفترة وجيزة واحتضن لمدة 15 دقيقة عند 20 درجة مئوية.
| عناصر | الحجم (ميكرولتر) |
| الحمض النووي ذو الذيل dA | 60 |
| 10 × T4 DNA Ligase Buffer | 10 |
| 50% PEG 6000 | 10* |
| محول الحمض النووي | س** |
| ربطة الحمض النووي السريعة T4 | 1-5*** |
| دي إتش تو أو | حتى 100 |
[ملاحظة]: *لا يتم توفير 50% PEG 6000 في المجموعة، بل يتعين عليك تحضيرها بنفسك.
**يرجى الرجوع إلى الجدول التالي لمعرفة عدد المحولات.
***يمكن إضافة كمية Quick T4 DNA Ligase المستخدمة بمقدار 1-5 ميكرولتر حسب الحاجة.
2. تؤثر جودة وتركيز المحولات المستخدمة بشكل مباشر على كفاءة الربط وإنتاجية المكتبة. قد يؤدي الإفراط في استخدام المحولات إلى إنتاج المزيد من ثنائيات المحولات، في حين قد يؤثر الاستخدام الأقل على كفاءة الربط وإنتاجية المكتبة. يسرد الجدول التالي الكمية الموصى بها من المحولات المستخدمة في مواقف مختلفة لإدخال الحمض النووي باستخدام هذه المجموعة.
| إدخال الحمض النووي | المحول: مدخل DNA (النسبة المولية) | إدخال الحمض النووي | المحول: مدخل DNA (النسبة المولية) |
| 1 ميكروجرام | 10:1 | 50 نانوغرام | 100:1 |
| 500 نانوغرام | 20:1 | 25 نانوغرام | 200:1 |
| 250 نانوغرام | 40:1 | 1 نانوغرام | 200:1 |
| 100 نانوغرام | 100:1 | 500 صفحة | 400:1 |
[ملاحظة]: مول الحمض النووي المدخل (بيكومول) ≈ الحمض النووي المدخل (نانوغرام)/ [0.66 × متوسط طول الحمض النووي المدخل (bp)].
مثال على حساب ربط المحول: ما مقدار المحول الذي يجب إضافته عندما يكون الحمض النووي المدخل 100 نانوجرام وطوله 300 زوج قاعدي؟
الخطوة 1: احسب عدد مولات الحمض النووي المدخل. الصيغة: مول الحمض النووي المدخل (بيكومول) ≈ الحمض النووي المدخل (نانوغرام)/ [0.66 × متوسط طول الحمض النووي المدخل (بيكو مول)]؛ مول الحمض النووي المدخل (بيكومول) = 100 ÷ (0.66×300) = 0.5 بيكومول؛
الخطوة 2: وفقًا للجدول أعلاه، احسب عدد مولات المحول المضافة. عندما يكون DNA المدخل 100 نانوجرام، تكون النسبة المولية للمحولات: DNA المدخل 100:1، وعدد مولات المحولات المضافة = 100×0.5 بيكو مول = 50 بيكو مول؛
الخطوة 3: احسب حجم إضافة المحول. تركيز المحول = 15 ميكرومول/لتر (إذا كنت تستخدم محولًا من شركة أخرى، فيتعين عليك تحديد تركيزه وفقًا لإرشاداتها)؛ حجم المحول المضاف = مولات المحول المضافة (50 بيكو مول) ÷ تركيز المحول (15 ميكرومول/لتر) = 3.34 ميكرولتر (ملاحظة: 15 ميكرومول/لتر = 15 بيكو مول/ ميكرولتر)؛
باختصار، الحجم الذي يمكن إضافة المحول إليه هو 3.4 ميكرولتر. (ملاحظة: لا يتجاوز الحجم الأقصى لإضافة المحول 5 ميكرولتر).
مخزن ase.
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.