S-Adenosyl methionine (SAM) هو ركيزة مساعدة تشارك في تفاعل نقل الميثيل، والذي يتكون في الجسم من أدينوسين ثلاثي الفوسفات والميثيونين في ميثيونين أدينوسيل ترانسفيراز تحت تأثير التخليق. يتم تحضير SAM في محلول من 10 مليمولار حمض الهيدروكلوريك و10% إيثانول ودرجة حموضة 4 عند 25 درجة مئوية. يتم إنتاج هذا المنتج وفقًا لمتطلبات عملية GMP ويتم توفيره في صورة سائلة.

سمات

• عمليات وأساليب تحليلية معتمدة ومحددة للمنتج
• الاستقرار الخاص بالمنتج
• تتبع الوثائق إرشادات GMP المعمول بها
• عملية إنتاج AOF والمواد الخام (TSE & BSE)
• بيان النيتروزامين
• مستندات الدعم التنظيمي المتاحة
• الإنتاج على نطاق واسع

التطبيقات

• عملية التغطية الأنزيمية للقاحات والعلاجات المستندة إلى mRNA
• الميثلة الأنزيمية للبوليمرات الحيوية

تحديد

رقم CAS	485-80-3
صيغة	ج15ح23ن6ا5س+
الوزن الجزيئي	399.44 جرام/مول
النقاء (HPLC)	＞ 90%
محتوى	32 مليمول ± 2 مليمول
التكوين (1X)	10 مليمولار حمض الهيدروكلوريك، 10% إيثانول بدرجة حموضة 4 عند 25 درجة مئوية
بناء

عناصر

الشحن والتخزين

يتم شحن المنتج مع الثلج الجاف ويمكن تخزينه في درجة حرارة تتراوح بين -15 درجة مئوية إلى -25 درجة مئوية لمدة عام واحد.

الأرقام

• تقييم النقاء

الشكل 1. يمكن أن تكون نقاء (HPLC) لمنتج SAM أكثر من 98٪ (الشكل 1A) والنقاء البصري (ee،٪) لـ (S، S) -SAM isoform يكون دائمًا حوالي 70٪ (الشكل 1B).

• الكشف عن بقايا الإنزيم

الشكل 2. لم يتم الكشف عن أي بقايا إنزيمية عن طريق التحليل الكهربائي للهلام الآجاروزي.

لا يؤدي تفاعل 20 ميكرولتر في المحلول العازل الذي يحتوي على 500 نانوجرام من خلاصة Hind III من λDNA و2 ميكرولتر من S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) الذي تم حضنه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية إلى أي فرق مقارنةً بالمجموعة الضابطة (خالي من SAM في نظام التفاعل) عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام الآجاروزي (الشكل 2أ).لا يؤدي تفاعل 20 ميكرولتر في المحلول العازل الذي يحتوي على 500 نانوجرام من بلازميد pUC19 و2 ميكرولتر من S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) الذي تم حضنه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية إلى أي فرق مقارنةً بالمجموعة الضابطة (خالي من SAM في نظام التفاعل) عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام الآجاروزي (الشكل 2 ب).

• الاختبار الوظيفي والتحقق

الشكل 3 يمكن أن تصل كفاءة التغطية لتفاعل التغطية بعد النسخ لـ YEASEN إلى ما يقرب من 99%.

يتم تحضين تفاعل 20 ميكرولتر في المحلول العازل الذي يحتوي على 1 ميكروجرام من λDNA ووحدة واحدة من M. SssI (CpG Methyltransferase) و160 ميكرومولار S-adenosylmethionine (SAM) لمدة ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. يكون الحمض النووي الناتج مقاومًا للهضم باستخدام BstUI كما تم تحديده بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام الأجاروزي (الشكل 3أ). تم تحريف 10 ميكروجرام من الحمض النووي الريبي عن طريق الحضانة عند درجة حرارة 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق قبل التغطية. تم إعداد تفاعل تغطية ما بعد النسخ بمقدار 20 ميكرولتر وحضنه عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين في جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل. تم تنقية النسخ بواسطة خرزات مغناطيسية (رقم الفهرس 12602). ثم يتم الكشف عن كفاءة التغطية بواسطة LC-MS (الشكل 3ب).