هيفير™ مجموعة AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (بدون صبغة) هي مجموعة نسخ عكسي سريعة تم تطويرها بناءً على Hifair™ مجموعة تخليق cDNA من السلسلة الأولى III (بدون صبغة)، مناسبة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل وتجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي. بالمقارنة مع Hifair™ مجموعة تخليق cDNA من السلسلة الأولى III (بدون صبغة)، تتميز بمعدلات اكتشاف مستقرة، وخصوصية، وضمان العائد، مع تقليل إجمالي وقت النسخ العكسي إلى أقل من 6 دقائق، مما يقلل بشكل كبير من مدة التجربة.

تتضمن المجموعة مزيج gDNA Digester Mix، الذي يمكنه القضاء على تلوث الحمض النووي الجينومي المتبقي في قالب الحمض النووي الريبي، مما يضمن نتائج لاحقة أكثر موثوقية. توفر المجموعة نوعين من برايمرات تخليق cDNA: برايمر عشوائي N6 وOligo (dT)₁₈يمكن للمستخدمين الاختيار بين البادئات العشوائية N6، Oligo (dT)₁₈أو بادئات خاصة بالجينات كبادئات للنسخ العكسي وفقًا لاحتياجاتهم. يمكن استخدام منتج cDNA أحادي السلسلة المُصنَّع مباشرةً في تفاعلات PCR أو qPCR اللاحقة.

تحديد

عناصر

تخزين

يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة 1 سنة.

تعليمات

1. إذا كانت التجربة تتطلب إزالة الحمض النووي الجينومي المتبقي

1) هضم الحمض النووي

في أنبوب الطرد المركزي الخالي من RNase، قم بإعداد الخليط التالي وقم بتمريره برفق باستخدام الماصة لخلطه جيدًا. قم بحضنه عند درجة حرارة 42 درجة مئوية لمدة دقيقتين.

* يوصى بأن لا تتجاوز كمية المدخلات من إجمالي الحمض النووي الريبي 2 ميكروجرام. إذا كان مستوى التعبير عن الجين المستهدف منخفضًا، فيمكن زيادة كمية المدخلات إلى حد أقصى 5 ميكروجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي.

2) إعداد نظام تفاعل النسخ العكسي (نظام 20 ميكرولتر)

* يمكن تعديل كمية البادئات وفقًا لكمية إدخال القالب. إذا تم استخدام منتج النسخ العكسي لتجارب qPCR، فيمكن إضافة بادئات عشوائية في النظام وفقًا للكمية الموصى بها.

** يوصى أولاً بإضافة 4 × Hifair™ AdvanceFast SuperMix (بدون صبغة)، ثم مزجها جيدًا، ثم إضافة برايمر النسخ العكسي للتأكد من عدم تأثر البرايمر بـ gDNA Digester.

3) إعدادات إجراء النسخ العكسي

* بالنسبة للقوالب ذات محتوى GC العالي أو القوالب المعقدة، يمكن زيادة درجة حرارة النسخ العكسي إلى 60 درجة مئوية.

** يمكن لهذا المنتج تصنيع تسلسلات cDNA أقل من 14 كيلو بايت. إذا كنت بحاجة إلى منتجات cDNA أطول، فيمكنك تمديد وقت النسخ العكسي بشكل مناسب.

2. إذا كانت التجربة لا تتطلب إزالة الحمض النووي الجينومي

1) إعداد نظام تفاعل النسخ العكسي (نظام 20 ميكرولتر)

* يوصى بأن لا تتجاوز كمية المدخلات من إجمالي الحمض النووي الريبي 2 ميكروجرام. إذا كان مستوى التعبير عن الجين المستهدف منخفضًا، فيمكن زيادة كمية المدخلات إلى حد أقصى 5 ميكروجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي.

** يمكن تعديل كمية البادئات وفقًا لكمية إدخال القالب. إذا تم استخدام منتج النسخ العكسي لتجارب qPCR، فيمكن إضافة بادئات عشوائية في النظام وفقًا للكمية الموصى بها.

2) إعدادات إجراء النسخ العكسي

* بالنسبة للقوالب ذات محتوى GC العالي أو القوالب المعقدة، يمكن زيادة درجة حرارة النسخ العكسي إلى 60 درجة مئوية.

** يمكن لهذا المنتج تصنيع تسلسلات cDNA أقل من 14 كيلو بايت. إذا كنت بحاجة إلى منتجات cDNA أطول، فيمكنك تمديد وقت النسخ العكسي بشكل مناسب.

ملحوظات

1. يجب إجراء جميع العمليات على الجليد ويجب إجراؤها بطريقة تتجنب تلوث RNase.
2. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
3. يرجى العمل باستخدام معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، من أجل سلامتك.

وثائق: