تحول مجموعة هييف سوبر فاست لميثيل الحمض النووي (المبنية على الأعمدة) بسرعة السيتوزينات غير الميثيلية في عينات الحمض النووي إلى يوراسيل، مع ترك السيتوزينات الميثيلية دون تغيير. أثناء معالجة البيسلفيت عالية الحرارة، يتحول الحمض النووي ثنائي السلسلة إلى خيوط مفردة. في وجود HSO3-، تخضع بقايا السيتوزين لإزالة الأمين وتتحول إلى يوراسيل، مع بقاء السيتوزينات الميثيلية دون تغيير. في تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل اللاحق، يتم استبدال اليوراسيل بالثايمين (T). تستغرق عملية التحويل 5 دقائق فقط، وتستوعب مدخلات الحمض النووي التي تتراوح من 100 بيكو جرام إلى 2 ميكروجرام، وتحقق كفاءة تحويل ≥99% للسيتوزينات غير الميثيلية. الحمض النووي المحول مناسب للتطبيقات اللاحقة مثل تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل وتسلسل الجيل التالي.

ميزة

مدخلات منخفضة: مناسب لتحويل العينات التي تتراوح من 100 بيكو جرام إلى 2 ميكروجرام

وقت تحويل قصير: حوالي 5 دقائق.

الحد الأدنى من الضرر في العينة: الحفاظ على سلامة العينة بعد التحويل.

كفاءة تحويل عالية: معدل التحويل ≥99%، معدلات تحويل عالية في المناطق ذات GC العالية مع معدل إيجابيات كاذبة منخفض.

مناسب للعينات النادرة، مثل تحويل مثيلة الحمض النووي للخلية الواحدة.

قادرة على تحويل مثيلة عينات الحمض النووي الريبي.

منتج عناصر

ملحوظة:

لـ 10 اختبارات لكل صندوق: أضف 4.4 مل من الإيثانول اللامائي إلى محلول الغسيل.

لـ 50 اختبارًا لكل صندوق: أضف 22 مل من الإيثانول اللامائي إلى محلول الغسيل.

بعد إضافة الإيثانول اللامائي، اقلب الخليط واخلطه جيدًا، ثم قم بتخزينه للاستخدام في المستقبل. تأكد من إغلاق غطاء الزجاجة بإحكام لمنع تبخر الإيثانول، مما قد يؤثر على أداء الكاشف.

شكل

الشكل 4. تم إجراء تحويل البيسلفيت على عينات الحمض النووي الجينومي البشري باستخدام كل من مجموعات التحويل 12225 وQ المنافسة. بعد ذلك، تم استخدام مجموعات تحضير مكتبة الحمض النووي أحادي السلسلة الخاصة بالمثيلة لإنشاء المكتبات. يتم عرض بيانات إنتاج المكتبة ومراقبة الجودة أعلاه. توضح النتائج أنه عند تسلسل المكتبات المجمعة من كل من مجموعات 12225 وQ المنافسة، أنتجت مجموعة 12225 ناتج بيانات أعلى، وحققت نسبة أعلى على الهدف (%)، وأظهرت معدلات تكرار أقل (%).

الشحن والتخزين

قم بتخزين محلول التحويل 12225-A في درجة حرارة الغرفة، بعيدًا عن الضوء. قم بتخزين المكونات الأخرى في درجة حرارة الغرفة. مدة الصلاحية 12 شهرًا.

ملحوظة:

1. لضمان نجاح التجارب اللاحقة، قم بقياس الكمية الإجمالية للحمض النووي المدخل بدقة أثناء خطوة التحويل. يوصى باستخدام Qubit 3.0/4.0 لقياس الحمض النووي، بنسبة A260/A280 بين 1.7 و1.9. يجب أن يكون نطاق الحمض النووي المدخل بين 100 بيكو جرام و2 ميكروجرام، مع نطاق مثالي يتراوح بين 100 نانوجرام و1 ميكروجرام. يمكن أن تعيق كمية الحمض النووي غير الكافية عملية الكشف اللاحقة، في حين أن الإدخال المفرط قد يقلل من كفاءة الاسترداد والتحويل.

2. تحتوي محلول التحويل ومحلول إزالة السلفونات ومحلول الغسيل على مكونات متطايرة. بعد الاستخدام، قم بإغلاق الأغطية على الفور وقم بتخزينها في درجة حرارة الغرفة.

3. بالنسبة للعينات التي تم تحويلها بعد ذلك، قم بإجراء التجارب اللاحقة على الفور. للتخزين قصير المدى، احفظه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، وللتخزين طويل المدى، احفظه عند درجة حرارة -80 درجة مئوية.

4. من أجل سلامتك وصحتك، ارتدِ معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء التشغيل.

5. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط!

تعليمات

إعداد الكواشف والمواد الاستهلاكية: أنبوب الطرد المركزي المعقم سعة 1.5 مل، ماء خالٍ من الإنزيمات، إيثانول مطلق، أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل؛

ل تحويل البيسلفيت:

1) قم بإعداد أنبوب PCR المعقم المناسب وفقًا لعدد العينات المراد اختبارها، وقم بإعداد نظام التفاعل وفقًا للجدول التالي:

2) نظام التحويل

استخدم ماصة لنفخ وخلط النظام أو الدوامة أعلاه واخلطه لمدة 5 ثوانٍ، ثم قم بطرده مركزيًا لفترة قصيرة، وقم بطرد محلول التفاعل إلى أسفل أنبوب PCR.

ف ملاحظة: 1. في هذا الوقت، يكون الحجم الإجمالي لمحلول التفاعل في أنبوب PCR 200 ميكرولتر. ولجعل التحويل أكثر اكتمالاً، يجب تقسيم محلول التفاعل إلى أجزاء متساوية ونقله إلى أنبوب PCR معقم جديد بعد النفخ والخلط في الخطوة 2)، ويجب تشغيل إجراء التحويل. بعد التحويل، تم دمج محاليل التفاعل في أنبوبي PCR في نفس عمود التنقية للتنقية.

2. إذا كان حجم العينة بين 20 و40 ميكرولترًا، فقم بتقليل حجم محلول التحويل للحفاظ على الحجم الإجمالي 200 ميكرولتر.

3. إذا كان حجم العينة 50 ميكرولترًا، يتم إضافة 150 ميكرولترًا من محلول التحويل، ويتم الحفاظ على الحجم الإجمالي عند 200 ميكرولتر، ويتم تمديد وقت التحويل إلى 6-10 دقائق.

3) إعداد برنامج تحويل CT

يتم وضع أنبوب PCR على جهاز PCR مع برنامج محدد مسبقًا لإجراء التفاعل.

ل طهارة

1) تنقل 200 ميكرولتر من تحويل الحل ل صعمود التبولس, جهاز الطرد المركزي لمدة 30-60 ثانية 13000 جتخلص من المرشح، ثم ضع عمود التنقية في جأنبوبة جمعس مرة أخرى؛

2) أضف 100 ميكرولتر من غسل العازل داخل أعمدة التنقية (تأكد من إضافة الإيثانول المطلق)، قم بالطرد المركزي لمدة 30-60 ثانية 13000 جتخلص من المرشح، ثم ضع عمود التنقية في جأنبوبة جمعس مرة أخرى؛

3) أضف 200 ميكرولتر من عازل إزالة السلفونات الى داخل أعمدة التنقية ، واترك التفاعل ليبقى في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. بعد التفاعل، قم بالطرد المركزي لمدة 30-60 ثانية 13000 جتخلص من المرشح، ثم ضع أعمدة التنقية في جأنبوبة جمعس مرة أخرى؛

4) أضف 200 ميكرولتر من غسل العازل الى أعمدة التنقية, جهاز الطرد المركزي لمدة 30-60 ثانية 13000 ج تخلص من المرشح، ثم ضع صعمود التبولس في جأنبوبة جمعس مرة أخرى؛

5) كرر الخطوة 4) مرة واحدة؛

6) نقل أعمدة التنقية إلى أنبوب الطرد المركزي المجهز بحجم 1.5 مل، أضف 10-30 ميكرولترًا من مُنظّف الإيلوشن إلى مركز غشاء الفلتر بعد فتح الغطاء والتجفيف، وجمع الحمض النووي بعد تركه لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة والطرد المركزي لمدة دقيقة واحدة عند 13000 ج؛

7) قم بتخزين الحمض النووي مؤقتًا عند -20 درجة مئوية. للتخزين طويل الأمد، يرجى تخزين الحمض النووي عند -80 درجة مئوية وتجنب التجميد والذوبان المتكرر غير الضروري.

ملاحظة: يمكن استخدام منتج التحويل المنقى مباشرة في عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل أو التسلسل اللاحقة.

يدوي