وصف
مجموعة تحضير مشتركة لمكتبة DNA&RNA من Hieff NGS® الإصدار 2 مجموعة مكتبة مشتركة للحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين لمنصة تسلسل Illumina®&MGI®، والتي تحتوي على كاشف فعال لتخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين وكاشف هضم الإنزيم. بالمقارنة مع المكتبة التقليدية بناء الطريقة، يمكن لهذا المنتج إكمال تخليق cDNA ومكتبة DNA&RNA بكفاءة بناء في أنبوب واحد. تحتوي المجموعة على إنزيم عالي الجودة لتفتيت الحمض النووي وتجمع بين تفتيت الحمض النووي وإصلاح النهاية و dA-tailing في خطوة واحدة، مما يقلل الوقت بشكل كبير وتكلفة إعداد المكتبة. تتميز مجموعة إعداد المكتبة هذه بمعدل تحويل مكتبة ممتاز ويمكن تطبيقها على عينات من جميع الحيوانات والنباتات والكائنات الحية الدقيقة الشائعة وما إلى ذلك، بالإضافة إلى عينات FFPE. تعمل هذه المجموعة المطورة باستخدام أحدث إنزيم ربط محسن على تقليل معدل الربط الذاتي بشكل كبير أثناء ربط المحول. علاوة على ذلك، يعمل إدخال إنزيم بوليميراز عالي الدقة جديد على تحسين تجانس ودقة التضخيم.
لقد خضعت جميع المكونات التي توفرها المجموعة لمراقبة الجودة الصارمة والتحقق الوظيفي، مما يضمن استقرار وإمكانية تكرار بناء المكتبة إلى أقصى حد.
تحديد
| رقم القط. | 12305ES08 / 12305ES24 / 12305ES96 |
| مقاس | 8 ت / 24 ت / 96 ت |
عناصر
| لا. | اسم | 12305ES08 | 12305ES24 | 12305ES96 | |
| 12305-أ | برايمر عشوائي | 20 ميكرولتر | 60 ميكرولتر | 240 ميكرولتر | |
| 12305-ب | مُنظِّم تفاعل cDNA | 64 ميكرولتر | 192 ميكرولتر | 768 ميكرولتر | |
| 12305-ج | مزيج إنزيم cDNA | 16 ميكرولتر | 48 ميكرولتر | 192 ميكرولتر | |
| 12305-د | عازل سميراز | 80 ميكرولتر | 240 ميكرولتر | 960 ميكرولتر | |
| 12305-E | مزيج إنزيم سميراز | 40 ميكرولتر | 120 ميكرولتر | 480 ميكرولتر | |
| 12305-ف | مُعزز الربط | 240 ميكرولتر | 720 ميكرولتر | 2×1440 ميكرولتر | |
| 12305-ج | رواية ربطة الحمض النووي T4 | 40 ميكرولتر | 120 ميكرولتر | 480 ميكرولتر | |
| 12305-ح | 2×سوبر كاناس® II مزيج عالي الدقة | 200 ميكرولتر | 600 ميكرولتر | 2×1200 ميكرولتر | |
| * | مزيج التمهيدي* | 40 ميكرولتر | 120 ميكرولتر | 480 ميكرولتر | |
ملحوظة: * يشير إلى أن هذا الكاشف غير متضمن في هذه المجموعة وأن الكواشف الإضافية مطلوبة. المجموعة يكون متوافق مع المنصات المزدوجة إلومينا®&MGI®، ولكن مزيج تمهيدي إضافي (CAT # 13334 مزيج تمهيدي لـ MGI® ومزيج تمهيدي رقم 13335 لـ Illumina®) مطلوب.
سير العمل:
تخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة 1 سنة.
ملحوظات
حول العملية
- 1. يرجى العمل بمعاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، من أجل سلامتك.
- قم بتذويب المكونات في درجة حرارة الغرفة.بعد إذابة الثلج، قم بخلط المكونات جيدًا باستخدام الدوامة، ثم قم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة ثم ضعه على الثلج لاستخدامه لاحقًا.
- يُنصح بإجراء كل خطوة من خطوات التفاعل في جهاز حراري مزود بغطاء ساخن. يجب تسخين جهاز الحراري مسبقًا إلى درجة الحرارة المحددة قبل الاستخدام.
- يرجى استخدام المواد الاستهلاكية الخالية من RNaseالتلوث، وتنظيف المنطقة التجريبية بانتظام. RNAZap من ThermoFisherالعلامة التجارية تم التوصية باستخدام رذاذ إزالة الأحماض النووية عالي الكفاءة لإزالة تلوث RNase.
- من المحتمل جدًا أن تؤدي العمليات غير السليمة إلى تلوث الهباء الجوي، مما يؤثر على دقة النتيجة.يوصى بالعزل المادي الإلزامي لمناطق خلط تفاعل البوليميراز المتسلسل ومناطق تنقية منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل. مجهز بمعدات مثل الماصات المتخصصة لبناء المكتبة.
- 6. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
ربط المحول
- تتوفر مجموعات المحولات الطويلة (المحولات الشريطية) ومجموعات المحولات القصيرة من Illumina أو MGI للعملاء للاختيار وفقًا لمتطلباتهم التجريبية.
- يوصى باختيار محولات تجارية عالية الجودة. إذا تم اختيار محولات ذاتية الصنع، فيرجى تكليف شركة ذات خبرة في تصنيع برايمر NGS والإشارة إلى الحاجة إلى التحكم الصارم في التلوث. بالإضافة إلى ذلك، يوصى بإعداد محلول التلدين DNA في مقعد نظيف وتشغيل نوع واحد فقط من المحولات في كل مرة لمنع التلوث المتبادل.
- يرجى إذابة المحولات على الجليد أو عند 4 درجات مئوية؛ عند التشغيل في درجة حرارة الغرفة، يجب ألا تتجاوز درجة حرارة المختبر 25 درجة مئوية لمنع المحولات من التحلل.
- يؤثر تركيز المحول بشكل مباشر على كفاءة الربط وإنتاجية المكتبة. يتم تثبيت حجم المحول المضاف إلى المجموعة عند 5 ميكرولتر. يوصى بتخفيف المحولات بمحلول 0.1×TE ويمكن تخزين المحولات المخففة عند 4 درجات مئوية لمدة 48 ساعة. الجدول1 يسرد كمية المحول الموصى بها لكميات مختلفة من RNA المدخلة.
الجدول 1-1 Illumina الموصى بها® كمية المحول للمدخلات المختلفة الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA
| إجمالي المدخلات الحمض النوويالحمض النووي الريبوزي | إلومينا® تركيز مخزون المحول |
| <10 نانوغرام | 3 ميكرومتر |
| ≥10 نانوغرام | 15 ميكرومتر |
الجدول 1-2 MGI الموصى بها® كمية المحول للمدخلات المختلفة الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA
| إجمالي المدخلات الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA | إم جي آي® تركيز مخزون المحول |
| <10 نانوغرام | 5 ميكرومتر |
| ≥10 نانوغرام | 10 ميكرومتر |
*يمكن تعديل استخدام المحول وفقًا لأنواع مختلفة من عينات إجمالي الحمض النووي الريبي وكمية الإدخال.
تضخيم المكتبة
يجب التحكم بشكل صارم في أرقام دورة التضخيم. قد يؤدي التضخيم غير الكافي إلى انخفاض إنتاج المكتبة؛ قد يؤدي التضخيم المفرط إلى زيادة التحيز والأخطاء والقراءة المكررة والمنتجات الكيميرية. الجدول 2 تسرد أرقام الدورة الموصى بها والتي تستهدف إنتاج المكتبة بمقدار 1 ميكروجرام.
طاولة 2 العدد الموصى به من الدورات لإنشاء مكتبة DNA&RNA *
| إجمالي المدخلات DNA&RNA | عدد الدورات |
| <1 نانوغرام | 10~12 |
| 1 نانوغرام | 9~10 |
| 10 نانوغرام | 6~7 |
| 50 نانوغرام | 4~5 |
| 100~1000 نانوغرام | 4 |
ملاحظة: *لا يرتبط إنتاج المكتبة بكمية الإدخال وعدد دورات التضخيم فحسب، بل يتأثر أيضًا بجودة العينات وظروف التجزئة وظروف الفرز. في عملية إنشاء المكتبة، اختر الظروف الأكثر ملاءمة وفقًا للموقف الفعلي.
تنظيف الحمض النووي واختيار الحجم بناءً على الخرز
- 1. هناك خطوات متعددة في عملية إنشاء المكتبة تتطلب استخدام حبيبات مغناطيسية لتنقية الحمض النووي. نوصي باستخدام حبيبات Hieff NGS™ DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601) أو حبيبات AMPure® XP المغناطيسية (Beckman Cat#A63880) لتنقية الحمض النووي واختيار الحجم.
- 2. يجب موازنة الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام، وإلا فإن العائد سوف ينخفض وسوف يتأثر تأثير اختيار الحجم.
- 3. يجب خلط الخرز المغناطيسي جيدًا باستخدام الدوامة أو الماصة قبل الاستخدام.
- 4. لا تقم بشفط الخرز عند نقل السائل العلوي، فحتى الكميات الضئيلة من الخرز قد تؤثر على التفاعلات التالية.
- 5. يجب تحضير 80% من الإيثانول طازجًا، وإلا فسوف يؤثر ذلك على كفاءة الاسترداد.
- 6. يجب تجفيف الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل غسل المنتج. سيؤدي الجفاف غير الكافي بسهولة إلى تأثر التفاعلات اللاحقة ببقايا الإيثانول؛ سيؤدي الجفاف المفرط إلى تشقق الخرز المغناطيسي وتقليل عائد التنقية. عادةً، يكون التجفيف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق كافيًا للسماح للخرز بالجفاف تمامًا.
- 7. إذا لزم الأمر، يتم تنقية عينات الحمض النووي أو اختيار حجمها وإخراجها في1× يمكن تخزين محلول TE عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أسبوع أو عند -20 درجة مئوية لمدة شهر.
تحليل جودة المكتبة
- يتم تحليل جودة المكتبات المُنشأة بشكل عام عن طريق قياس التركيزات وتوزيعات الحجم.
- يمكن قياس تركيزات المكتبات باستخدام طرق تعتمد على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen أو qPCR.
- لا يُنصح باستخدام طرق القياس المعتمدة على الامتصاص مثل NanoDrop.
- يُنصح باستخدام طريقة qPCR لتحديد كمية المكتبة: لا تستطيع الطرق القائمة على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen التمييز بين هياكل dsDNA غير المكتملة (الإدخالات بدون محول أو مع ربط أحد الطرفين فقط بمحول) من المكتبات الكاملة. ستعمل طريقة qPCR فقط على تضخيم وقياس المكتبات الكاملة مع ربط كلا الطرفين بمحولات (المكتبات القابلة للتسلسل)، وبالتالي توفير قياس أكثر دقة للتحميل.
- يمكن تحليل توزيع حجم المكتبات باستخدام جهاز Agilent Bioanalyzer أو أجهزة أخرى تعتمد على مبادئ الرحلان الكهربائي الشعري أو الميكروفلويديك.
مواد أخرى
- 1. خرزات تنقية الحمض النووي المغناطيسية: خرزات اختيار الحمض النووي Hieff NGS™ (Yeasen Cat#12601) أو AMPure®خرز XP (A63880) أو منتجات أخرى معادلة.
2.المحولات: محول كامل لـ Illumina (Yeasen Cat#13519-13520 أو منتجات أخرى معادلة) أو محول كامل لـ MGI (Yeasen Cat#13360-13362 أو منتجات أخرى معادلة).
- تحليل جودة المكتبة: شريحة Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000/ شريحة عالية الحساسية أو منتجات أخرى مكافئة؛ الكواشف الكمية للمكتبة.
- مواد أخرى: الإيثانول المطلق، الماء النقي للغاية المعقم، أطراف الماصة ذات الاحتفاظ المنخفض، أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل، الحوامل المغناطيسية، الدورة الحرارية، إلخ.
وثائق:
الدليل
12305ES-Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit V2.pdf
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.
