وصف
وصف المنتج
مجموعة تحضير مكتبة RNA ثنائية الوضع Hieff NGS™ Ultima هي مجموعة بناء مكتبة تسلسل RNA كاملة لمنصة تسلسل Illumina® وMGI®، بما في ذلك كواشف تجزئة RNA وكواشف النسخ العكسي وكواشف تخليق ds-cDNA التقليدية والخاصة بالسلسلة وكواشف تضخيم المكتبة. يمكن إنشاء مكتبة التسلسل متبوعة بمجموعة تنقية mRNA أو مجموعة إزالة rRNA. تم تجهيز وحدة التخليق ذات السلسلتين بمخزنين مؤقتين لتلبية الحاجة إلى مكتبة تقليدية أو مكتبة خاصة بالسلسلة. من بينها، يتم استبدال dTTP بـ dUTP في مخزن التخليق ذي السلسلتين الخاص بالسلسلة، لذلك يمكن إضافة dUTP إلى السلسلة الثانية من cDNA. لا يمكن لبوليميراز DNA عالي الدقة المستخدم في هذه المجموعة تضخيم قالب DNA المحتوي على اليوراسيل، مما يحقق خصوصية السلسلة. لقد خضعت جميع الكواشف المقدمة لمراقبة جودة صارمة والتحقق الوظيفي، مما يضمن استقرار وإمكانية إعادة إنتاج بناء المكتبة إلى أقصى حد.
سير العمل
مكونات المنتج
| عناصر | 12308ES24 | 12308ES96 | |||
| 12308-أ | 2 × مخزن مؤقت للأجزاء المجزأة/الأساسية | 250 ميكرولتر | 930 ميكرولتر | ||
| 12308-ب | مزيج إنزيمات السلسلة الأولى | 48 ميكرولتر | 192 ميكرولتر | ||
| 12308-ج | كاشف تحديد نوعية الخيوط | 150 ميكرولتر | 580 ميكرولتر | ||
| 12308-د | المخزن المؤقت للخيط الثاني (dNTP) | 720 ميكرولتر | 2×1440 ميكرولتر | ||
| 12308-E | المخزن المؤقت للخيط الثاني (dUTP) | 720 ميكرولتر | 2×1440 ميكرولتر | ||
| 12308-ف | مزيج رئيسي من إنزيم السلسلة الثانية | 120 ميكرولتر | 480 ميكرولتر | ||
| 12308-ج | مُعزز الربط | 720 ميكرولتر | 2×1440 ميكرولتر | ||
| 12308-ح | رابطة الحمض النووي T4 الجديدة | 120 ميكرولتر | 480 ميكرولتر | ||
| 12308-أ | 2×سوبر كاناس® II مزيج عالي الدقة | 600 ميكرولتر | 2×1200 ميكرولتر | ||
| 12308-ك | ماء خالي من النوكلياز | 300 ميكرولتر | 1000 ميكرولتر | ||
ملاحظة: هذه المجموعة متوافقة مع كل من منصتي Illumina وMGI، ولكن لا تتوفر Illumina إضافية أو إم جي آي مزيج تمهيدي (رقم القطعة 13335) مزيج تمهيدي لـ Illumina ومزيج تمهيدي رقم 13334 لـ MGI ) يكون مطلوب.
الشحن والتخزين
يتم شحن مكونات مجموعة تحضير مكتبة mRNA ثنائية الوضع Hieff NGS™ Ultima في الصندوق الأول مع أكياس ثلج ويمكن تخزينها في درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة عام واحد.
يتم شحن مكونات مجموعة تحضير مكتبة mRNA ثنائية الوضع Hieff NGS™ Ultima في الصندوق الثاني مع الثلج الجاف ويمكن تخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة عام واحد.
تحذيرات
1 عملية
1.1 من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معدات الحماية الشخصية (PPE)، مثل المعاطف المعملية والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، عند استخدام هذا المنتج. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط!
1.2 قم بتذويب المكونات في درجة حرارة الغرفة. امزج المكونات جيدًا عن طريق قلبها لأعلى ولأسفل عدة مرات، ثم قم بتدويرها لأسفل لفترة وجيزة وضعها على الثلج للاستخدام.
1.3 يوصى بإجراء كل خطوة من خطوات التفاعل في جهاز تدوير حراري مزود بغطاء ساخن. يجب تسخين جهاز التدوير الحراري مسبقًا إلى درجة الحرارة المحددة قبل الاستخدام.
1.4 من الضروري توفير إمدادات خالية من تلوث RNase وتنظيف المنطقة التجريبية بانتظام.
1.5 من المحتمل جدًا أن تتسبب العمليات غير السليمة في تلوث الهباء الجوي، مما يؤثر على دقة النتيجة. يوصى بالعزل المادي الإلزامي لمناطق خلط تفاعل البوليميراز المتسلسل ومناطق تحليل تنقية منتج البوليميراز المتسلسل. مجهزة بمعدات مثل الماصات المتخصصة لبناء المكتبة.
2 محول الربط
2.1 تتوفر مجموعات المحولات الطويلة (المحولات الشريطية) ومجموعات المحولات القصيرة من Illumina أو MGI ليختار منها العملاء وفقًا لمتطلباتهم التجريبية.
2.2 يوصى باختيار محولات تجارية عالية الجودة. إذا تم اختيار محولات ذاتية الصنع، فيرجى تكليف شركة ذات خبرة في تصنيع برايمر الجيل التالي من التسلسل وملاحظة الحاجة إلى التحكم الصارم في التلوث. بالإضافة إلى ذلك، يوصى بإعداد محلول التلدين DNA في مقعد نظيف وتشغيل نوع واحد فقط من المحولات في كل مرة لمنع التلوث المتبادل.
2.3 يرجى إذابة المحولات على الجليد أو عند 4 درجات مئوية؛ عند التشغيل في درجة حرارة الغرفة، يجب ألا تتجاوز درجة حرارة المختبر 25 درجة مئوية لمنع المحولات من التحلل.
2.4 يؤثر تركيز المحول بشكل مباشر على كفاءة الربط وإنتاجية المكتبة. يتم تثبيت حجم المحول المضاف إلى المجموعة عند 5 ميكرولتر. يوصى بتخفيف المحولات بمحلول 0.1×TE ويمكن تخزين المحولات المخففة عند 4 درجات مئوية لمدة 48 ساعة. يوضح الجدول 1 كمية المحول الموصى بها لكميات مختلفة من RNA المدخلة.
الجدول 1-1 كمية محول Illumina الموصى بها لمدخلات RNA المختلفة
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | إلومينا تركيز مخزون المحول |
| 10 نانوغرام | 1 ميكرومتر |
| 100 نانوغرام | 1.5 ميكرومتر |
| 500 نانوغرام | 3 ميكرومتر |
| ≥1 ميكروجرام | 5 ميكرومتر |
الجدول 1-2 كمية محول MGI® الموصى بها لمدخلات RNA المختلفة
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | إم جي آي تركيز مخزون المحول |
| 100-499 نج | 2 ميكرومتر |
| 500-4000 نانوغرام | 5 ميكرومتر |
*يمكن تعديل استخدام المحول وفقًا لأنواع مختلفة من عينات إجمالي الحمض النووي الريبي وكمية الإدخال.
3 تضخيم المكتبة
3.1 على أساس بوليميراز الحمض النووي من الجيل الأول، فإن بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة في المجموعة قد حسن بشكل كبير من توحيد التضخيم ولا يظهر أي تحيز في التضخيم.
3.2 إذا تم ربط المحول المفهرس (المعروف أيضًا باسم المحول الطويل أو محول Y الكبير) بالحمض النووي المستهدف، فيمكن استخدام مزيج البادئ المقدم في هذه المجموعة للتضخيم؛ إذا تم استخدام "محول قصير" أو "محول Y صغير" لربط الحمض النووي، تكون هناك حاجة إلى بادئات الفهرس للتضخيم.
3.3 يجب التحكم بشكل صارم في أرقام دورة التضخيم. قد يؤدي التضخيم غير الكافي إلى انخفاض إنتاج المكتبة؛ وقد يؤدي التضخيم المفرط إلى زيادة التحيز والأخطاء والقراءة المكررة والمنتجات الكيميرية وتراكم الطفرات التوسعية. يسرد الجدول 2 أرقام الدورة الموصى بها لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.
الجدول 2 العدد الموصى به من الدورات لتوليد مكتبة RNA*
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | عدد الدورات | |
| غير متقطع | تقطعت بهم السبل | |
| 10 نانوغرام | 15 | 15 |
| 100 نانوغرام | 14 | 14 |
| 500 نانوغرام | 12 | 13 |
| 1 ميكروجرام | 11 | 12 |
ملاحظة:*لا يرتبط إنتاج المكتبة فقط بكمية الإدخال وعدد دورات التضخيم ولكن تتأثر أيضًا بجودة العينات وظروف التجزئة وظروف الفرز. في عملية بناء المكتبة، اختر الظروف الأكثر ملاءمة وفقًا للموقف الفعلي.
4 تنظيف الحمض النووي واختيار الحجم بناءً على الخرز
4.1 هناك خطوات متعددة في عملية إنشاء المكتبة تتطلب استخدام حبيبات مغناطيسية لتنقية الحمض النووي. نوصي باستخدام حبيبات Hieff NGS™ DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601) أو حبيبات AMPure® XP المغناطيسية (Beckman Cat#A63880) لتنقية الحمض النووي واختيار الحجم.
4.2 يجب موازنة الخرز المغناطيسي عند درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام، وإلا فإن العائد سوف ينخفض وسوف يتأثر تأثير اختيار الحجم.
4.3 يجب خلط الخرز المغناطيسي جيدًا باستخدام الدوامة أو الماصة قبل الاستخدام.
4.4 لا تقم بشفط الخرز عند نقل السائل العلوي، فحتى الكميات الضئيلة من الخرز قد تؤثر على التفاعلات التالية.
4.5 يجب تحضير 80% من الإيثانول طازجًا، وإلا فسوف يؤثر ذلك على كفاءة الاسترداد.
4.6 يجب تجفيف الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل استخلاص المنتج. سيؤدي الجفاف غير الكافي بسهولة إلى تأثر التفاعلات اللاحقة ببقايا الإيثانول؛ سيؤدي الجفاف المفرط إلى تشقق الخرز المغناطيسي وتقليل عائد التنقية. عادةً، يكون التجفيف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق كافيًا للسماح للخرز بالجفاف تمامًا.
4.7 إذا لزم الأمر، يمكن تخزين عينات الحمض النووي النقية أو المختارة الحجم والمغسولة في محلول TE عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أسبوع أو عند -20 درجة مئوية لمدة شهر.
5 تحليل جودة المكتبة
5.1 عادةً، يمكن تقييم جودة المكتبة المُنشأة من خلال توزيع الطول وكشف التركيز.
5.2 الكشف عن تركيز المكتبة: طرق تعتمد على صبغات الفلورسنت للحمض النووي مزدوج السلسلة، مثل Qubit® وPicoGreen® وما إلى ذلك؛ والتقدير المطلق يعتمد على qPCR.
5.3 لا تنطبق الطرق المعتمدة على الكشف الطيفي، مثل NanoDrop® وما إلى ذلك، على الكشف عن تركيز المكتبة.
5.4 يوصى باستخدام qPCR للكشف عن تركيز المكتبة: من خلال Qubit® وPicoGreen® والطرق الأخرى القائمة على صبغات الفلورسنت DNA مزدوجة السلسلة، لا يمكنها التمييز بشكل فعال بين المنتجات المرتبطة بمحولات في أحد الطرفين، والمنتجات غير المرتبطة بمحولات في كلا الطرفين، وغيرها من المنتجات غير المكتملة ذات السلسلتين. يعتمد التحديد الكمي المطلق لـ qPCR على مبدأ تضخيم PCR، والذي يحدد فقط المكتبة الكاملة للمحول في كلا طرفي العينة (المكتبة التي يمكن تسلسلها)، باستثناء تداخل المكتبات غير المتسلسلة التي لا ترتبط بالمحول في أي من الطرفين أحادي الطرف أو ثنائي الطرف.
5.5 يمكن إجراء الكشف عن توزيع طول المكتبة بواسطة جهاز Agilent Bioanalyzer 2100 وغيره من المعدات استنادًا إلى مبدأ الرحلان الكهربائي الشعري أو الميكروفلويديك.
وثائق:
مجموعة تحضير مكتبة RNA ثنائية الوضع 12308ES-Hieff NGS™ Ultima-Ver.EN20230327.pdf
الاستشهادات والمراجع:
[1] فك شفرة ميكروبيوم أمعاء سمك الشبوط العشبي من خلال نهج متعدد الجينات
M Li، H Liang، H Yang، Q Ding، R Xia، J Chen، W Zhou… - ميكروبيوم، 2024 IF:19.4
[2] يحدد فحص CRISPR المجمع أجسام P باعتبارها مثبطة للتحول الظهاري المتوسطي للسرطان
L Fang، L Zhang، M Wang، Y He، J Yang، Z Huang… - أبحاث السرطان، 2024 IF:12.7
[3] يعمل الببتيد 1 المشتق من كلوثو على تثبيط الشيخوخة الخلوية في الكلى المتليفة عن طريق استعادة تعبير كلوثو عبر التنظيم ما بعد النسخ
X Zhang، L Li، H Tan، X Hong، Q Yuan، FF Hou… - علم التشخيص العلاجي، 2024 IF:12.4
[4] الخلايا الجذعية المغلفة جزئيًا للهيكل الخارجي لاستعادة عضلة القلب المصابة بالاحتشاء
H He، Y Yuan، Y Wu، J Lu، X Yang، K Lu… - المواد المتقدمة، 2023 IF: 29.4
[5] الابتكار الجينومي وإعادة التوصيل التنظيمي أثناء تطور جنس القطن Gossypium
م وانج، جيه لي، زد تشي، واي لونج، إل باي، إكس هوانج... - علم الوراثة الطبيعي، 2022 IF:41.379
[6] تعمل أليلات الخطر MTMR3 على تعزيز مناعة IgA المستحثة بواسطة مستقبل Toll Like Receptor 9 في اعتلال الكلية IgA
Y Wang، T Gan، S Qu، L Xu، Y Hu، L Liu، S Shi، J Lv... - Kidney International، 2023 IF:19.6
[7] تقسيم التكامل بين محرري القاعدة لتقليل التعديلات غير المستهدفة
X Xiong، K Liu، Z Li، FN Xia، XM Ruan، X He، JF Li - نباتات الطبيعة، 2023 IF:18.6
[8] تعمل الحويصلات الغشائية الخارجية البكتيرية المصممة هندسيًا والتي تغلف الفيروسات الغدية المحللة للأورام على تعزيز فعالية العلاج الفيروسي للسرطان عن طريق زيادة الالتهام الذاتي لخلايا الورم
W Ban، M Sun، H Huang، W Huang، S Pan… - Nature Communications، 2023 IF:16.6
[9] يمكن أن تحدث مقاومة الخلايا السرطانية لـ IFNγ من خلال نشاط مسار إصلاح كسر السلسلة المزدوجة المعزز
T Han, X Wang, S Shi, W Zhang, J Wang, Q Wu… - أبحاث علم المناعة السرطانية، 2023 IF: 12.0
[10] العلاج المركب القائم على نظام توصيل نانوي ثنائي الهدف للتغلب على مقاومة السيسبلاتين في سرطان الخلايا الكبدية
Y Huang، Q Kou، Y Su، L Lu، X Li، H Jiang… - مجلة تكنولوجيا النانو الحيوية، 2023 IF: 10.9
[11] يعزز PIAS3 موت الخلايا الحديدية عن طريق تنظيم TXNIP عبر مسار إشارات TGF-β في سرطان الخلايا الكبدية
W Bao، J Wang، K Fan، Y Gao، J Chen - البحث الدوائي، 2023 IF:9.3
[12] تحديد أهداف البروتين المرتبط بالحمض النووي الريبي باستخدام HyperTRIBE في الخميرة Saccharomyces cerevisiae
W Piao، C Li، P Sun، M Yang، Y Ding، W Song... - المجلة الدولية للعلوم الجزيئية، 2023 IF:5.6
[13] تنظم ميكروبات البحر انتقال دورة الحياة وديناميكيات الخلايا الخيطية في قنديل البحر
إس بينج، لي يي، واي لي، إف وانج، تي صن، إل وانج، دبليو هاو... - Iscience، 2023 IF: 5.08
[14] تكشف ملفات تعريف النسخ والميكروRNA عن الشبكة التنظيمية والمنظمات الرئيسية لتكوين الخشب الثانوي في شجر الحور "84K"
H Wang، P Zhao، Y He، Y Su، X Zhou… - المجلة الدولية للعلوم الجزيئية، 2023 IF:5.6
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.