وصف
هييف NGS™ مجموعة أدوات مكتبة DNA Flash One Pot PrepKit هي مجموعة أدوات مكتبة DNA إنزيمية سريعة،ساحرة يحتوي على إنزيم عالي الجودة لتفتيت الحمض النووي ويجمع بين تفتيت الحمض النووي وإصلاح النهاية و dA-tailing في خطوة واحدة، مما يقلل الوقت بشكل كبير وتكلفة إعداد المكتبة.
تتوافق مجموعة إعداد المكتبة هذه مع 100 عينة تتراوح من بيكو جرام إلى 500 نانوجرام من جميع الحيوانات والنباتات والكائنات الحية الدقيقة الشائعة وما إلى ذلك.
وتحقيق تجزئة الحمض النووي بسرعة وإصلاح الطرف وتفاعل إضافة الذيل A في أنبوب واحد. يجب أن تتوافق المجموعة مع المحولات والبادئات، وهي متوافقة مع Illumina و إم جي آي منصات التسلسل عالية الإنتاجية.
ميزة
1) مناسب لعينات الحمض النووي الجينومي من 100 بيكو جرام إلى 500 نانوجرام.
2)متوافق مع Illumina و إم جي آي منصات التسلسل عالية الإنتاجية.
3)التفتت وإصلاح النهاية والذيل A رد فعل داخل 5 دقائق
4)معدل تحويل مكتبة فعال وكفاءة التضخيم.
تحديد
| رقم القط. | 12316ES24 / 12316ES96 |
| مقاس | 24 ت / 96 ت |
عناصر
| اسم | 12316ES24 | 12316ES96 | |
| 12316-أ | سميراز مزج | 240 ميكرومترل | 960 ميكرومترل |
| 12316-ب | مُعزز الربط | 720 ميكرومترل | 4×720 ميكرومترل |
| 12316-ج | ربطة الحمض النووي T4 السريعة | 120 ميكرومترل | 480 ميكرومترل |
| 12316-د | 2×ألتيما HF مزيج التضخيم | 600 ميكرومترل | 4×600 ميكرومترل |
| * | مزيج التمهيدي* | 120 ميكرومترل | 480 ميكرومترل |
ملحوظة: * يشير إلى أن هذا الكاشف غير متضمن في هذه المجموعة وأن هناك حاجة إلى كواشف إضافية.الطقم يكون متوافق مع المنصات المزدوجة إلومينا و إم جي آي، ولكن مزيج تمهيدي إضافي (CAT # 13334 مزيج تمهيدي لـ MGI ويجب استخدام مزيج التمهيدي (رقم القطعة 13335) لـ Illumina.
تخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25~-15درجة مئوية ل1 سنة.
الأرقام
الشكل 1. الكشف عن الحمض النووي لعشرة أنواع من الكائنات الحية الدقيقة
تم إعداد المكتبات باستخدام القطة رقم 12316 بروتوكول ,10 نانوغرام من معيار الحمض النووي للمجتمع الميكروبي ZymoBIOMICS (Zymo Research® #D6306). تم تجميع المكتبات وتسلسلها على Illumina (إس إي 75).تم توحيد بيانات التسلسل إلى 20 مليونًا وتمت مقارنة التركيب المتوقع والمكتشف لكلا المستويين المدخلين. وكان اكتشاف الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الميكروبي المحدد متوافقًا مع التركيب المتوقع. التركيب المتوقع: Cryptococcus neoformans 2%، Saccharomyces cerevisiae 2%، Bacillus subtilis 12%، Escherichia coli 12%، Enterococcus faecalis 12%، Lactobacillus fermentum 12%، Listeria monocytogenes 12%، Pseudomonas aeruginosa 12%، Staphylococcus aureus 12% وSalmonella enterica 12%.
حول العملية
1. يرجى العمل مرتديًا معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة،من أجل سلامتك.
2. قم بتذويب المكونات في درجة حرارة الغرفة. بعد الذوبانقم بخلط المكونات جيدًا عن طريق تحريكها في دوامة، ثم قم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة ثم ضعه على الثلج لاستخدامه لاحقًا.
3. عند تحضير محلول التفاعل في كل خطوة، يوصى باستخدام ماصة للنفخ والخلط بالتساوي أو رجها برفق. قد يؤدي الاهتزاز العنيف إلى انخفاض إنتاج المكتبة.
4. لتجنب التلوث المتبادل للعينات، يوصى باستخدام رأس مسدس مزود بعنصر فلتر. يرجى استبدال رأس المسدس عند امتصاص عينات مختلفة.
5. يوصى بإجراء كل خطوة من خطوات التفاعل في جهاز حراري مزود بغطاء ساخن. يجب تسخين جهاز الحراري مسبقًا إلى درجة الحرارة المحددة قبل الاستخدام.
6. من المحتمل جدًا أن تتسبب العمليات غير السليمة في تلوث الهباء الجوي، مما يؤثر على دقة النتيجة. يوصى بالعزل المادي الإلزامي لمناطق خلط تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل ومناطق تحليل تنقية منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل. مجهزة بمعدات مثل الماصات المتخصصة لبناء المكتبة.
7. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
حول تجزئة الحمض النووي
1. النطاق المتوافق لهذه المجموعة هو 100 صفحة-500 نانوجرام من الحمض النووي المدخل. يجب استخدام الحمض النووي المدخل عالي الجودة مع A260/A280 = 1.8-2.0 قدر الإمكان.
2. إذا احتوى الحمض النووي المدخل على تركيز عالٍ من عامل استخلاب أيونات معدنية أو أملاح أخرى، فقد يؤثر ذلك على التجارب اللاحقة. يوصى بتخفيف الحمض النووي في ddH2O أو Tebuffer (10 مم tris-HCl، درجة حموضة 8.0-8.5؛ 0.1 مليمول EDTA).
3. بالنسبة لمعظم الحمض النووي الجينومي عالي الجودة، يظهر وقت الهضم في الجدول 1. تتمتع المجموعة بتفضيل منخفض ويمكنها تحمل قوالب مختلفة ذات محتوى GC.
الجدول 1. الوقت الموصى به لتجزئة الحمض النووي الجينومي التقليدي
| أدخل حجم الذروة | وقت التفتت | نطاق التحسين |
| 200 نقطة أساس | 5 دقائق | 3-8 دقيقة |
| 150 نقطة أساس | 8 دقائق | 5-10 دقيقة |
ربط المحول
1. يؤثر تركيز المحول بشكل مباشر على كفاءة الربط وإنتاجية المكتبة. قد يؤدي الاستخدام المفرط للمحول إلى إنتاج المزيد من ثنائي المحول؛ قد تؤثر الجرعة المنخفضة على ربط الكفاءة وعائد المكتبة. الجدولان 2 و3 يسردان الكمية الموصى بها محول لإدخالات الحمض النووي المختلفة باستخدام هذه المجموعة.
الجدول 2. المنتج الموصى به Illumina كمية المحول لمدخلات الحمض النووي المختلفة
| إدخال الحمض النووي | 15 ميكرومترمحول م تخفيف متعدد | مقدار |
| 50 نانوجرام-500 نانوجرام | 10 | 5 ميكرومترل |
| 1 نج-50 نج | 20 | 5 ميكرومترل |
| 100 ص.ج-1 نج | 30 | 5 ميكرومترل |
الجدول 3. MGI الموصى بها كمية المحول لمدخلات الحمض النووي المختلفة
| إدخال الحمض النووي | 10 ميكرومترم محول التخفيف المتعدد | مقدار |
| 50 نانوجرام-500 نانوجرام | التخفيف المتعدد | 5 ميكرومترل |
| 10 نج-50 نج | 10 | 5 ميكرومترل |
| 100 ص.ج-10 نج | 5 | 5 ميكرومترل |
تضخيم المكتبة
يجب التحكم بشكل صارم في أرقام دورة التضخيم. قد يؤدي التضخيم غير الكافي إلى انخفاض إنتاج المكتبة؛ قد يؤدي التضخيم المفرط إلى زيادة التحيز والأخطاء والقراءة المكررة والمنتجات الكيميرية. الجدول 4 يسرد أرقام الدورة الموصى بها والتي تستهدف إنتاج المكتبة من 1 ميكرومترج.
الجدول 4. الدورات الموصى بها من 100 بيكو جرام إلى 500 نانوجرام من الحمض النووي المدخل
| مدخلات الحمض النووي (نانوغرام) | عدد الدورات المطلوبة لتوليد 1 ميكرومترج |
| 500 نانوغرام | 2-4 |
| 250 نانوغرام | 4-6 |
| 100 نانوغرام | 5-7 |
| 50 نانوغرام | 7-9 |
| 5 نج | 11-13 |
| 100 صفحة | 14-16 |
تنظيف الحمض النووي واختيار الحجم بناءً على الخرز
1. هناك خطوات متعددة في عملية إنشاء المكتبة تتطلب خرزات مغناطيسية لتنقية الحمض النووي. نوصي باستخدام Hieff NGS™ خرز اختيار الحمض النووي (Yeasen Cat#12601) أو AMPure™ خرزات مغناطيسية XP (Beckman Cat#A63880) لتنقية الحمض النووي واختيار الحجم.
2. يجب موازنة الخرز المغناطيسي عند درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام، وإلا فإن العائد سوف ينخفض وسوف يتأثر تأثير اختيار الحجم.
3. يجب خلط الخرز المغناطيسي جيدًا باستخدام الدوامة أو الماصة قبل الاستخدام.
4. لا تقم بشفط الخرز عند نقل السائل العلوي، فحتى الكميات الضئيلة من الخرز قد تؤثر على التفاعلات التالية.
5. يجب تحضير 80% من الإيثانول طازجًا، وإلا فسوف يؤثر ذلك على كفاءة الاسترداد.
6. يجب تجفيف الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل استخلاص المنتج. سيؤدي الجفاف غير الكافي بسهولة إلى تأثر التفاعلات اللاحقة ببقايا الإيثانول؛ سيؤدي الجفاف المفرط إلى تشقق الخرز المغناطيسي وتقليل عائد التنقية. عادةً، يكون التجفيف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق كافيًا للسماح للخرز بالجفاف تمامًا.
7. إذا لزم الأمر، يتم غسل عينات الحمض النووي المنقاة أو المختارة حسب الحجم في 0.1× يمكن تخزين محلول TE عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أسبوع أو عند -20 درجة مئوية لمدة شهر.
تحليل جودة المكتبة
1. يتم تحليل جودة المكتبات المُنشأة بشكل عام عن طريق قياس التركيزات وتوزيعات الحجم.
2. يمكن قياس تركيزات المكتبات باستخدام طرق تعتمد على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen أو qPCR.
3. لا يُنصح باستخدام طرق القياس المعتمدة على الامتصاص مثل NanoDrop.
4. يوصى باستخدام طريقة qPCR لتحديد كمية المكتبة: لا تستطيع الطرق القائمة على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen التمييز بين هياكل dsDNA غير المكتملة (الإدخالات بدون محول أو مع ربط أحد الطرفين فقط بالمحول) من المكتبات الكاملة. ستعمل طريقة qPCR فقط على تضخيم وقياس المكتبات الكاملة مع ربط كلا الطرفين بالمحولات (المكتبات القابلة للتسلسل)، وبالتالي توفير قياس أكثر دقة للتحميل.
5. يمكن تحليل توزيع حجم المكتبات باستخدام جهاز Agilent Bioanalyzer أو أجهزة أخرى تعتمد على مبادئ الرحلان الكهربائي الشعري أو الميكروفلويديك.
وثائق:
ورقة بيانات السلامة
12316_بيانات سلامة المواد_HB250211_EN.PDF
الدليل
12316_الإصدار_الدليلين20241225.pdf
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.