وصف
هييف NGSالعلامة التجارية مجموعة تحضير مكتبة EvoMax RNA (dUTP) هي ممزوجة مسبقا، أكتينوميسين د مجاني و خاص بالسلسلة المجموع مكتبة تسلسل الحمض النووي الريبوزي تحضير طقم متوافق مع منصات Illumina وMGI. هذا المنتج متوفر بنوعين: أنبوب أو مجموعة الختم، و هذه المجموعة أكثر مريح سواء عن طريق جهاز معالجة السوائل الآلي أو التلاعب اليدوي تحتوي المجموعة على كواشف تجزئة الحمض النووي الريبي، وكواشف النسخ العكسي، وكواشف تخليق الحمض النووي الريبي التكميلي الخاص بالسلسلة، وكواشف تضخيم المكتبة. يمكن ربطه بمجموعة تنقية mRNA أو مجموعة إزالة rRNA إجراء أبحاث mRNA أو lncRNA. يعمل هذا المنتج على تحسين وحدة النسخ العكسي للحصول على مكتبة ذات خصوصية عالية للسلسلة بدون أكتينوميسين د، مما يضمن سلامة المجربين إلى حد أكبر. خضعت جميع الكواشف لمراقبة جودة صارمة والتحقق الوظيفي لتعظيم استقرار المكتبة وقابليتها للتكرار تحضير.
تحديد
| رقم القط. | 12340ES24/12340ES96/12340ES97/12340ES98 |
| مقاس | 24 طن / 96 طن / 96 طن (أتمتة) / 96 طن (لوحة) |
عناصر
| المكونات رقم | اسم | 12340ES24 | 12340ES96 | 12340ES97 (الأتمتة) | 12340ES98 (طبق )** |
| 12340-أ | مخزن مؤقت مجزأ/أساسي | 450 ميكرولتر | 2×900 ميكرولتر | 2×1064 ميكرولتر | 8×266 ميكرولتر |
| 12340-ب | الوحدة التفاعلية الأولى 20 | 192 ميكرولتر | 768 ميكرولتر | 960 ميكرولتر | 8×120 ميكرولتر |
| 12340-ج | وحدة التفاعل الثانية (dUTP) | 840 ميكرولتر | 3×1120 ميكرولتر | 3×1280 ميكرولتر | 8×480 ميكرولتر |
| 12340-د | وحدة تفاعل الربط | 840 ميكرولتر | 3×1120 ميكرولتر | 3×1280 ميكرولتر | 8×480 ميكرولتر |
| 12340-E | 2×مزيج Super Canace® II عالي الدقة | 600 ميكرولتر | 2×1200 ميكرولتر | 2×1360 ميكرولتر | 8×340 ميكرولتر |
| * | مزيج التمهيدي* | / | / | / | / |
ملاحظة: * يشير التدوين إلى أن المكون غير متضمن في المجموعة. يلزم وجود مزيج تمهيدي إذا تم استخدام المحولات الكاملة، وإلا فلن يتم تضمينه في المجموعة.'ت. هذه المجموعة متوافقة مع منصات Illumina وMGI، ولكنها تحتاج إلى مزيج تمهيدي إضافي (رقم الفئة 13334 مزيج تمهيدي لـ MGI)العلامة التجارية ومزيج التمهيدي رقم 13335 لـ Illumina®) لمنصة Illumina® أو MGI إذا تم استخدام المحولات الكاملة.
شكل
تخطيط مجموعة الكاشف اللوحي.
الشكل 1: تخطيط الكاشف لمجموعة مكتبة لوحة الختم
الشكل 2. مكونات مبسطة لـ مجموعة تحضير مكتبة EvoMax RNA.
تخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة 1 سنين.
تعليمات
1. الكمية الموصى بإضافتها إلى نظام 20 ميكرولتر هي 0.1-1 الوحدات (وحدة)، ويمكن تعديل كمية الإدخال استنادًا إلى النتائج الفعلية.
2. وفقًا لمتطلبات التجربة، يمكن تعديل التركيز النهائي لـ dUTP بين 0.2~0.6 مليمول، ويمكن إضافة 0.2 مليمول dTTP بشكل انتقائي.
3. وقت التفاعل عند 25~37 درجة مئوية يمكن تعديلها في غضون 5 إلى 10 دقائق وفقًا للمتطلبات التجريبية.
ملحوظات
1. عملية
1) يرجى العمل باستخدام معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة،من اجل سلامتك.
2) قم بإذابة المكونات في درجة حرارة الغرفة. امزجها جيدًا عن طريق قلبها لأعلى ولأسفل عدة مرات، ثم قم بتدويرها لأسفل لفترة وجيزة وضعها على الثلج للاستخدام.
3) يُنصح بإجراء كل خطوة من خطوات التفاعل في جهاز تدوير حراري مزود بغطاء ساخن. يجب تسخين جهاز التدوير الحراري مسبقًا إلى درجة الحرارة المحددة قبل الاستخدام.
4) من الضروري توفير إمدادات خالية من تلوث RNase وتنظيف المنطقة التجريبية بانتظام. RNAZap من ThermoFisherالعلامة التجارية تم التوصية باستخدام رذاذ إزالة الأحماض النووية عالي الكفاءة لإزالة تلوث RNase.
5) من المحتمل جدًا أن تتسبب العمليات غير السليمة في تلوث الهباء الجوي، مما يؤثر على دقة النتيجة. يوصى بالعزل المادي الإلزامي لمناطق خلط تفاعل البوليميراز المتسلسل ومناطق تحليل تنقية منتج البوليميراز المتسلسل. مجهزة بمعدات مثل الماصات المتخصصة لبناء المكتبة.
6) هذا الكاشف مخصص للاستخدام مرة واحدة فقط، ويُمنع منعًا باتًا استخدامه عدة مرات.
7) هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
2. ربط المحول
1) تتوفر مجموعات المحولات الطويلة (المحولات الشريطية) ومجموعات المحولات القصيرة من Illumina أو MGI للعملاء للاختيار وفقًا لمتطلباتهم التجريبية.
2) يوصى باختيار محولات تجارية عالية الجودة. إذا تم اختيار محولات ذاتية الصنع، فيرجى تكليف شركة ذات خبرة في تصنيع برايمر NGS والإشارة إلى الحاجة إلى التحكم الصارم في التلوث. بالإضافة إلى ذلك، يوصى بإعداد محلول التلدين DNA في مقعد نظيف وتشغيل نوع واحد فقط من المحولات في كل مرة لمنع التلوث المتبادل.
3) يرجى إذابة المحولات على الجليد أو عند 4 درجات مئوية؛ عند التشغيل في درجة حرارة الغرفة، يجب ألا تتجاوز درجة حرارة المختبر 25 درجة مئوية لمنع المحولات من التحلل.
4) يؤثر تركيز المحول بشكل مباشر على كفاءة الربط وإنتاج المكتبة. يتم تثبيت حجم المحول المضاف إلى المجموعة عند 5 ميكرولتر. يوصى بتخفيف المحولات بمحلول 0.1×TE ويمكن تخزين المحولات المخففة عند 4 درجات مئوية لمدة 48 ساعة. الجدول 1 يسرد كمية المحول الموصى بها لكميات مختلفة من RNA المدخلة.
الجدول 1-1 كمية محول Illumina الموصى بها لمدخلات RNA المختلفة
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | تركيز مخزون محول Illumina® |
| 10 نانوغرام | 1 ميكرومتر |
| 100 نانوغرام | 1.5 ميكرومتر |
| 500 نانوغرام | 3 ميكرومتر |
| ≥1 ميكروجرام | 5 ميكرومتر |
الجدول 1-2 كمية محول MGI الموصى بها لـ RNA المدخلة المختلفة
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | تركيز مخزون محول MGI® |
| 10~99 نانوغرام | 1 ميكرومتر |
| 100~499 نانوغرام | 2 ميكرومتر |
| 500~4000 نانوغرام | 5 ميكرومتر |
* يمكن تعديل استخدام المحول وفقًا لأنواع مختلفة من عينات الحمض النووي الريبي الكلية وكمية الإدخال
3.تضخيم المكتبة
1) على أساس بوليميراز الحمض النووي من الجيل الأول، فإن بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة في المجموعة قد حسن بشكل كبير من توحيد التضخيم ولا يظهر أي تحيز في التضخيم.
2) يجب التحكم بشكل صارم في أرقام دورة التضخيم. قد يؤدي التضخيم غير الكافي إلى انخفاض إنتاج المكتبة؛ وقد يؤدي التضخيم المفرط إلى زيادة التحيز والأخطاء والقراءة المكررة والمنتجات الكيميرية وتراكم الطفرات التوسعية. يوضح الجدول 2 أرقام الدورة الموصى بها لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.
3) يمكن لعدد الدورات الموصى به في الجدول 2 تلبية الغالبية العظمى من متطلبات إعداد المكتبة. إذا كانت العينة الخاصة بك ذات جودة رديئة (مثل عينات FFPE ذات التدهور الشديد)، فيمكن زيادة عدد الدورات بشكل مناسب، وفقًا للموقف الفعلي. انتبه إلى أن mRNA يختلف من أنواع وأنسجة مختلفة، فيجب تعديل عدد دورات التضخيم.
الجدول 2 إجمالي حجم الحمض النووي الريبي المدخل ودورات التضخيم الموصى بها الجدول *
| إجمالي الحمض النووي الريبوزي المدخل | عدد الدورات |
| 10 نانوغرام | 16 |
| 100 نانوغرام | 14 |
| 500 نانوغرام | 12 |
| 1 ميكروجرام | 11 |
[ملاحظة]: *لا يرتبط إنتاج المكتبة بكمية الإدخال وعدد دورات التضخيم فحسب، بل يتأثر أيضًا بجودة العينات وظروف التجزئة وظروف الفرز. في عملية إنشاء المكتبة، اختر الظروف الأكثر ملاءمة وفقًا للموقف الفعلي.
4. تنظيف الحمض النووي واختيار الحجم بناءً على الخرز
1) هناك خطوات متعددة في عملية إنشاء المكتبة تتطلب استخدام حبيبات مغناطيسية لتنقية الحمض النووي. نوصي باستخدام حبيبات Hieff NGS™ DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601) أو حبيبات AMPure® XP المغناطيسية (Beckman Cat#A63880) لتنقية الحمض النووي واختيار الحجم.
2) يجب أن تكون الخرزة المغناطيسية متوازنة مع درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام، وإلا سيؤدي ذلك إلى انخفاض العائد وسيتأثر تأثير اختيار الحجم.
3) يجب خلط الخرز المغناطيسي جيدًا باستخدام الدوامة أو الماصة قبل الاستخدام.
4) لا تقم بشفط الخرز عند نقل السائل العلوي، فحتى الكميات الضئيلة من الخرز قد تؤثر على التفاعلات التالية.
5) يجب تحضير 80% من الإيثانول طازجًا، وإلا فسوف يؤثر ذلك على كفاءة الاسترداد.
6) يجب تجفيف الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل استخلاص المنتج. سيؤدي الجفاف غير الكافي بسهولة إلى تأثر التفاعلات اللاحقة ببقايا الإيثانول؛ سيؤدي الجفاف المفرط إلى تشقق الخرز المغناطيسي وتقليل عائد التنقية. عادةً، يكون التجفيف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق كافيًا للسماح للخرز بالجفاف تمامًا.
7) إذا لزم الأمر، يمكن تخزين عينات الحمض النووي المنقاة أو المختارة الحجم والمغسولة في محلول TE عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أسبوع أو عند -20 درجة مئوية لمدة شهر.
5.تحليل جودة المكتبة
بشكل عام، يمكن تقييم جودة المكتبة المبنية من خلال اكتشاف التركيز واكتشاف توزيع الطول.
6. مواد أخرى
1) مجموعة إثراء mRNA: مجموعة Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2 (Yeasen Cat # 12629).
2) مجموعة إزالة rRNA: مجموعة Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS / ETS) (Yeasen Cat # 12257) أو مجموعة إزالة rRNA أخرى.
3) تنقية الحمض النووي الريبي للخرز المغناطيسي: منظف الحمض النووي الريبي Hieff NGS® (Yeasen Cat # 12602) أو منتجات أخرى معادلة.
4) خرزات مغناطيسية منقحة من الحمض النووي: خرزات Hieff NGS® DNA Selection (Yeasen Cat # 12601) أو خرزات AMPure® XP (A63880) أو منتجات أخرى مكافئة.
5) مراقبة جودة الحمض النووي الريبي: Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano / Pico Chip أو منتجات أخرى معادلة.
6) المحولات: محول كامل لاستخدام Illumina® (Cat # 13519-13520 أو ما يعادله) أو محول كامل لاستخدام MGI® (Cat # 13360-13362 أو ما يعادله).
7. فحص جودة المكتبة
شريحة Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 / شريحة عالية الحساسية أو منتجات أخرى مكافئة؛ كواشف تحديد الكمية بالمكتبة.
8. مواد أخرى
الإيثانول اللامائي، الماء النقي للغاية المعقم، رأس المسدس منخفض الامتصاص، أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل، الإطار المغناطيسي، جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل، إلخ.
مخطط التدفق
الشكل 1: عملية بناء مكتبة الحمض النووي الريبي
إعداد مكتبة RNA لعينات FFPE ذات الجودة المختلفة
بالنسبة لـ FFPE RNA المتدهور بشدة (DV 200 <50%) والعينات ذات المدخلات المنخفضة، نوصي ببروتوكول التنقية المزدوجة بعد ربط المحول لتقليل فقدان المكتبة.
أنماط الذروة لعينات FFPE ذات الجودة المختلفة
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.