وصف المنتج

مجموعة عزل mRNA من Hieff NGS™ عبارة عن مجموعة خرز مغناطيسية خاصة بتنقية mRNA. خرزات التقاط mRNA عبارة عن كرات مجهرية مغناطيسية بحجم الميكرومتر مقترنة بذيول Oligo dT (poly A)، والتي يمكن استخدامها لعزل mRNA من 10 نانوجرام إلى 4 ميكروجرام من RNA الكامل عن طريق الارتباط بـ mRNA باستخدام ذيول poly A.

تحديد

عناصر

تخزين

يجب تخزين المنتج في درجة حرارة تتراوح بين 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة عام واحد وتجنب تجميده.

تعليمات

1. المواد المطلوبة غير متضمنة

رف مغناطيسي، أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل الخالية من النوكلياز

2. عملية

1) تحقيق التوازن بين حبات التقاط mRNA في درجة حرارة الغرفة (~ 30 دقيقة).

2) قم بتخفيف 10 نانوجرام - 4 ميكروجرام من إجمالي الحمض النووي الريبوزي إلى 50 ميكرولترًا باستخدام الماء الخالي من النوكلياز في أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل الخالي من النوكلياز، ثم ضعه على الثلج.

3) امزج الخرز المغناطيسي عن طريق قلبه رأسًا على عقب أو عن طريق عمل دوامة. أضف 50 ميكرولترًا من الخرز المغناطيسي إلى 50 ميكرولترًا من عينة الحمض النووي الريبي الكلية واسحبها 6 مرات لخلطها جيدًا. قم بتدويرها لأسفل لفترة وجيزة حتى تصل إلى قاع الأنبوب.

4) احتضن خليط الخرز المغناطيسي وRNA في جهاز الدورة الحرارية وشغل البرنامج التالي: 65 درجة مئوية، 5 دقائق؛ 25 درجة مئوية، 5 دقائق؛ 25 درجة مئوية، تثبيت.

5) ضع الأنبوب على مغناطيسي رف لمدة 5 دقائق لفصل mRNA عن RNA الكلي. قم بإزالة السائل العلوي بعناية.

6) قم بإزالة الأنبوب من المغناطيس رف وأعد تعليق الخرز المغناطيسي باستخدام 200 ميكرولتر من محلول غسيل الخرز. استخدم الماصة لسحب الحجم بالكامل لأعلى ولأسفل 6 مرات لخلطه جيدًا. ضع الأنبوب على حامل مغناطيسي. رف لمدة 5 دقائق، ثم قم بإزالة السائل العلوي بعناية.

7) كرر الخطوة 6.

8) قم بإزالة الأنبوب من المغناطيس رفأضف 50 ميكرولترًا من Tris Buffer لإعادة تعليق الخرز المغناطيسي واستخدم الماصة 6 مرات لخلطه جيدًا.

9) ضع العينة في جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل البرنامج التالي لاستخراج mRNA: 80 درجة مئوية، 2 دقيقة؛ 25 درجة مئوية، توقف.

10) قم بإزالة العينة من جهاز التدوير الحراري. أضف 50 ميكرولترًا من محلول Beads Binding Buffer وقم بتمريرها باستخدام الماصة بشكل متكرر 6 مرات لخلطها جيدًا.

11) احتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق للسماح لـ mRNA بالارتباط بالخرز المغناطيسي.

12) ضع الأنبوب على المغناطيس اتركيها على الرف لمدة 5 دقائق، ثم قومي بإزالة السائل العلوي بعناية.

[ملاحظة]: هناك حاجة إلى ماصة سعة 10 ميكرولتر لشفط السائل المتبقي.

13) قم بإزالة الأنبوب من المغناطيس رفأعد تعليق الخرز المغناطيسي باستخدام 200 ميكرولتر من محلول غسيل الخرز، ثم استخدم الماصة بشكل متكرر 6 مرات لخلطه جيدًا. ضع الأنبوب على الخرز المغناطيسي. رف في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. قم بإزالة كل السائل العلوي والتخلص منه.

14) الايلولات النهائية لـ mRNA

المخطط أ: لتفاعل النسخ الاحتياطي

إزالة الأنبوب من المغناطيسية رف. أضف 12 ميكرولترًا من الماء الخالي من النوكلياز ثم استخدم الماصة بشكل متكرر 6 مرات لخلط الخليط جيدًا. ضع الأنبوب في جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل البرنامج التالي: 80 درجة مئوية، لمدة دقيقتين. ثم ضع الأنبوب على المغناطيس رف على الفور، اتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. بعد أن يصبح المحلول صافيًا، قم بسحب 10 ميكرولتر من العصارة الخلوية بعناية إلى أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل خالٍ من النوكلياز.

المخطط ب: للحمض النووي الريبوزي إعداد المكتبة

أضف الحجم المناسب من Frag/Primer Buffer وفقًا لتعليمات المجموعة ذات الصلة لبناء المكتبة.

ملحوظة

1. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء المعاطف المخبرية والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العمل.
2. للاستخدام البحثي فقط.
3. تأكد من تسخين الخليط إلى درجة حرارة الغرفة وخلطه جيدًا قبل استخدام الخرز المغناطيسي، وإلا فقد تتأثر كفاءة استعادة العينات.
4. يجب أن تكون العملية خالية تمامًا من التلوث بـ RNase والأحماض النووية.
5. عند استخدام هذا المنتج مع الكواشف الأخرى، يرجى اتباع التعليمات التجريبية المحددة للتشغيل.
6. للحصول على نتائج تنقية جيدة، يجب أن يكون لديك سلامة جيدة لإجمالي الحمض النووي الريبي وضمان قيمة RIN >7.0.