وصف
مسبار استنفاد mRNA للغلوبين (البشري) تم تصميمه لإزالة الحمض النووي الريبوزي المرسال للجلوبين البشري. يمكنه إزالة الحمض النووي الريبوزي المرسال للجلوبين بفعالية من البالغين والرضع والأجنةنيك المصادر، بما في ذلك HBA1/2 وHBB وHBD وHBM وHBG1/2 وHBE1 وHBQ1 وHBZ. يستخدم هذا المنتج مع Hieff NGSالعلامة التجارية مجموعة MaxUp rRNA Depletion Kit (للبشر/الفأر/الجرذ) (Yeasen#12253) لإزالة rRNA وglobin mRNA بشكل فعال من إجمالي RNA. هذه المجموعة مناسبة لكل من عينات RNA السليمة والمتحللة. يمكن استخدام عينات RNA بعد إزالة rRNA وglobin mRNA لتحليل التسلسل عالي الإنتاجية لـ mRNA وRNA غير المشفر، مما يعزز بشكل كبير نسبة البيانات الصالحة في نتائج التسلسل، وتخليق cDNA أو التطبيقات اللاحقة الأخرى.
تطبيق المنتج
مناسبة لـ 100 نانوغرام ~ 1 ميكروغرام من إجمالي عينات الحمض النووي الريبي (RNA) البشرية, مصادر دم الفئران والجرذان، وللعينات الحمض النووي الريبي السليمة أو المتحللة جزئيًا.
مكونات المنتج
| اسم المنتج | مواصفة | |
| مسبار الغلوبين (البشري) | 12806ES24 | 24 ت |
| 12806ES96 | 96 ت |
الشحن والتخزين
يتم شحن جميع المكونات مع الثلج الجاف ويمكن تخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة عام واحد.
شكل
تم إزالة 500 نانوجرام و100 نانوجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي في الدم البشري من خلال إزالة الحمض النووي الريبي الريبوزي الريبوزي والغلوبين معًا على التوالي. بعد إنشاء المكتبة والتسلسل، تمت مقارنة محتوى الحمض النووي الريبي المرسال للغلوبين.
تحذيرات
1. يرجى استخدام المواد الاستهلاكية الخالية من تلوث RNase وتنظيف المنطقة التجريبية بانتظام. يوصى باستخدام RNAZap من ThermoFisherالعلامة التجارية رذاذ إزالة الأحماض النووية عالي الكفاءة لإزالة تلوث RNase.
2. يجب أن تكون عينة الحمض النووي الريبي خالية من تلوث الحمض النووي الجينومي. إذا بقي الحمض النووي الجيني في العينة، فيجب هضمه بواسطة DNase I وتنقيته قبل الاستخدام.
3. الحد الأقصى لحجم إدخال عينة الحمض النووي الريبي هو 10 ميكرولتر. إذا كان حجم العينة كبيرًا، فيمكن تركيزها أولاً.
4. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء المعاطف المخبرية والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العمل.
5. للاستخدام البحثي فقط!
تعليمات
1. تهجين المسبار إلى الحمض النووي الريبوزي
1.1 قم بتخفيف 10 نانوجرام - 1 ميكروجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام ماء خالٍ من النوكلياز إلى الحجم النهائي 10 ميكرولتر في أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل. احتفظ بالحمض النووي الريبي على الجليد.
1.2 تجمع التفاعل التالي لتهجين RNA/Probe على الجليد وفقاً للجدول رقم 1.
الجدول 1 تفاعل تهجين RNA/Probe
| عناصر | الحجم (ميكرولتر) |
| مخزن التهجين | 3 |
| مزيج التحقيق (ح/م/ر) | 1 |
| مسبار الغلوبين (البشري) | 1 |
| مجموع الحمض النووي الريبوزي | 10 (100 نانوجرام ~ 1 ميكروجرام) |
| المجموع | 15 |
1.3 قم بالخلط جيدًا عن طريق سحب السائل برفق لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل. قم بتدوير الأنبوب لأسفل لفترة وجيزة في جهاز الطرد المركزي الصغير لجمع السائل من جانب الأنبوب.
1.4 ضع الأنبوب في جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل البرنامج التالي في الجدول 2 مع ضبط الغطاء الساخن على 105 درجة مئوية.
الجدول 2 برنامج تفاعل تهجين الحمض النووي الريبي/المسبار
| درجة حرارة | مدة |
| غطاء ساخن 105 درجة مئوية | على |
| 95 درجة مئوية | 2 دقيقة |
| 95 درجة مئوية - 22 درجة مئوية | 0.1 درجة مئوية/ثانية |
| 22 درجة مئوية | 5 دقائق |
| 4 درجة مئوية | يمسك |
2. هضم RNase H
2.1 قم بتجميع تفاعل هضم RNase H التالي على الجليد وفقاً للجدول رقم 3.
الجدول 3 تفاعل هضم RNase H
| عناصر | الحجم (ميكرولتر) |
| مخزن RNase H | 3 |
| RNase H | 2 |
| الحمض النووي الريبوزي المهجن (الخطوة 1.4) | 15 |
| المجموع | 20 |
2.2 امزج جيدًا عن طريق سحب السائل برفق لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل. قم بتدوير الأنبوب لأسفل لفترة وجيزة في جهاز الطرد المركزي الصغير لجمع السائل من جانب الأنبوب.
2.3 ضع الأنبوب في جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل البرنامج التالي: غطاء 50 درجة مئوية؛ 37 درجة مئوية، 30 دقيقة؛ 4 درجة مئوية، عقد.
3. DNase أنا الهضم
3.1 قم بتجميع تفاعل هضم DNase I التالي على الجليد وفقًا للجدول 4.
الجدول 4 تفاعل هضم DNase 1
| عناصر | الحجم (ميكرولتر) |
| مخزن DNase I | 27.5 |
| DNase I | 2.5 |
| RNA المعالج بـ RNase H (الخطوة 2.3) | 20 |
| المجموع | 50 |
3.2 امزج جيدًا عن طريق سحب السائل برفق لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل. قم بتدوير الأنبوب لأسفل لفترة وجيزة في جهاز الطرد المركزي الصغير لجمع السائل من جانب الأنبوب.
3.3 ضع الأنبوب في جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل البرنامج التالي: غطاء قبالة؛ 37 درجة مئوية، 30 دقيقة؛ 4 درجة مئوية، عقد.
4. تنقية الحمض النووي الريبوزي
4.1 تحقيق التوازن في Hieff NGSالعلامة التجاريةمنظف الحمض النووي الريبوزي (القطعة رقم 12602) إلى درجة حرارة الغرفة ثم أعد تعليق الخرز جيدًا عن طريق الاهتزاز قبل الاستخدام.
4.2 إضافة 110 ميكرولتر (2.2×) أضف الخرز إلى محلول الحمض النووي الريبي من الخطوة 3.3 واخلط جيدًا عن طريق التقطير لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل.
4.3 احضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لربط الحمض النووي الريبي بالخرز.
4.4 ضع الأنبوب على حامل مغناطيسي لفصل الخرز عن السائل العلوي. عندما يصبح المحلول صافيًا (بعد حوالي 3 دقائق)، تخلص من السائل العلوي. احرص على عدم لمس الخرز بأطراف الماصة.
4.5 أبقِ الأنبوب على الحامل المغناطيسي. أضف 200 ميكرولتر من الإيثانول الطازج بنسبة 80% إلى الأنبوب. احتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 ثانية ثم تخلص من السائل العلوي. احرص على عدم لمس الخرز بأطراف الماصة.
4.6 كرر الخطوة 4.5 مرة واحدة لإجمالي غسلتين.
4.7 قم بإزالة الإيثانول المتبقي بـ 10 ميكرولتر - نصائح الماصة. قم بإبقاء الأنبوب على الحامل المغناطيسي ثم قم بتجفيف الخرز في الهواء لمدة تصل إلى 5 دقائق مع فتح الغطاء.
4.8 قم بإزالة الأنبوب من الحامل المغناطيسي. قم بتصفية الحمض النووي الريبوزي من الخرز عن طريق إضافة 11 ميكرولترًا من الماء الخالي من النوكلياز. قم بالخلط جيدًا عن طريق السحب لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل وقم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة.
4.9 احضنه لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ضع الأنبوب على الحامل المغناطيسي حتى يصبح المحلول صافيًا (حوالي 3 دقائق).
4.10 انقل 10 ميكرولترًا من السائل العلوي إلى أنبوب خالٍ من النوكلياز.
ملحوظة: إذا كنت بحاجة إلى التوقف عند هذه النقطة، يمكن تخزين العينات عند درجة حرارة -80 درجة مئوية.
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.