وصف
نظام Hieff NGS™ مجموعة تحضير مكتبة OnePot Pro DNA V4 هي مجموعة تحضير مكتبة إنزيمية من الجيل التالي مصممة للاستخدام مع Illumina ومنصات التسلسل عالية الإنتاجية MGI. وبالمقارنة بطرق تحضير المكتبة التقليدية، تستخدم هذه المجموعة إنزيمات تجزئة عالية الجودة، مما يلغي الحاجة إلى عمليات الموجات فوق الصوتية المرهقة. يتم دمج وحدات التجزئة والإصلاح النهائي في خطوة واحدة، مما يقلل بشكل كبير من الوقت والتكلفة اللازمة لتحضير المكتبة. هذه المجموعة مناسبة لمجموعة واسعة من أنواع العينات، بما في ذلك الجينومات النباتية والحيوانية، والجينومات الميكروبية، والمزيد، مع نطاق إدخال العينة من 1 نانوغرام إلى 1 ميكروغرام. تضمن التجزئة الأنزيمية أحجام شظايا موحدة عبر الأنواع المختلفة، مع الحد الأدنى من التباين بين الأنواع. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إقران هذه المجموعة مع Illumina أو إم جي آي المحولات والتمهيدات للتسلسل على منصات Illumina أو MGI عالية الإنتاجية.
تحديد
| رقم القط. | 12972ES08 / 12972ES24 / 12972ES96 |
| مقاس | 8 ت / 24 ت / 96 ت |
عناصر
| المكونات رقم | اسم | 12972ES08 | 12972ES24 | 12972ES96 |
| 12972-أ | 80 ميكرولتر | 240 ميكرولتر | 960 ميكرولتر | |
| 12972-ب | سمياريز™ إنزيم 4.0 | 80 ميكرولتر | 240 ميكرولتر | 960 ميكرولتر |
| 12972-ج | مُعزز الربط 4.0 | 240 ميكرولتر | 720 ميكرولتر | 3×960 ميكرولتر |
| 12972-د | سريع ربطة الحمض النووي 4.0 | 80 ميكرولتر | 240 ميكرولتر | 2×480 ميكرولتر |
| 12972-هـ | مزيج تضخيم HF 2×Ultima | 200 ميكرولتر | 600 ميكرولتر | 3×800 ميكرولتر |
تخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية لمدة 1 سنة.
ملحوظات
1. حول العملية
1. يرجى العمل مرتديًا معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة،من أجل سلامتك.
2. قم بتذويب المكونات في درجة حرارة الغرفة. بعد الذوبانقم بخلط المكونات جيدًا عن طريق تحريكها في دوامة، ثم قم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة ثم ضعه على الثلج لاستخدامه لاحقًا.
3. عند تحضير محلول التفاعل لكل خطوة، يوصى باستخدام ماصة لخلط المحلول جيدًا أو رجّه برفق. قد يؤدي الرج القوي إلى انخفاض إنتاج المكتبة.
4. يوصى بشدة باستخدام أطراف الماصة المفلترة لتجنب التلوث المتبادل. تأكد من تغيير أطراف الماصة عند معالجة عينات مختلفة.
5. من المحتمل جدًا أن تتسبب العمليات غير السليمة في تلوث الهباء الجوي، مما يؤثر على دقة النتيجة. يوصى بالعزل المادي الإلزامي لمناطق خلط تفاعل البوليميراز المتسلسل ومناطق تحليل تنقية منتج البوليميراز المتسلسل. مجهزة بمعدات مثل الماصات المتخصصة لبناء المكتبة.قم بإجراء التنظيف الروتيني لكل منطقة عن طريق مسح الأسطح بمحلول هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 0.5% أو مبيض بنسبة 10%
6. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
2. تجزئة الحمض النووي1. الطقم متوافق مع 100 صفحة - 1000 نانوجرام من الحمض النووي المدخل. يوصى بشدة باستخدام الحمض النووي المدخل عالي الجودة مع A260/A280 = 1.8-2.0.
2. قد تتأثر التجارب التالية إذا تم إدخال تركيزات عالية من الأملاح مثل عامل استخلاب المعدن مع الحمض النووي المدخل. نوصي بغسل عينة الحمض النووي في دي دي اتش2ا للتجزئة.
3. يرجى الرجوع إلى الجدول 6 لوقت تجزئة عينات الحمض النووي القياسية.تتمتع المجموعة بانحياز تجزئة منخفض وتوفر تغطية GC موحدة لعينات الحمض النووي مع مجموعة واسعة من تركيبات GC. يرجى ضبط وقت التجزئة بناءً على متطلباتك التجريبية.
4. للحصول على تجزئة دقيقة، يرجى تحضير التفاعل على الجليد.
3. ربط المحول
1. تتوفر مجموعات المحولات الطويلة (المحولات الشريطية) ومجموعات المحولات القصيرة من Illumina أو MGI للعملاء للاختيار وفقًا لمتطلباتهم التجريبية.
2. يوصى باختيار محولات تجارية عالية الجودة. إذا تم اختيار محولات ذاتية الصنع، فيرجى تكليف شركة ذات خبرة في تصنيع برايمر NGS والإشارة إلى الحاجة إلى التحكم الصارم في التلوث. بالإضافة إلى ذلك، يوصى بإعداد محلول التلدين DNA في مقعد نظيف وتشغيل نوع واحد فقط من المحولات في كل مرة لمنع التلوث المتبادل.
3. يرجى إذابة المحولات على الجليد أو عند 4 درجات مئوية؛ عند التشغيل في درجة حرارة الغرفة، يجب ألا تتجاوز درجة حرارة المختبر 25 درجة مئوية لمنع المحولات من التحلل.
4. ستؤثر جودة وتركيز المحولات بشكل مباشر على كفاءة الربط وعائد المكتبة. يؤدي التركيز العالي جدًا للمحولات إلى تكوين ثنائي المحولات بينما يؤدي تركيز المحول القليل جدًا إلى تقليل معدل الربط وعائد المكتبة. التخفيفات المقابلة باستخدام TE Buffer وفقًا لكمية DNA المدخلة عند استخدام المحول. الجدول 2 -3 تسرد طرق تخفيف المحول الموصى بها لكميات مختلفة من الحمض النووي المدخل باستخدام هذه المجموعة.
الجدول 1 كمية محول Illumina الموصى بها لمدخلات DNA المختلفة
| إدخال الحمض النووي | تخفيف المحول (حجم المحول : الحجم الإجمالي) | تركيز |
| 1 نج | 30-طي (1 : 30) | 0.5 ميكرومتر |
| 10 نج | 7.5-طي (1 : 7.5) | 2 ميكرومتر |
| 100 نانوغرام | 3-طي (1 : 3) | 5 ميكرومتر |
| 1000 نانوغرام | 1.5-طي (1 : 1.5) | 10 ميكرومتر |
الجدول 2 كمية محول MGI الموصى بها لمدخلات DNA المختلفة
| إدخال الحمض النووي | تخفيف المحول (حجم المحول : الحجم الإجمالي) | تركيز |
| 1 نج | 20-طي (1 : 20) | 0.5 ميكرومتر |
| 10 نج | 5-طي (1 : 5) | 2 ميكرومتر |
| 100 نانوغرام | 2-طي (1 : 2) | 5 ميكرومتر |
| 1000 نانوغرام | غير مخفف | 10 ميكرومتر |
4. تنظيف الحمض النووي واختيار الحجم بناءً على الخرز
1. يمكن إجراء خطوة اختيار حجم جزء الحمض النووي إما بعد ربط المحول أو بعد تضخيم المكتبة.
2. يوصى بإجراء اختيار الحجم مباشرة بعد ربط المحول إذا كانت كمية الحمض النووي المدخلة أكبر من 50 نانوجرام؛ بخلاف ذلك، يرجى إجراء اختيار الحجم بعد التضخيم.
3. يحتوي مُعزز الربط على تركيز عالٍ من PEG، والذي قد يسبب تأثيرًا كبيرًا على دقة اختيار الحجم. وبالتالي، إذا كان من المقرر إجراء اختيار الحجم مباشرة بعد ربط المحول، فمن المستحسن بشدة إضافة خطوة تنظيف الخرز قبل اختيار الحجم. يمكن إجراء خطوة اختيار الحجم مباشرة إذا تم إجراؤها قبل الإصلاح النهائي/dA-tailing أو بعد تضخيم المكتبة.
4. يجب موازنة الخرز المغناطيسي عند درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام، وإلا فإن العائد سوف ينخفض وسوف يتأثر تأثير اختيار الحجم.
5. يجب خلط الخرز المغناطيسي جيدًا باستخدام الدوامة أو الماصة قبل الاستخدام.
6. لا تقم بشفط الخرز عند نقل السائل العلوي، فحتى الكميات الضئيلة من الخرز قد تؤثر على التفاعلات التالية.
7. يجب تحضير 80% من الإيثانول طازجًا، وإلا فسوف يؤثر ذلك على كفاءة الاسترداد.
8. لاختيار الحجم بدقة، يوصى بالبدء بحجم أكبر من 100 ميكرولتر. إذا كان أقل، يوصى بزيادة الحجم إلى 100 ميكرولتر باستخدام ماء فائق النقاء.
9. يجب تجفيف الخرز المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة قبل استخلاص المنتج. سيؤدي الجفاف غير الكافي بسهولة إلى تأثر التفاعلات اللاحقة ببقايا الإيثانول؛ سيؤدي الجفاف المفرط إلى تشقق الخرز المغناطيسي وتقليل عائد التنقية. عادةً، يكون التجفيف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق كافيًا للسماح للخرز بالجفاف تمامًا.
10. إذا لزم الأمر، يتم غسل عينات الحمض النووي المنقاة أو المختارة حسب الحجم في 0.1× يمكن تخزين محلول TE عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أسبوع أو عند -20 درجة مئوية لمدة شهر.
5. تضخيم المكتبة
1. يعتمد إجراء تضخيم المكتبة من عدمه على كمية الحمض النووي المدخل وأنواع المحولات وتطبيقات بيانات التسلسل وما إلى ذلك. تكون خطوة التضخيم مطلوبة في حالة استخدام محولات جزئية. عند استخدام محولات كاملة الطول، إذا كان الحمض النووي المدخل <200 نانوجرام، فمن المستحسن إجراء التضخيم؛ وإلا فلن يكون التضخيم ضروريًا.
2. يجب التحكم بشكل صارم في أرقام دورة التضخيم. قد يؤدي التضخيم غير الكافي إلى انخفاض إنتاج المكتبة؛ وقد يؤدي التضخيم المفرط إلى زيادة التحيز والأخطاء والقراءة المكررة والمنتجات الكيميرية. الجدول 3 تسرد أرقام الدورة الموصى بها والتي تستهدف إنتاج المكتبة بمقدار 1 ميكروجرام.
الجدول 3 العدد الموصى به من الدورات لتوليد 1000 نانوجرام من غلة المكتبة
| إدخال الحمض النووي | عدد الدورات المطلوبة لتوليد 1 ميكروجرام من إنتاج المكتبة |
| 1000 نانوغرام | 2 - 4 |
| 500 نانوغرام | 2 - 4 |
| 250 نانوغرام | 4 - 6 |
| 100 نانوغرام | 5 - 7 |
| 50 نانوغرام | 7 - 9 |
| 1 نانوغرام | 12 - 14 |
ملحوظة:
1. الجدول 3 يظهر عدد معلمات الحلقة باستخدام اختبارات الحمض النووي المدخلة عالية الجودة بحوالي 200 زوج أساسي. تختلف جودة الحمض النووي FFPE بشكل كبير، وعندما تكون جودة الحمض النووي رديئة أو يكون طول المكتبة طويلاً، يجب زيادة عدد الدورات بشكل مناسب للحصول على مكتبات كافية.
2.أنايجب اختيار حجم f أثناء عملية بناء المكتبة، ويُنصح باستخدام رقم دورة أعلى لتضخيم المكتبة؛ وإلا، يُنصح باستخدام رقم دورة أقل.
3.أناإذا تم استخدام محولات غير كاملة، فيجب تضخيم دورتين على الأقل لتشكيل محول كامل.
6. تحليل جودة المكتبة
1. يتم تحليل جودة المكتبات المُنشأة بشكل عام عن طريق قياس التركيزات وتوزيعات الحجم.
2. يمكن قياس تركيزات المكتبات باستخدام طرق تعتمد على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen أو qPCR.
3. لا يُنصح باستخدام طرق القياس المعتمدة على الامتصاص مثل NanoDrop.
4. يوصى باستخدام طريقة qPCR لتحديد كمية المكتبة: لا تستطيع الطرق القائمة على الفلورسنت مثل Qubit وPicoGreen التمييز بين هياكل dsDNA غير المكتملة (الإدخالات بدون محول أو مع ربط أحد الطرفين فقط بالمحول) من المكتبات الكاملة. ستعمل طريقة qPCR فقط على تضخيم وقياس المكتبات الكاملة مع ربط كلا الطرفين بالمحولات (المكتبات القابلة للتسلسل)، وبالتالي توفير قياس أكثر دقة للتحميل.
5. يمكن تحليل توزيع حجم المكتبات باستخدام جهاز Agilent Bioanalyzer أو أجهزة أخرى تعتمد على مبادئ الرحلان الكهربائي الشعري أو الميكروفلويديك.
7. مواد أخرى
1. خرزات مغناطيسية لتنقية الحمض النووي: Hieff NGSالعلامة التجارية خرز اختيار الحمض النووي (Yeasen Cat#12601) أو AMPure® خرز XP (A63880) أو منتجات أخرى معادلة.
2. المحولات: محول كامل لـ Illumina: قطة ياسين رقم 13519-13520; 384 بادئات CDI مزدوجة: ياسين القطة رقم 12412~القط رقم 12413؛ 384 تمهيدات فريدة ذات مؤشر مزدوج (UDI): ياسين القطة رقم 12327~قطة رقم 13330؛ محولات UMI UDI: ياسين القطة رقم 13370~القط رقم 13371; محول كامل لـ MGI: Yeasen Cat#13360-13362. مزيج تمهيدي للحمض النووي:قطة#12190 أو قطة#12191.
3. تحليل جودة المكتبة: شريحة Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000/ شريحة عالية الحساسية أو منتجات أخرى مكافئة؛ الكواشف الكمية للمكتبة.
4. مواد أخرى: الإيثانول المطلق، الماء النقي للغاية المعقم، أطراف الماصة ذات الاحتفاظ المنخفض، أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل، الحوامل المغناطيسية، الدورة الحرارية، إلخ.
8. سير العمل
الشكل 1.سير العمل وان بوت محترف الحمض النووي مجموعة أدوات التحضير للمكتبة
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.