وصف
هيفير™ مجموعة اختبار RT-qPCR من خطوة واحدة متعددة المراحل (يو دي جي زائد) عبارة عن مجموعة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي المتعدد تعتمد على الحمض النووي الريبي كقالب. في عملية التجربة، تم إجراء النسخ العكسي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في نفس الأنبوب، مما أدى إلى تبسيط العملية التجريبية وتقليل خطر التلوث.
في هذه المجموعة، تم تصنيع أول سلسلة من cDNA بكفاءة بواسطة Hifair المقاوم للحرارةالعلامة التجارية النسخ العكسي الخامس والتضخيم الكمي بواسطة UNICONالعلامة التجارية بوليميراز الحمض النووي من HotStart Taq. تحتوي المجموعة بشكل أساسي على عازل MP محسن ومزيج من الإنزيمات وما إلى ذلك. يحتوي المحلول العازل بالفعل على المغنيسيوم2+ بالإضافة إلى ذلك، تمت إضافة العوامل التي يمكنها تثبيط تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل غير المحدد بشكل فعال وتحسين كفاءة تضخيم تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعددة، مما يضمن كفاءة التضخيم ويؤدي إلى تفاعل تضخيم متعدد. تمت إضافة نظام dUTP/UDG لمنع خطر تلوث الهباء الجوي بشكل فعال.
سمات
حساسية عالية:يعمل نظام التخزين المؤقت المحسن بعناية على تحسين حساسية الكشف عن القوالب ذات التركيز المنخفض حتى 250 نسخة/مل；
ثبات فائق: لقد اجتاز المنتج اختبار الثبات في الوقت الفعلي لمدة 18 شهرًا.
نظام مكافحة التلوث dUP/UDG:تم تقديم نظام dUTP/UDG المضاد للتلوث لتقليل تلوث الهباء الجوي للمنتجات بكفاءة، وتقليل النتائج الإيجابية الكاذبة، وضمان نتائج حقيقية；
دعم البرنامج السريع: متوافق مع البرنامج السريع، 40 دقيقة يمكن أن تنتج نتائج؛
عناصر
| المكونات رقم | اسم | 13650اللغة الاسبانية50 (50 ت) | 13650ES60 (100 ت) | 13650ES80 (1000 ت) | 13650ES92 (10000 ت) |
| 13650-أ | 2×هايفيرالعلامة التجارية مخزن مؤقت V MP | 750 ميكرولتر | 1.5 مل | 15 مل | 150 مل |
| 13650-ب | هيفيرالعلامة التجارية مزيج إنزيم V | 60 ميكرولتر | 120 ميكرولتر | 1.2 مل | 12 مل |
ملحوظة: 1) 2×هايفيرالعلامة التجارية مخزن مؤقت V MP هو اختصار لـ هيفيرالعلامة التجارية مخزن اختبار RT-qPCR أحادي الخطوة متعدد المراحل, والتي تشمل dNTPs و dUTP و Mg2+، المثبتات، والمعززات، وأكثر من ذلك.
2) هيفيرالعلامة التجارية مزيج إنزيم V يحتوي بشكل رئيسي على هيفير مقاوم للحرارةالعلامة التجارية النسخ العكسي V، UNICONالعلامة التجارية بوليميرات الحمض النووي HotStart Taq و UDGase.
تخزين
تهو منتج يجب يكون مخزنة في -25 درجة مئوية ~ -15 درجة مئوية ل 18 شهرًا.
تعليمات
تكوين التفاعل
| عناصر | مقدار (ميكرولتر) | التركيز النهائي |
| 2×هايفيرالعلامة التجارية مخزن مؤقت V MP | 15 | 1× |
| هيفيرالعلامة التجارية مزيج إنزيم V | 1.2 | - |
| التمهيدي / مسبار مزيج (2.5 ميكرومتر) | 3 | 0.25 ميكرومتر |
| قالب RNA | 1-10 | - |
| بروتين ريبونوكلياز حر2ا | الى 30 | - |
ملحوظة:تأكد من مزج المكونات جيدًا قبل الاستخدام، وتجنب الفقاعات المفرطة الناتجة عن الاهتزاز العنيف.
أ) التمهيدي/مسبار تركيز: التمهيدي مزيج يتضمن برايمر متعدد الطبقات، اعتمادًا على الموقف، قد يكون تركيز البادئ الأمثل بين 0.1 و1.0 ميكرومتر.مزيج التحقيق بما في ذلك الفرق في وسم التحقيق المتعدد للمجموعة الفلورية، اعتمادًا على الوضع قد يكون تركيز التحقيق الأمثل بين 0.05 و 0.5 ميكرومتر.
ج) تخفيف القالب: إن تقنية qPCR حساسة للغاية ويوصى بتخفيف القالب. قيمة Ct الضابطة مناسبة بين 20 و35.
د) إعداد النظام: قم بإزالة الرأس باستخدام عنصر الفلتر. تجنب التلوث المتبادل وتلوث الهباء الجوي.
بروتوكول ركوب الدراجات الأمثل
|
| مرحلة رد الفعل | درجة حرارة | وقت | دورة |
| 1 | النسخ العكسي | 50 درجة مئويةأ | 10 دقيقة | 1 |
| 2 | التحلل الأولي | 95 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| 3 | تفاعل التضخيم | 95 درجة مئوية |
| 45 دورة |
| 60 درجة مئويةب | 30 ثانيةج |
ملحوظة:أ) رالنسخ العكسي: يمكن اختيار درجة الحرارة 42درجة مئوية أو 50درجة مئوية لمدة 10-15 دقيقة.
ب) تفاعل التضخيم: يتم ضبط درجة الحرارة وفقًا لقيمة Tm للبادئات المصممة.
ج) اكتساب إشارة الفلورسنت:يرجى ضبط الإجراء التجريبي وفقًا لمتطلبات دليل الجهاز.
3. طلب معدات
المعدات مع روكس:ABI 5700، 7000، 7300، 7700، 7900HT سريع، StepOne™، StepOne Plus™
المعدات ذات الروكس المنخفض:ABI 7500، 7500 Fast، ViiA™7، QuantStudio™ 3 و5، QuantStudio™ 6،7،12k Flex
ستراتاجين MX3000P™، MX3005P™، MX4000P™
المعدات بدون روكس:
بيو-راد CFX96™، CFX384™، iCycler iQ™، iQ™5، MyiQ™، MiniOpticon™، Opticon®، Opticon® 2، Chromo4™
إيبندورف Mastercycler® ep realplex، realplex 2 s؛ كياجن كوربيت روتور-جين® كيو، روتور-جين® 3000، روتور-جين® 6000
روش للعلوم التطبيقية لايت سايكلير® 480، لايت سايكلير® 2.0، لايت سايكلير® 96
ثيرمو جهاز PikoReal Cycler العلمي؛ قيفاوي سمارت سايكلير®؛ إلومينا إيكو كيو بي إس
ملحوظات
يرجى ارتداء معدات الحماية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!!
يرجى استخدام المواد الاستهلاكية RNasefree ل التجربة.
اختبار الحساسية
تم اختبار 13650 المخزنة عند -20 درجة مئوية لمدة 18 شهرًا (المجموعة التجريبية) وتلك الموجودة ضمن مدة الصلاحية (مجموعة التحكم) في وقت واحد للتخفيف التدريجي (500 نسخة / مل ، 250 نسخة / مل) من الفيروس الزائف SARS-CoV-2 ، مستهدفًا جين ORF وجين N. تم اختبار ثماني آبار مكررة لكل تركيز ، بمعدل اكتشاف 100٪. علاوة على ذلك ، لم تكن هناك اختلافات كبيرة في أشكال ذروة منحنى التضخيم وقيم Ct.
| كثير | FAM (عدد الإيجابيات) | VIC(عدد الإيجابيات) | ||
| 250 نسخة/مل | 500 نسخة/مل | 250 نسخة/مل | 500 نسخة/مل | |
| مجموعة تجريبية | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| مجموعة التحكم | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
اختبار الاستقرار في الوقت الحقيقي
تم تخزين 13650 في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة 18 شهرًا وتلك التي في فترة صلاحيتها. تم اختبار كلتا المجموعتين في وقت واحد لجين ORF وجين N لفيروس SARS-CoV-2 الزائف بتركيز 1000 نسخة / مل مع 20 بئرًا مكررة. كان معدل الكشف لكليهما 100٪، ولم تكن هناك اختلافات كبيرة في شكل منحنيات التضخيم أو قيم Ct.
الشكل 1. رالمحرر: 13650 في مدة صلاحيتها；أزرق:13650 مخزنة عند -20 درجة مئوية لمدة 18 شهرًا.
أداء مستقر بعد دورات التجميد والذوبان المتكررة
وبإخضاع الكاشف 13650 لدورات تجميد وإذابة مدتها 30 و50 مرة باستخدام الثلج الجاف، إلى جانب الكواشف المخزنة بشكل طبيعي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، واختبار جين ORF الخاص بفيروس SARS-CoV-2 الزائف في نفس الوقت، أشارت النتائج إلى أن أداء الكاشف 13650 لم يتأثر بعد 50 دورة تجميد وإذابة.
الشكل 2. الأحمر: 13650 مخزنة بشكل طبيعي عند -20 درجة مئوية؛ أرجواني:13650 إلى 30 دورة تجميد وذوبان；أخضر:13650 إلى 50 دورة تجميد وذوبان.
متوافق مع البروتوكولات القياسية والسريعة
باستخدام 13650ES، تم الكشف عن جين ORF وجين N لفيروس SARS-CoV-2 الكاذب تحت نفس نظام التفاعل مع البروتوكولات القياسية والسريعة. أظهرت النتائج أنه في ظل نظام 4-plex، لم يكن هناك فرق في أشكال ذروة منحنى التضخيم وقيم Ct بين البروتوكولين.
وثائق:
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.