وصف
Hifair™ Super Reverse Transcriptase هو الجيل التالي من النسخ العكسي، أيّ كان هـنمُصمم هندسيًا من M-MLV. يفتقر هذا الإنزيم إلى نشاط RNase H، ويُظهر استقرارًا حراريًا مُحسّنًا بشكل ملحوظ، حيث يتحمل درجات حرارة تفاعل تصل إلى 70 درجة مئوية. وهو مناسب جدًا للنسخ العكسي الفعال لقوالب الحمض النووي الريبي (RNA) ذات البنى الثانوية المعقدة.
التطبيقات
هذا المنتج مناسب لتجارب تفاعلات النسخ العكسي (RT-PCR)، وتفاعل النسخ العكسي الكمي (RT-qPCR)، وتفاعل RT-LAMP، وتسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq)، وتخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (cDNA). تصل درجة حرارة تفاعل النسخ العكسي إلى 70 درجة مئوية.
تعريف الوحدة
يتم تعريف وحدة واحدة (U) من نشاط الإنزيم على أنها كمية الإنزيم المطلوبة لدمج 1 نانومول من dTTP في مادة غير قابلة للذوبان في الحمض خلال 10 دقائق عند 37 درجة مئوية، باستخدام Poly(A).Oligo(dT) كقالب تمهيدي.
عنصر
| عنصر | اسم | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | هيفير™ النسخ العكسي الفائق (200 وحدة/ميكرولتر) | 50 ميكرولتر | 250 ميكرولتر |
ظروف التخزين
قم بتخزينه في درجة حرارة تتراوح بين -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية لمدة تصل إلى 18 شهرًا.
تعليمات الاستخدام
إجراء تخليق cDNA للسلسلة الأولى
1. إزالة طبيعة الحمض النووي الريبوزي (خطوة اختيارية)
1. يساعد تحلل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (RNA) على فتح الهياكل الثانوية، مما يحسن بشكل كبير من إنتاج الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين من السلسلة الأولى.
| عنصر | مقدار |
| ddH2O الخالي من RNase | إلى 13 ميكرولتر |
| أوليجو (dT) 18 (50 ميكرومولار) أو بادئات عشوائية (50 ميكرومولار) أو بادئات خاصة بالجين (2 ميكرومولار) | 1 ميكرولتر |
| قالب الحمض النووي الريبوزي | إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA): 10 بيكوغرام - 5 ميكروغرام أو مرنا: 10 بيكوغرام - 500 نانوغرام |
· سخنيها على درجة حرارة 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، ثم قومي بتبريدها بسرعة على الثلج لمدة دقيقتين.
· قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع سائل التفاعل وإضافة مزيج تفاعل النسخ العكسي كما هو موضح أدناه.
2. إعداد تفاعل النسخ العكسي (نظام 20 ميكرولتر)
| عنصر | مقدار |
| خليط التفاعل من الخطوة السابقة | 13 ميكرولتر |
| 5 × عازل التفاعل | 4 ميكرولتر |
| مزيج dNTP (10 مليمول) | 1 ميكرولتر |
| إنزيم النسخ العكسي الفائق Hifair® (200 وحدة/ميكرولتر) | 1 ميكرولتر |
| مثبط RNase (40 وحدة/ميكرولتر) | 1 ميكرولتر |
3. إعدادات برنامج النسخ العكسي
| درجة حرارة | وقت |
| 25 درجة مئوية* | 5 دقائق |
| 50-70 درجة مئوية | 15-30 دقيقة |
| 85 درجة مئوية** | 5 دقائق |
*عند استخدام بادئات عشوائية، احضنها عند درجة حرارة ٢٥ درجة مئوية لمدة ٥ دقائق. في حال استخدام بادئات أوليجو (dT)١٨ أو بادئات جينية محددة، يُمكنك حذف هذه الخطوة.
يؤدي التسخين عند درجة حرارة 85 درجة مئوية لمدة 5 دقائق إلى تعطيل النسخ العكسي ويمكن تعديله حسب الحاجة.
يمكن استخدام منتج النسخ العكسي على الفور لتفاعلات PCR أو qPCR اللاحقة، أو تخزينه لفترة قصيرة عند -20 درجة مئوية، أو للتخزين لفترة طويلة عند -80 درجة مئوية بعد التقسيم لتجنب دورات التجميد والذوبان.
احتياطات
1. حافظ على بيئة مختبر نظيفة؛ ارتدِ قفازات وكمامات نظيفة. تأكد من خلو جميع المواد الاستهلاكية التجريبية من إنزيم الريبونوكلياز لمنع التلوث.
2. قم بإجراء كافة العمليات على الجليد لمنع تحلل الحمض النووي الريبي.
3. استخدم عينات الحمض النووي الريبي عالية الجودة لضمان النسخ العكسي الفعال.
4. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
5. من أجل سلامتك وصحتك، ارتدِ معطفًا مختبريًا وقفازات يمكن التخلص منها أثناء التعامل مع المنتج.
وثائق:
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.