هييف NGS^{العلامة التجارية} UCF.ME يتم تحضير حبات اختيار الحمض النووي على أساس مبدأ SPRI (التثبيت العكسي للمرحلة الصلبة) ويمكن تطبيقه على تنقية الحمض النووي واختيار الحجم أثناء تحضير مكتبات التسلسل الجيني للجيل التالي (NGS).^{العلامة التجارية} UCF.ME تتوافق حبيبات اختيار الحمض النووي مع مجموعة متنوعة من أدوات تحضير مكتبة الحمض النووي والحمض النووي الريبي. يتم تصنيع هذا المنتج في منشأة فائقة النظافة بمستوى عالٍ من النظافة ويمكن استخدامه في مرحلة تنقية الحمض النووي أثناء عمليات الكشف عن مسببات الأمراض.

تحديد

عناصر

تخزين

يجب تخزين هذا المنتج في 2~8℃ لمدة 18 شهرًا.

الشحن والتخزين

يتم شحن الخرز مع أكياس الثلج ويمكن تخزينها في درجة حرارة تتراوح بين 2 درجة مئوية و8 درجات مئوية لمدة عام واحد.

تعليمات

• 1. التحضير

قم بموازنة حبات الاختيار في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل الاستخدام.

• 2. اختيار حجم الحمض النووي

يظهر تدفق عملية اختيار الحجم في الشكل 1 والبروتوكول على النحو التالي.

الشكل 1. مخطط انسيابي لاختيار حجم الحمض النووي

2.1 قم بخلط الخرز جيدًا عن طريق التحريك أو التقطير لأعلى ولأسفل في كل مرة قبل الاستخدام.
2.2 أضف الجولة الأولى من خرزات الاختيار إلى العينة (راجع الجدول 1). اخلط جيدًا عن طريق المزج بالدوامة أو التقطير لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل.
2.3 احضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
2.4 قم بتدوير الأنبوب لأسفل لفترة وجيزة ثم ضعه على حامل مغناطيسي. عندما يصبح المحلول صافيًا (حوالي 5 دقائق)، انقل السائل العلوي إلى أنبوب PCR جديد.
2.5 أضف الجولة الثانية من خرزات الاختيار إلى العينة من الخطوة 2.4 وفقًا للجدول 1. اخلط جيدًا عن طريق المزج بالدوامة أو التقطير لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل.
2.6 احضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
2.7 قم بتدوير الأنبوب لأسفل لفترة وجيزة ثم ضعه على حامل مغناطيسي. عندما يصبح المحلول صافيًا (حوالي 5 دقائق)، قم بشفط السائل العلوي وتخلص منه.
2.8. ضع الأنبوب في الحامل المغناطيسي وأضف 200 ميكرولتر من الإيثانول الطازج بنسبة 80% دون إزعاج الخرز، ثم احتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 ثانية. قم بتصفية الإيثانول وتخلص منه.
2.9 كرر الخطوة 2.8 مرة واحدة لإجمالي غسلتين.
2.10 قم بإزالة الإيثانول المتبقي باستخدام أطراف ماصة سعة 10 ميكرولتر. احتفظ بالأنبوب في الحامل المغناطيسي، ثم قم بتجفيف حبات الاختيار في الهواء مع فتح الغطاء حتى تظهر الشقوق (حوالي 5 دقائق).
ملحوظة: لا تجفف حبات التحديد بشكل مفرط. قد يؤدي هذا إلى انخفاض معدل استرداد الحمض النووي المستهدف.
2.11 قم بإزالة الأنبوب من الحامل المغناطيسي. أضف كمية مناسبة من ddH2O (≥20 µL) واخلط جيدًا عن طريق المزج بالدوامة أو التقطير لأعلى ولأسفل 10 مرات على الأقل.
2.12 احضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
قم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة ثم ضعه على الحامل المغناطيسي. عندما يصبح المحلول صافيًا (حوالي 5 دقائق)، انقل 20 ميكرولترًا من السائل العلوي إلى أنبوب جديد.

• 3. الشروط الموصى بها لاختيار حجم الحمض النووي

تم تجزئة الحمض النووي لغدة الزعترية العجلية باستخدام الموجات فوق الصوتية لإعداد قطعة بطول 100-1000 زوج أساسي، وتم إجراء جولتين لاختيار الحجم وفقًا للجدول 1. وتم تحليل النتائج باستخدام جهاز Agilent 2100 Bioanalyzer (الشكل 2).

الجدول 1. الحالة الموصى بها لاختيار حجم الحمض النووي

ملاحظة: يشير "×" في الجدول إلى حجم عينة الحمض النووي. على سبيل المثال، إذا كان طول إدراج المكتبة 250 زوجًا قاعديًا وكان حجم عينة الحمض النووي 100 ميكرولتر، فإن حجم الخرز المغناطيسي المستخدم في الجولة الأولى من الفرز هو 0.80×100 ميكرولتر = 80 ميكرولتر؛ وحجم الخرز المغناطيسي المستخدم في الجولة الثانية من الفرز هو 0.20×100 ميكرولتر = 20 ميكرولتر.

الشكل 2. مخطط كهربية الحمض النووي عالي الحساسية من Agilent 2100