تم تجهيز المجموعة بمحلول تحلل قوي، والذي يمكنه تحليل العينات بسرعة (مثل الخلايا، ذيل الفأر، أذن الفأر، إصبع قدم الفأر، العضلات، إلخ) لإطلاق الحمض النووي الجينومي، ويمكن إضافة المحلول مباشرة إلى نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل دون تنقية، وهو مناسب للتشغيل. بالإضافة إلى ذلك، تتطلب هذه المجموعة إدخال عينة منخفض، ويمكن استخدام 5 ملغ من أنسجة الفأر أو 1-5 مم من ذيل الفأر للتجارب.

عناصر

تخزين

19697-أ يجب تخزين (محلول التحلل) في 2~8 درجة مئوية لـ 1 سنين. في حالة الاستخدام عدة مرات، يرجى تجميده في عبوات منفصلة لتجنب التلوث المتبادل. 19687-ب (حل التوقف) ينبغي تخزينها في -25~-16 درجة مئوية لـ 1 سنين.

تعليمات

إطلاق الحمض النووي الجينومي للفأر

1. قم بوضع 5-10 ملغ من الأنسجة الحيوانية أو 1-5 ملم من ذيل الفأر في أنبوب الطرد المركزي سعة 1.5 مل*.
2. أضف 90 ميكرولترًا من Buffer ML إلى أنبوب الطرد المركزي أعلاه، وقم بالاهتزاز بلطف لتسرب العينة بالكامل مع المحلول، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة.
3. احضنها عند درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة في حاضنة حرارية**.
4. أضف 10 ميكرولتر من Buffer MT، ثم حرك المزيج، ثم أنهِ عملية التحلل.
5. خطوة اختيارية: الطرد المركزي بسرعة 12000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين.
6. انقل السائل العلوي إلى أنبوب طرد مركزي جديد وقم بتخزينه عند 4 درجات مئوية أو -20 درجة مئوية أو خذ السائل العلوي مباشرة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل لاحقًا.

* ينبغي قطع الأنسجة قدر الإمكان للسماح لتفاعل التحلل بالتقدم بسلاسة أكبر.

**عادةً ما تكون فترة الحضانة عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة كافية لتلبية معظم احتياجات تفاعل البوليميراز المتسلسل. وإذا كانت هناك حاجة إلى كمية أكبر من الحمض النووي أو كان من الصعب تحليل العينة، فيمكن تمديد الوقت إلى 30 دقيقة. ولا يلزم تحليل كتلة الأنسجة بالكامل، ويمكن إزالة البقايا في خطوة طرد مركزي لاحقة.

إطلاق الحمض النووي للخلية الجينومية

بعد زراعة الخلايا المحولة في طبق مكون من 48 بئرًا لمدة 3 أيام والوصول إلى كثافة خلايا تبلغ حوالي 70000 خلية/بئر، قم بإزالة الوسط تمامًا قدر الإمكان. ثم أضف 90 ميكرولتر من عازل ML مباشرةً لكل بئر وامسح كل بئر. انقل كل شيء إلى طبق تفاعل البوليميراز المتسلسل المكون من 96 بئرًا. بعد المعالجة بجهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل عند 95 درجة مئوية لمدة 5-15 دقيقة والتبريد، أضف 10 ميكرولتر من عازل MT وانفخ بالتساوي وبشكل كامل. باستخدام إنزيم عالي الدقة (رقم الفئة 10164) أو إنزيم Taq، أضف 0.5-2 ميكرولتر من محلول الخلية إلى كل 50 ميكرولتر من نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل وقم بإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل.

الشكل 1. تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر مع مستخلص الخلايا المعالج بـ 19697.

ملحوظات

1. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
2. يرجى العمل باستخدام نظارات السلامة ومعاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة من أجل سلامتك.
3. من أجل تجنب التلوث المتبادل بين العينات، من الضروري غمر حافة جهاز أخذ العينات أو الجزء الذي يكون على اتصال مباشر بالعينة في محلول هيبوكلوريت الصوديوم 2٪ بعد كل أخذ عينات، وغسله عدة مرات، ثم تجفيف السائل المتبقي بمنشفة ورقية نظيفة قبل استخدامه مرة أخرى.لتسهيل الاختبار، يمكن إعداد عدة أجهزة أخذ عينات وتنظيفها بشكل موحد بعد الاستخدام لضمان أخذ عينات من كل عينة فردية بجهاز أخذ عينات خالٍ من التلوث.
4. يوصى باستخدام أنسجة حيوانية مأخوذة حديثًا. في حالة الأنسجة المجمدة لفترة طويلة، يجب تجنب التجميد والذوبان المتكرر قدر الإمكان، وإلا سيؤدي ذلك إلى تدهور القالب والتأثير على كفاءة تفاعل البوليميراز المتسلسل.

وثائق:

الدليل