حبيبات كونكانافالين أ (ConA) عبارة عن كرات مجهرية بوليمرية فائقة المغناطيسية تم ربطها تساهميًا مع كونكانافالين أ (لاكتين نباتي يربط المانوز/الجلوكوز معزول من بذور نباتات الحبوب) على سطحها. هذه الخرزات تمتلك عدة خصائص ملحوظة، بما في ذلك التشتت الأحادي والتفاعل المغناطيسي القوي. عندما يكون Ca²⁺ و ملغ²⁺ بفضل وجود الأيونات، يمكن لحبيبات ConA المغناطيسية فصل وتنقية العديد من الجزيئات الحيوية مثل السكريات المتعددة والجليكوبروتينات والجليكوليبيدات بكفاءة وسرعة من خلال الاستفادة من التقارب بين جلوبيولين ConA A ومجموعات α-D-مانوز وα-D-جلوكوز الطرفية.

توفر حبات ConA المغناطيسية طريقة ملائمة لفصل الخلايا أو تثبيتها، مما يضمن الحد الأدنى من فقدان الخلايا أثناء خطوات الغسيل اللاحقة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدامها لجمع وتثبيت النوى. علاوة على ذلك، تجد هذه الحبات فائدة في التقنيات المبتكرة مثل CUT & Run وCUT & Tag، وهي طرق ثورية تستخدم في تجارب ChIP-seq.

باختصار، تعتبر حبيبات ConA المغناطيسية أدوات قوية لتنقية الجزيئات الحيوية بكفاءة، وفصل الخلايا وتثبيتها بشكل ملائم، وجمع النوى، وتطبيقها في التقنيات التجريبية المتطورة.

تحديد

الخصائص

الأشكال والجداول

الجدول 1. تتمتع حبيبات ConA من Yeasen بمعدل التقاط مرتفع. تم التحقق من أن كمية Concanavalin A (ConA) المستخدمة بالتناسب مع الكرات الدقيقة تضمن أقصى قدرة ربط مع منع التكتل المفرط للحبيبات المغناطيسية بعد ربط الخلايا في تجارب CUT&Tag. على سبيل المثال، يمكن أن يؤدي استخدام 10 ميكرولتر من الحبيبات المطلية بـ ConA إلى ربط كمية من الخلايا تعادل مستويات E7، مع كفاءة ربط تتجاوز 98%.

الشكل 1. تظهر حبيبات ConA من شركة Yeasen تشتتًا عاليًا. في عملية وسم الحبيبات، تم اختيار مادة مانعة للتسرب غير بيولوجية لضمان الإغلاق الفعال دون التأثر بالاختلافات من دفعة إلى أخرى. يضمن هذا إغلاقًا ممتازًا للحبيبات المغناطيسية، والحفاظ على تشتتها الأحادية العالية أثناء تخزين الحبيبات المطلية بـ ConA، وهو أمر مفيد للارتباط الفعال بجزيئات الكربوهيدرات في التجارب اللاحقة.

الشكل 2. توزيع إشارة الكروماتين CUT&Tag باستخدام Yeasen Con A Beads.

تخزين

يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة عامين.

تعليمات

وتتخذ العمليات التالية تنقية الجليكوبروتينات أو عزل الخلايا كمثال، أما بالنسبة لـ قص وعلامة التجارب ، راجع Yeasen Cat# 12598ES للبروتوكول.

1. إعداد المخازن المؤقتة

1) يتم توفيرها من قبل العميل

1. المواد المطلوبة غير المضمنة: حامل مغناطيسي، أنابيب إيبندورف، أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل، حوامل مغناطيسية، أجهزة تدوير حرارية إلخ.
2. تحقيق التوازن خرز في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة على الأقل. أعد تعليق الخرز جيدًا عن طريق رج الزجاجة أو تحريكها.

1. معالجة العينة أخذ الخلايا الثديية كمثال )

1. تحضير الخلايا الثديية (1.0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ الخلايا)، جهاز الطرد المركزي (4 درجات مئوية، 600×ز، 3~5 دقائق) وبعناية ينبذ السائل العلوي.
2. أضف 140 ميكرولترًا من محلول الربط، واخلط جيدًا وأعد تعليق الخلايا، ثم قم بالطرد المركزي وجمعها (4 درجات مئوية، 600 × ز، 3 ~ 5 دقائق)، بعناية ينبذ السائل العلوي.
3. أضف 90 ميكرولترًا من محلول الربط، واخلط جيدًا وأعد تعليق الخلايا.
   تنبيه: يمكن الحصول على خلايا ثديية ملتصقة بإحكام عن طريق الهضم الجزئي باستخدام إنزيم مثل التربسين. بالنسبة للأنسجة الحيوانية أو الخلايا النباتية أو الخلايا الفطرية، فإن الحصول على خلايا متفرقة أو بروتوبلاستات يتطلب غالبًا معالجات خاصة مصممة وفقًا لخصائصها المحددة.

1. تحضير حبات ConA

1. قم بتمرير حبيبات ConA برفق حتى يتم تعليقها بالكامل، ثم ضع 10 منها ميكرولتر من تعليق الخرز في أنبوب الطرد المركزي الجديد بسعة 200 ميكرولتر.
2. أضف 40 ميكرولترًا من محلول الربط، واخلط جيدًا واتركه على الحامل المغناطيسي لمدة دقيقة واحدة وتخلص من السائل العلوي بعد امتصاص الخرز المغناطيسي للجدار الجانبي لأنبوب الطرد المركزي.
3. أضف 10 ميكرولتر من محلول الربط، واخلط جيدًا وأعد تعليق حبيبات ConA.

1. عينة ملزمة

1. أضف عينة الخلايا المحضرة إلى الخرز المعالج مسبقًا، ثم استخدم الماصة بلطف لسحب الخرز المعلق مرة أخرى، ثم قم بحضنها في خلاط مقلوب (درجة حرارة الغرفة 30 دقيقة أو 4 درجات مئوية طوال الليل).
2. قف على حامل مغناطيسي لمدة دقيقة واحدة، وانتظر حتى تمتص الخرزات المغناطيسية الجدار الجانبي لأنبوب الطرد المركزي، ثم تخلص بعناية من السائل العلوي.
3. يضيف 500 ميكرولتر من محلول الإيلوشن لمجمع حبيبات الخلية-ConA و قم بتمرير الماصة بلطف إلى إعادة تعليق الخرز، ثم قف على حامل مغناطيسي لمدة دقيقة واحدة، وانتظر حتى تمتص الخرزات المغناطيسية الجدار الجانبي لأنبوب الطرد المركزي، ثم تخلص بعناية من السائل العلوي.
4. كرر الخطوة 3) لثلاث أو أربع مرات أخرى.

1. الإيلوت

1. بالنسبة للجليكوبروتينات، أضف 50 إلى 250 ميكرولترًا من محلول الإيلوشن، ثم قم بسحب الحبيبات المعاد تعليقها برفق، ثم قم بحضنها على خلاط مقلوب (درجة حرارة الغرفة لمدة 10 إلى 30 دقيقة). بعد الخلط المقلوب، ضعها على حامل مغناطيسي لمدة دقيقة واحدة، ثم قم بتجميع السائل العلوي في أنبوب جديد سعة 1.5 مل لخطوة SDS-PAGE أو Western blot.
2. بالنسبة للخلية، لا حاجة إلى الإيلوستن.

ملحوظات

1. تحقيق التوازن كونا حبات في درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
2. تجنب التجميد، وإلا سيؤدي ذلك إلى تدهور مادة الخرز أو فقدان نشاطه.
3. يتطلب ConA وجود أيونات Ca2+ وMn2+ ليكون نشطًا، لذلك يجب تجنب الكواشف التي تحتوي على EDTA أو غيرها من عوامل تخلب الأيونات المعدنية أثناء التجربة.
4. عند احتضانها مع الخلايا، قد تتجمع حبيبات ConA، وهو أمر طبيعي ولا يؤثر على الاستخدام الطبيعي للحبيبات المغناطيسية.
5. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
6. يرجى العمل باستخدام معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، من أجل سلامتك.

يدوي