غالبًا ما يستخدم هلام البولي أكريلاميد (هلام PAGE) في التحليل الكهربائي للبروتين لتحقيق فصل البروتين. يتكون هذا النوع من الهلام عمومًا من هلام مركّز وهلام فصل. يلعب الأول دور تركيز عينات البروتين، بينما يفصل الأخير البروتينات ذات الأحجام المختلفة وفقًا لتركيز مونومر الأكريلاميد وعامل الربط المتقاطع N,N-methylenebisacrylamide (methyleneacrylamide) المستخدم في الهلام.

توفر هذه المجموعة مجموعة متنوعة من الكواشف المطلوبة للتحضير السريع لهلام PAGE. يحتاج المستخدمون فقط إلى تحضير معدات تحضير الجل الخاصة بهم لتحضير الجل، مما يبسط إلى حد كبير عملية تحضير الجل. لا يمكن استخدام الجل المحضر بواسطة هذه المجموعة إلا في تحليل كهربي لهلام PAGE. يمكن لهذه المواصفات تحضير حوالي 125 قطعة من الجل الصغير (محسوبة على أساس جل بسمك 0.75 مم).

تحديد

عناصر

الشحن والتخزين

يتم شحن المنتج مع كيس ثلج ويمكن تخزينه لمدة 2درجة مئوية~8درجة مئوية لمدة سنة واحدة.

تعليمات: من المستحسن عدم تكوين عدد كبير جدًا من قطع الجل في وقت واحد لتجنب إضافة المحلول العلوي في وقت متأخر جدًا (ينصح باستخدام 2-3 قطع على الأكثر)

1. حدد تركيز الجل المناسب وفقًا للوزن الجزيئي للبروتين المستهدف (راجع الجدول 1)

2. عملية تصنيع الجل (خذ قطعة من الجل الصغير بحجم 0.75/1.0/1.5 مم كمثال)

2.1 خذ حجمًا متساويًا من محلول هلام الفصل ومحلول هلام الفصل واخلطهما، أي خذ 2.0/2.7/ 4.0 مل من المحلولين على التوالي.

2.2 قم بوزن 0.1 جرام من بيرسلفات الأمونيوم ثم قم بتذويبه في 1 مل من الماء منزوع الأيونات. يجب على العميل شراء بيرسلفات الأمونيوم بنفسه.

2.3 أضف 35/45/70 ميكرولترًا من APS إلى المحلول المختلط في الخطوة 1 (يمكن تقليل كمية APS المستخدمة إلى النصف إذا كان التصلب سريعًا جدًا) واخلطه بالكامل.

2.4 احقن المحلول في الخطوة 2 في لوح زجاجي لصنع الجل. لاحظ أنه يجب حقن الجل المركز في قالب الجل في غضون دقيقتين بعد إضافة جل الفصل، ويجب أن يكون صب الجل المركز بطيئًا لمنع اختلاط الجل المركز وهلام الفصل. إذا وجد الفرد صعوبة في التكوين، فيمكن أيضًا تعديله لتكوين جل مركز بعد الختم بالإيثانول.

2.5 تحضير الجل المركز: خذ حجمًا متساويًا من محلول الجل المركز ومحلول الجل المركز، أي خذ 0.5/0.75/1.0 مل من المحلولين على التوالي، ثم أضف 10/13/18 ميكرولترًا من APS واخلط جيدًا.

2.6 قم بحقنه في لوحة الزجاج لصنع الجل وأدخل أسنان المشط (لا تستخدم القوة المفرطة لإدخال أسنان المشط برفق).

2.7 بعد تجميد الجل المركز لمدة 15 دقيقة، يمكن إزالة أسنان المشط واستخدامها في عملية الرحلان الكهربائي. ملاحظة: يرجى محاولة استخدام محلول الرحلان الكهربائي المحضر حديثًا.

ملحوظات

1. من المقترح أن يكون الجهد أثناء عملية الرحلان الكهربائي بين 100-120 فولت. إذا كان من الضروري تسريع سرعة الرحلان الكهربائي، فيمكن زيادته إلى 150 فولت.

2. قبل ملء الجل، تأكد من موازنة محلول الجل بدرجة حرارة الغرفة (على سبيل المثال، احتفظ به لعدة دقائق) لتجنب تكوين الفقاعات في الجل بشكل فعال.

3. يتعين على العميل شراء كبريتات الأمونيوم بنفسه. نوصي باستخدام المنتج الذي يحمل الرقم التسلسلي A3678 من شركة Sigma.

4. كمية محلول بيرسلفات الأمونيوم هي للإشارة فقط، ويمكن زيادة أو تقليل الكمية الفعلية وفقًا للعادات التجريبية الشخصية والخبرة. يمكن أن يؤدي إضافة المزيد من بيرسلفات الأمونيوم إلى تسريع سرعة الهلام، والعكس صحيح. يرتبط معدل تخثر هلام PAGE ارتباطًا وثيقًا بدرجة الحرارة وكمية بيرسلفات الأمونيوم.

5. تمت إضافة كمية مناسبة من بدائل TEMED إلى هذا المنتج. إذا كان من الضروري زيادة سرعة الجل، يمكن إضافة كمية مناسبة من TEMED حسب الحاجة قبل التوزيع.

6. هناك علاقة إيجابية كبيرة بين تصلب الهلام ودرجة الحرارة. ففي ظل نفس الظروف، كلما ارتفعت درجة الحرارة، زادت سرعة التصلب.

7.قد ينتج عن الجل الملون المركّز كمية صغيرة من الترسب أثناء التخزين، وهي ظاهرة طبيعية. لا تتردد في استخدامه.

8. تم تخزين APS عند -20درجة مئوية. لمزيد من الراحة، يمكن تخزين ملف APS الذي تم فتحه وهو قيد الاستخدام في 4درجة مئوية.

9. يرجى ارتداء معدات الحماية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!!

10. للاستخدام البحثي فقط!

الجدول 1 نطاق الفصل المرجعي لهلام SDS-PAGE بتركيزات مختلفة

وثائق:

ورقة بيانات السلامة

20327-أ-بيانات سلامة المواد-CN20250110

20327-ب-بيانات بيانات سلامة المواد-CN20250110

20327-ج-بيانات بيانات سلامة المواد-CN20250110

20327-د-بيانات بيانات سلامة المواد-CN20250110

الدليل

20327_دليل_CN20241219_AR