تم تصميم مجموعة الركيزة الكيميائية الضوئية المحسنة ECL للكشف عن الأجسام المضادة والمستضدات المرتبطة بها والتي تم وسمها بشكل مباشر أو غير مباشر ببيروكسيديز الفجل (HRP). مبدأ مجموعة الركيزة الكيميائية الضوئية المحسنة ECL هو أنه تم نقل البروتينات أو الأحماض النووية إلى الغشاء المطبوع بعد الرحلان الكهربائي، وتم ربط البروتينات المستهدفة على الغشاء بالأجسام المضادة الأولية والأجسام المضادة الثانوية التي تم وسمها بـ HRP، أو تم ربط الأحماض النووية على الغشاء بشكل مباشر أو غير مباشر بواسطة مجسات تم وسمها بـ HRP. بعد غسل الغشاء، تم استخدام محلول العمل ECL المعد بواسطة المنتج لحضانة الغشاء في درجة حرارة الغرفة لعدة دقائق. تم لف الغشاء المطبوع بغلاف بلاستيكي وتثبيته على شريط التعرض للأشعة السينية. ثم يتم ضغط فيلم الأشعة السينية على الغشاء في غرفة مظلمة وتعريضه لعدة ثوانٍ إلى عدة ساعات. بعد التطوير والتثبيت، يمكن عرض أشرطة البروتين أو الأحماض النووية بوضوح على فيلم الأشعة السينية.

تتميز هذه المجموعة بنظام ركيزة متوهجة فريد من نوعه، مما يقلل من خلفية التعرض مع إدخال مؤكسد جديد مما يحسن بشكل كبير من استقرار المجموعة، مما يسمح لها بالاستقرار في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى عام واحد. بالإضافة إلى الأشعة السينية، يمكن أيضًا استخدام مسح CCD الفلوري بشكل مباشر بشكل أساسي للكشف عن WB ونظام الكشف المناعي الكيميائي.

سمات

يتمتع بحساسية عالية ونسبة إشارة إلى ضوضاء عالية، مما يجعله قادرًا على اكتشاف المستضدات متوسطة الدرجة.

يلمع بسرعة وبريقًا، ويمكن ملاحظة شريط الفيلم المطبوع تحت مصباح الفلورسنت.

مناسبة بشكل خاص للكشف عن وفرة الهدف، عينات البروتين التقليدية الأعلى.

مؤكسد جديد، مستقر في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى عام واحد.

التطبيقات

كيمياء التألق ELISA

لطخة ويسترن

لطخة النقاط- DNA/RNA

لطخة جنوبية- DNA

لطخة شمالية-RNA

تحديد

عناصر

الشحن والتخزين

يتم شحن المنتج بدرجة حرارة الغرفة ويمكن تخزينه في درجة حرارة الغرفة لمدة عام واحد. إذا لم يتم استخدامه لفترة طويلة، يوصى بتخزينه في درجة حرارة 2 درجة مئوية.درجة مئوية~8درجة مئوية لتمديد فترة الصلاحية.

ملحوظة: يجب تخزين 36222-A بعيدًا عن الضوء!

التعليمات (فيلم الأشعة السينية، على سبيل المثال)

1.الرحلان الكهربائي الروتيني، غشاء النقل، الأجسام المضادة الموسومة بـ HRP أو مسبار الحمض النووي الموسومة بـ HRP، غشاء الحضانة والغسيل.

ملاحظة: محلول ECL المضيء هو الركيزة الملونة لـ HRP، لذلك يجب أن يعتمد نظام الكشف على جسم مضاد مُوسم بالإنزيم HRP أو مسبار حمض نووي.

2. في نفس وقت غسل الغشاء للمرة الأخيرة، تم تحضير محلول العمل المضيء طازجًا (100-200 ميكرولتر من محلول العمل المضيء / سم 2 من الغشاء): خذ نفس الحجم من الكاشف A و B، واخلطهما جيدًا للاستخدام لاحقًا.

ملاحظات: يجب استخدام أطراف مختلفة للكاشف A والكاشف B. يوصى باستخدام السائل العامل على الفور. لا يزال من الممكن استخدامه بعد بضع ساعات في درجة حرارة الغرفة، ولكن الحساسية تقل قليلاً.

3. استخدم ملقطًا مسطحًا لإخراج الغشاء، ثم ضعه على ورق الترشيح لتصريف المستحضر، ولا تجعل الغشاء يجف تمامًا. اغمر الغشاء بالكامل في محلول العمل المضيء، مع ملامسة كافية لسائل العمل المضيء. احتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 1-2 دقيقة واستعد لتعرض الجهاز اللوحي على الفور.

4. التقط الغشاء باستخدام ملقط وضعه على ورق الترشيح لتصريف السائل المضيء. ولكن لا تغسل السائل المضيء.

5. ضع قطعة من الغلاف البلاستيكي أكبر من الغشاء على السطح الداخلي لفيلم الأشعة السينية. قم بربط الغشاء المطبوع بالغلاف البلاستيكي، ثم قم بطي الغلاف البلاستيكي بالكامل حول الغشاء المطبوع، ثم قم بإزالة فقاعة الغاز والطي، ويمكنك قطع حافة الغلاف البلاستيكي الزائد. استخدم ورق الترشيح لامتصاص السائل العامل المضيء الزائد. قم بتثبيت الغلاف البلاستيكي الذي يغطي الغشاء المطبوع في الغرفة المظلمة بشريط لاصق، مع توجيه شريط البروتين لأعلى.

6. تم أخذ قطعة من فيلم الأشعة السينية من الغرفة المظلمة ووضعها على الغشاء المغلف. تم ضغط الفيلم وتعريضه لمدة 30 ثانية - 2 دقيقة. ثم تم تحميض الفيلم وتثبيته.

ملحوظة: يجب تعديل وقت التعرض وفقًا لشدة التعرض.إذا كانت الخلفية مرتفعة للغاية، استخدم فيلمين للأشعة السينية في نفس الوقت.

طرق التعرض الأخرى

في حالة استخدام التصوير باستخدام CCD: يمكن وضع الغشاء في سائل العمل، وبعد التمهيد وفقًا لإرشادات الاستخدام، قم بإزالة الفيلم والتقاط الصور. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تعديل معلمات القياس الخاصة بالجهاز وفقًا للموقف لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء.

ملحوظات

1. يجب تجنب ظهور الفقاعات أثناء نقل الغشاء وإغلاقه وحضانته. بالإضافة إلى ذلك، فإن ارتداء القفازات سيساعد في تجنب ترك بصمات الأصابع على الغشاء والحفاظ عليه نظيفًا.

2. التعرض لفترات طويلة أو زيادة البروتين سيؤدي إلى تعميق الخلفية وجعل تغيير قوة الشريط يفقد علاقته الخطية. التعرض الناقص سيؤدي إلى تشويش الشريط.

3. قد تتسبب بعض أنواع الأغطية البلاستيكية في إطفاء الفلورسنت عند لف الغشاء المطبوع. لذا يجب اختيار أغطية بلاستيكية عالية الجودة.

4. تجنب وضع عدة أغشية في نفس صندوق غشاء الغسيل، حيث أن الامتصاص المتبادل أو الاحتكاك قد يسبب خلفية عميقة.

5. يمكن تحديد موضع وحجم الأشرطة على الفيلم بدقة باستخدام علامات البروتين المصبوغة المرئية وعلامات التعرض للتصوير الشعاعي الفلوري.

6. استخدم نظام البيوتين - الأفيدين وتجنب استخدام إغلاق الحليب، والذي قد يتسبب في ارتفاع الخلفية بشكل كبير.

7. قد تتسبب جزيئات أكسيد المعدن في ظهور بقع حبيبية على الغشاء. تجنب استخدام المقصات والملاقط الصدئة. استخدم ملاقط بلاستيكية مسطحة.

8. يمكن لأزيد الصوديوم (NaN3) أن يثبط نشاط HRP، وإذا كان من الضروري تجنب استخدام NaN3 عند استعادة المسبار أو الجسم المضاد المسمى بـ HRP، فلا ينبغي أن يتجاوز ذلك 0.01%.

9. هذا المنتج لا يحتوي على أي سمية خاصة، وفقًا للمعالجة الكيميائية الشائعة.

10. يرجى ارتداء معدات الحماية الشخصية اللازمة، مثل معطف المختبر والقفازات، لضمان صحتك وسلامتك!!

11. للاستخدام البحثي فقط!

وثائق:

ورقة بيانات السلامة

36222-أ-بيانات سلامة المواد-CN20250110

36222-ب-بيانات سلامة المواد-CN20250110

الدليل

36222_دليل_HB221212_AR

الاستشهادات والمراجع:

[1] He X، Li J، Zhou G، وآخرون. تحديد إيقاعات الحُصين والذاكرة من خلال اللدونة المشبكية في الخلايا العصبية المثبطة. Neuron. 2021؛ 109(6): 1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] وانغ إكس، تشانغ إس، جين دي، وآخرون. يعمل مستقبل μ-opioid على تسهيل تكوين الخلايا السرطانية المتداولة في سرطان المثانة عبر مسار MOR/AKT/Slug: دراسة شاملة تتضمن تجربة عشوائية محكومة.Cancer Commun (لندن). 2023؛43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. جسيمات نانوية من كربونات الكالسيوم مدمجة مع KAE لتمكين العلاج المعزز للسرطان الناتج عن زيادة الكالسيوم. المواد الحيوية. 2021؛ 277: 121080. doi: 10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF: 12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolide elicited ROS-mediated ERS drived ERS cell death in hepatocellular carcinoma. Redox Biol. 2022؛54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] كاي زد، تشانغ واي، تشانغ دبليو، وآخرون. احتباس الزرنيخ في كريات الدم الحمراء وزيادة البلعمة الكريات الحمراء مرتبط بانخفاض حالة السيلينيوم بسبب ضعف التوازن الأكسدة والاختزال. ريدوكس بيول. 2022؛52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. Exosomal ncRNAs profiling of mycobacterial infection identify miRNA-185-5p as a new biomark for tuberculosis. Brief Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P, Li H, Sun W, et al. Cholesterol-associated lysosomal disorder triggers cell death of hematological malignancy: Dynamic analysis on cytotoxic effects of LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X, Ni J, You Y, et al. يتسبب استشعار LPS بوساطة SNX10 في خلل في الحاجز المعوي من خلال سلسلة إشارات تعتمد على الكاسباس 5. EMBO J. 2021؛40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y, et al. Exosomal ANGPTL1 attenuate the colonrectal cancer metastastasis liver by activating Kupffer cell secretion pattern and impeding MMP9 vascular leakiness. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Published 2021 Jan 7. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (فرز النيكسين 10) يمنع بدء سرطان القولون والمستقيم وتطوره من خلال التحكم في التحلل الذاتي لـ SRC. Autophagy. 2020؛16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. الحويصلات خارج الخلية لـ Fusobacterium nucleatum تضعف الحاجز المعوي من خلال استهداف مسار موت الخلايا بوساطة RIPK1. Gut Microbes. 2021؛13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)