وصف
مجموعة عد الخلايا 8 (CCK-8) هي مجموعة كشف سريعة وحساسة للغاية تعتمد على كاشف WST-8 (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt). WST-8 عبارة عن كاشف مطور لـ MTT ويمكن اختزاله إلى فورمازان برتقالي-أصفر قابل للذوبان في الماء بدرجة عالية بواسطة نازعات الهيدروجين في الميتوكوندريا. كمية الفورمازان الناتجة يتناسب مع عدد الخلايا الحية. يمكن لقيمة OD للفورمازان عند 450 نانومتر التي تم اكتشافها بواسطة قارئ الصفائح الدقيقة أن تشير بشكل غير مباشر إلى عدد الخلايا القابلة للحياة. تُستخدم هذه المجموعة على نطاق واسع في فحص الأدوية، واختبارات تكاثر الخلايا والسمية الخلوية، واختبار حساسية الأدوية للأورام، والكشف عن نشاط العوامل البيولوجية.
مميزات طريقة CCK-8
1. مقارنة طريقة CCK-8 مع طرق الكشف عن تكاثر الخلايا/السمية الأخرى.
| طريقة الكشف | طريقة ام تي تي | طريقة XTT | WST - الطريقة 1 | طريقة CCK 8 |
|---|---|---|---|---|
| ذوبان منتج الفورمازان في الماء | منخفض (يجب إضافة مذيب عضوي للذوبان ثم الاختبار) | عالي | عالي | عالي |
| خصائص المنتج | مسحوق | زجاجتين من المحلول | حل | 1 زجاجة من المحلول |
| طريقة الاستخدام | امزجها في المحلول واستخدمها | تم تحضير المحلول قبل الاستخدام مباشرة. | خارج الصندوق | خارج الصندوق |
| حساسية الكشف | عالي | عالية جدا | عالية جدا | عالي |
| كشف وقت | طويل | قصير | قصير | الأقصر |
| طول موجة الكشف | 560-600 نانومتر | 420-480 نانومتر | 420-480 نانومتر | 430-490 نانومتر |
| السمية الخلوية | سمية عالية واختفاء تام لشكل الخلية | سمية منخفضة، شكل الخلية لم يتغير | قليل السمية، مورفولوجيا الخلية لم تتغير | سمية منخفضة، شكل الخلية لم يتغير |
| استقرار الكاشف | عام | قليل | عام | عالي |
| اختبار العينة بالجملة | ممكن | ملائم | ملائم | ملائم |
2. لا يتداخل الفينول الأحمر والمصل مع اكتشاف CCK-8.
3. نظرًا لأن السمية الخلوية لكاشف CCK-8 منخفضة جدًا، فمن الممكن تحديد وقت القياس الأمثل عن طريق القراءة المتكررة باستخدام قارئ الميكروبلايت في أوقات مختلفة بعد إضافة كاشف CCK-8.
الشحن والتخزين
يمكن تخزين المنتج في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية في مكان جاف ومظلم لمدة عامين.
احتياطات
1. في التجربة الأولى، يوصى بتحديد العدد الأمثل للخلايا المزروعة ووقت الحضانة الأمثل لكاشف CCK-8.
2. إذا أمكن، استخدم ماصة متعددة القنوات لتقليل الاختلافات بين الآبار المكررة. تجنب الفقاعات في التجربة حيث ستتداخل الفقاعات مع قراءة OD. عند إضافة كاشف CCK-8، يوصى بإضافته بالقرب من جدار صفيحة الثقافة بدلاً من إدخاله في وسط الثقافة.
3. قد تتطلب خلايا الدم البيضاء وقت حضانة أطول.
4. عند استخدام صفيحة قياسية ذات 96 بئرًا، يكون عدد الخلايا المطلية 1000 خلية/بئر على الأقل (100 ميكرولتر). حساسية الكشف عن خلايا الدم البيضاء منخفضة نسبيًا، لذا يوصى بلصق 2500 خلية/بئر على الأقل (100 ميكرولتر). إذا كنت تستخدم صفيحة ذات 24 بئرًا أو 6 آبار، فاحسب العدد المقابل للخلايا لكل بئر وأضف الحجم المناسب من كاشف CCK-8 (حجم كاشف CCK-8 المضاف هو 10% من حجم وسط الثقافة في كل بئر من الصفيحة).
5.إذا لم يكن مرشح 450 نانومتر متاحًا، فيمكن استخدام مرشح ذو امتصاص بين 430-490 نانومتر، ولكن مرشح 450 نانومتر يمكنه تحقيق أعلى حساسية للكشف.
6. لا يؤثر اللون الأحمر الفينول على القياس حيث يمكن القضاء على امتصاص اللون الأحمر الفينول في الوسط عن طريق طرح امتصاص المجموعة الفارغة.
7. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة عند إجراء التجربة.
تعليمات
1. اصنع منحنى قياسيًا
1. قم بإعداد تعليق الخلايا، وتحديد كثافة الخلايا، ثم صفيحة الخلايا.
2. قم بتخفيف الخلايا بشكل متسلسل باستخدام وسط الثقافة وفقًا لنسبة معينة (مثل نسبة 1:2) لتشكيل تدرج تركيز الخلايا، وعادةً ما يكون 3-5 تدرجات تركيز الخلايا، و3-6 آبار مكررة لكل تركيز.
3. بعد الطلاء، قم بزراعة الخلايا لمدة 2-4 ساعات لجعلها تلتصق. ثم أضف كاشف CCK-8، واحتضنه لفترة زمنية معينة وقم بقياس قيمة OD. ارسم منحنى قياسيًا مع عدد الخلايا كمحور X وقيمة OD كمحور Y. وفقًا لهذا المنحنى القياسي، يمكن تحديد عدد الخلايا في عينة غير معروفة (فرضية استخدام هذا المنحنى القياسي هي أن الظروف التجريبية يجب أن تكون متسقة).
II. اختبار قابلية الخلايا للبقاء
1. خلايا اللوحة (100 ميكرولتر/بئر) في لوحة بها 96 بئرًا. ضع اللوحة في حاضنة (37 درجة مئوية، 5% CO2)2) لفترة زمنية محددة للحضانة المسبقة.
2. أضف 10 ميكرولتر من كاشف CCK-8 إلى كل بئر (احرص على عدم إدخال الفقاعات إلى الآبار، لأنها تتداخل مع قراءة OD) واخلط بلطف.
3. ضع اللوحة في الحاضنة واحتضنها لمدة 1-4 ساعات.
4. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ اللوحة الدقيقة.
5. إذا لم يتم قياس قيمة الامتصاصية على الفور، أضف 10 ميكرولتر من محلول 0.1 مولار من حمض الهيدروكلوريك أو محلول SDS بنسبة 1% و/ح لكل بئر، وقم بتغطية اللوحة وتخزينها مع الحماية من الضوء في درجة حرارة الغرفة. لن تتغير قيمة الامتصاصية خلال 24 ساعة.
ثالثا: اختبار تكاثر الخلايا والسمية الخلوية
1. خلايا اللوحة (100 ميكرولتر/بئر) في لوحة بها 96 بئرًا. ضع اللوحة في حاضنة (37 درجة مئوية، 5% CO2)2) لمدة 24 ساعة للحضانة الأولية.
2. أضف 10 ميكرولترًا من تركيزات مختلفة من المادة المراد اختبارها إلى اللوحة.
3. ضع اللوحة في الحاضنة واحتضنها لمدة زمنية معينة (مثل 6 أو 12 أو 24 أو 48 ساعة).
4. أضف 10 ميكرولتر من كاشف CCK-8 إلى كل بئر (احرص على عدم إدخال الفقاعات إلى الآبار، لأنها تتداخل مع قراءة OD) واخلط بلطف.
5. ضع الطبق في الحاضنة واحتضنه لمدة 1-4 ساعات.
6. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ اللوحة الدقيقة.
7. إذا لم يتم قياس قيمة الامتصاصية على الفور، أضف 10 ميكرولتر من محلول 0.1 مولار من حمض الهيدروكلوريك أو محلول SDS بنسبة 1% و/ح لكل بئر، وقم بتغطية اللوحة وتخزينها مع الحماية من الضوء في درجة حرارة الغرفة. لن تتغير قيمة الامتصاصية خلال 24 ساعة.
ملحوظة: إذا كانت المادة مؤكسدة أو مختزلة، استبدل وسط الثقافة القديم بوسط جديد (قم بإزالة الوسط القديم، ثم اغسل الخلايا مرتين بوسط جديد، ثم أضف وسطًا جديدًا) قبل إضافة كاشف CCK-8 للقضاء على تأثير المادة.إذا كانت المادة نفسها تحتوي فقط على أ طفيف التأثير على قيمة الامتصاص، لا توجد حاجة لاستبدال وسط الثقافة ويمكن القضاء على تأثير المادة عن طريق طرح قيمة الامتصاص لمجموعة فارغة من المادة.
صيغة الحساب
معدل بقاء الخلية =[(AC) /(BC)] × 100%
معدل التثبيط =[(BA) /(BC)] × 100%
أ: امتصاص المجموعة التجريبية (امتصاص وسط الثقافة المحتوي على الخلايا، وكاشف CCK-8، والمادة المراد اختبارها)
ب: امتصاص المجموعة الضابطة (امتصاص وسط الثقافة المحتوي على الخلايا، كاشف CCK-8)
ج: امتصاص المجموعة الفارغة (امتصاص وسط الثقافة المحتوي على كاشف CCK-8)
الاستشهادات
[1] صن إل، لي بي، جو إكس، وآخرون. في تحديد البنية الحيوية لجينوم فيروس كورونا المستجد يحدد البروتينات المضيفة المعرضة للأدوية المعاد استخدامها. Cell. 2021؛184(7):1865-1883.e20. doi:10.1016/j.cell.2021.02.008(إذا:41.584)
[2] Wei S, Zhao Q, Zheng K, et al. GFAT1-linked TAB1 glutamylation keeps p38 MAPK activation and promotes lib cancer cell survival under sugar straving. Cell Discov. 2022;8(1):77. Published 2022 Aug 9. doi:10.1038/s41421-022-00423-0(إذا: 38.079)
[3] Chen X, Zhang D, Su N, et al. Visualizing RNA dynamics in live cells with bright and stable RNAs fluorescent. Nat Biotechnol. 2019;37(11):1287-1293. doi:10.1038/s41587-019-0249-1(إذا: 31.864)
[4] Yang F، Xiao Y، Ding JH، et al. Ferroptosis heterogeneity in triple-negative breast cancer reveals an innovative immunotherapy combination strategy [نُشر على الإنترنت قبل الطباعة، 11 أكتوبر 2022]. Cell Metab. 2022؛S1550-4131(22)00411-9. doi:10.1016/j.cmet.2022.09.021(إذا:31.373)
[5] Rong QX، Wang F، Guo ZX، وآخرون. GM-CSF يتوسط التهرب المناعي من خلال زيادة تنظيم التعبير عن PD-L1 في ورم الغدد الليمفاوية القاتلة الطبيعية/الخلايا التائية خارج العقدة. Mol Cancer. 2021؛20(1):80. نُشر في 29 مايو 2021. doi:10.1186/s12943-021-01374-y(إذا: 27.401)
[6] Xia B, Shen X, He Y, et al. يسبب بروتين غلاف SARS-CoV-2 أضرارًا مرضية شبيهة بمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة (ARDS) ويشكل هدفًا مضادًا للفيروسات. Cell Res. 2021؛ 31 (8): 847-860. doi: 10.1038/s41422-021-00519-4(إذا: 25.617)
[7] Yang X, Zhao X, Zhu Y, et al. FBXO34 يعزز تنشيط فيروس نقص المناعة البشرية الكامن من النوع 1 عن طريق التعديل بعد النسخ. Emerg Microbes Infect. 2022؛11(1):2785-2799. doi:10.1080/22221751.2022.2140605(إذا:19.568)
[8] تشو زد، تشانغ إكس، لي إكس، وآخرون.استشعار الكروماتين السيتوبلازمي بواسطة cGAS ينشط الاستجابة المناعية الفطرية في عدوى SARS-CoV-2. Signal Transduct Target Ther. 2021؛6(1):382. نُشر في 3 نوفمبر 2021. doi:10.1038/s41392-021-00800-3(إذا:18.187)
[9] Li M, Hao B, Zhang M, et al. Melatonin enhances NK antitumor immunity, causing radiofrequency-induced radiofrequency antitumor immunity, causing cancer metabolism reprogramming and inhibition of multiple pulmonary tumors. Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):330. Published 2021 Sep 1. doi:10.1038/s41392-021-00745-7(إذا:18.187)
[10] Qi S, Zhu Y, Liu X, et al. بروتينات WWC تتوسط تنشيط LATS1/2 بواسطة كينازات Hippo وتشير إلى استراتيجية لقمع الورم. Mol Cell. 2022؛82(10):1850-1864.e7. doi:10.1016/j.molcel.2022.03.027(إذا: 17.970)
[11] Zhu J, Li X, Cai X, et al. Arginine monomethylation by PRMT7 controls MAVS-mediated antivirus innate immunity. Mol Cell. 2021;81(15):3171-3186.e8. doi:10.1016/j.molcel.2021.06.004(إذا: 17.970)
[12] Teng KX، Niu LY، Xie N، Yang QZ. عوامل ضوئية جزيئية فائقة لأكسدة NADH في وقت واحد وتوليد جذور فوق أكسيدية. Nat Commun. 2022؛ 13(1): 6179. نُشر في 19 أكتوبر 2022. doi:10.1038/s41467-022-33924-3(إذا:17.694)
[13] Zhong J, Guo Y, Lu S, et al. Rational design of a sensitized-enhanced tracer for discovering efficient APC-Asef inhibitors. Nat Commun. 2022;13(1):4961. Published 24 Aug 2022. doi:10.1038/s41467-022-32612-6(إذا:17.694)
[14] Liu F, Wang X, Duan J, et al. A Temporal PROTAC Cocktail-Mediated Bender AURKA Abrogates Acute Myeloid Leukemia Stem Cells. Adv Sci (Weinh). 2022؛ 9(22):e2104823. doi:10.1002/advs.202104823(إذا: 16.806)
[15] Ji C, Qiu M, Ruan H, et al. Transcriptome Analysis Revealed the Symbiosis Niche of 3D Scaffolds to Accelerate Bone Defect Healing. Adv Sci (Weinh). 2022؛ 9(8):e2105194. doi:10.1002/advs.202105194(إذا: 16.806)
[16] Feng L, Dou C, Xia Y, et al. Neutrophil-like Cell-Membrane-Coated Nanozyme Therapy for Ischemic Brain Damage and Long-Term Neurological Functional Recovery. ACS Nano. 2021؛15(2):2263-2280. doi:10.1021/acsnano.0c07973(إذا: 15.881)
[17] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Deleving Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygening and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021؛15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(إذا: 15.881)
[18] Jiang Z، He L، Yu X، وآخرون. Antiangiogenesis Combined with Inhibition of the Hypoxia Pathway Facilitates Low-Dose, X-ray-Induced Photodynamic Therapy [نُشر على الإنترنت قبل الطباعة، 25 يونيو 2021]. ACS Nano. 2021؛ 10.1021/acsnano.1c01063. doi:10.1021/acsnano.1c01063(إذا: 15.881)
[19] Gong X, Li J, Xu X, et al. Microvesicle-inspired oxygen-delivering nanosystem potentiated radiotherapy-mediated modulation of tumor stroma and antitumor immunity. 2022;290:121855. doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121855(إذا:15.304)
[20] Deng J, Xu W, Lei S, et al. Activated Natural Killer Cells-Dependent Dendritic Cells Recruitment and Maturation by Responsive Nanogels for Targeting Pancreat Cancer Immunotherapy. Small. 2022؛18(44):e2203114. doi:10.1002/smll.202203114(إذا:15.153)
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.