وصف
مجموعة الكشف عن الميكوبلازما qPCR من MycAway™ هي منتج مصمم للكشف النوعي عن تلوث الميكوبلازما في مصادر مختلفة، بما في ذلك المواد الخام وبنوك الخلايا وبذور الفيروسات ومحاليل حصاد الفيروسات أو الخلايا والخلايا المستخدمة في العلاجات السريرية، من بين أمور أخرى. تستخدم هذه المجموعة مجسات فلورية من Taqman (FAM وVIC) وتستخدم تقنيات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (PCR) للكشف بشكل منفصل عن الهدف والضوابط الداخلية. وقد تم التحقق من صحتها من حيث الخصوصية وحد الكشف والمتانة وفقًا لمعايير EP <2.6.7>، مما يدل على حساسية عالية وخصوصية وكفاءة وسلامة. حد الكشف يساوي أو أقل من 10 CFU/mL.
بالنسبة لاستخراج الأحماض النووية، يمكن استخدام هذا المنتج مع مجموعة تحضير عينات الحمض النووي المتبقي المغناطيسي MolPure® (Cat#18461)، والتي تستخدم طرق الاستخراج اليدوية. بدلاً من ذلك، يمكن استخراج الأحماض النووية في العينات تلقائيًا باستخدام مستخلص الأحماض النووية التلقائي AutoPure 32A (Cat#80501) ومجموعة تحضير عينات الحمض النووي المتبقي MolPure® Mag32 FA (Cat#18462). من المهم ملاحظة أن المجموعات التي تحتوي على Cat#18461 وCat#40619 خضعت للتحقق الشامل؛ للحصول على معلومات مفصلة عن التحقق، يرجى الاتصال بدعمنا الفني. بعد المعالجة المسبقة للعينات لإزالة الشوائب المتداخلة والحصول على أحماض نووية نقية، يتم إجراء تفاعل qPCR باستخدام مضخم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي، ويتم جمع إشارة الفلورسنت من المسبار وتحليلها.
| رقم القط. | 40619ES25 / 40619ES60 |
| مقاس | 25 ت / 100 ت |
| كشف حد | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| يكشف طريقة | تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي طريقة (طقمان فلوري) |
| مدة | 4 ساعات |
| فلوري مسبار | عائلة (هدف القناة) VIC (داخلي قناة) |
| مغطى الميكوبلازما | ≥ 100 |
| تصديق | تم التحقق من صحتها حسب ل EP <2.6.7> |
عناصر
| المكونات رقم | اسم | 40619ES25 | 40619ES60 |
| 40619-أ | 4×محلول تفاعل MyqPCR | 250 ميكرولتر | 1 مل |
| 40619-ب | ماي برايمر و بروبي مزج | 25 ميكرولتر | 100 ميكرولتر |
| 40619-ج* | الرقابة الداخلية | 25 ميكرولتر | 100 ميكرولتر |
| 40619-د** | التحكم الإيجابي (PC) | 500 ميكرولتر | 2 مل |
| 40619-E*** | تخفيف الحمض النووي المخزن المؤقت | 1 مل | 4×1 مل |
| 40619-ف**** | ماء فائق النقاء | 500 ميكرولتر | 2×1 مل |
*IC: داخلي يتحكم؛
**PCS: إيجابي يتحكم حل ،ال تركيز يكون 1000 نسخة/ميكرولتر.
***الحمض النووي تخفيف المخزن المؤقت: مستخدم ل الدائرة المتكاملة تخفيف و ال نموذج ل مركز التحكم الوطني و NCS.
**** فائق النقاء الماء: مستعمل ل ال تحضير ل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج.
تخزين
يجب تخزين هذا المنتج في درجة حرارة تتراوح بين -25 و-15 درجة مئوية لمدة عامين.
*عند استلام المجموعة، يرجى التحقق من اكتمال جميع المكونات وتخزينها على الفور في درجة حرارة -25~-15 درجة مئوية إذا لم يتم إجراء التحليل على الفور، يرجى ملاحظة أنه يجب تخزين 40619-B بعيدًا عن الضوء.
تعليمات
- الاستعدادات قبل التجربة
1) قم بإعداد الكواشف والمواد المطلوبة التي سيتم استخدامها في التجربة.
2) التأكد من ملاءمة أداة qPCR
يمكن استخدام هذه المجموعة على أنواع أجهزة qPCR كما يلي:
- بيو راد: CFX96
- Thermo Scientific: 7500 نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي؛ QuantStudio™5؛
- طريقة التجربة
1) استخراج الحمض النووي
نوصي باستخدام ' مجموعة تحضير عينة الحمض النووي المتبقي المغناطيسي (الرقم المرجعي 18461ES لـ الاستخراج اليدوي و القط رقم 18462ES لـ الاستخراج التلقائي) لـ استخراج الحمض النووي أنت يستطيع يزور ' http:/www.yeasenbiotech.com ' ل ال
معلومات مفصلة والشراء.
تحتوي المجموعة (رقم القطعة 40619ES) على عنصر تحكم داخلي (IC). إذا أضفت عنصر التحكم الداخلي إلى العينات قبل استخلاص الحمض النووي، فيمكنها التحقق من العملية الكاملة (بما في ذلك استخلاص الحمض النووي وتفاعل qPCR). إذا أضفت عنصر التحكم الداخلي إلى مزيج qPCR الرئيسي
مباشرة، سوف يعمل IC كعنصر تحكم qPCR فقط.
2) تحضير مزيج qPCR
- وفقًا لكمية العينة التي تضمنت التحكم الإيجابي (PCS)، وعدم وجود قالب للتحكم (NTC)، والسلبية حل التحكم (NCS) وعينة الاختبار (TS) لحساب عدد التفاعلات. قم بإعداد تفاعلين بالتوازي لـ
كل عينة بشكل عام.
* PCS: إيجابي يتحكم الحل؛ NTC: لا نموذج التحكم؛NCS: سلبي يتحكم الحل؛TS: اختبار عينة. هناك يكون لا يحتاج ل يؤدي
ال عينة اِستِخلاص ل أجهزة الكمبيوتر الشخصية و NTC، ولكن مركز التحكم الوطني و تي اس نكون ضروري.
آبار التفاعل (M1) = (1×NCS + ن × تي إس) ×2
آبار التفاعل (M2) = (1×PCS + 1×NTC) ×2
آبار التفاعل (M3) = (1×PCS + 1×NTC+ N×TS) ×2
- قم بتذويب الكمية المطلوبة من الكواشف على الثلج مسبقًا وفقًا لتصميم التجربة والجداول أدناه.
- احسب كمية مزيج qPCR وفقًا لعدد التفاعلات. يرجى ملاحظة أنه إذا تم استخدام المجموعة لأنشطة GMP مثل إصدار المنتج، فإننا نوصي باستخدام الجدولين 1 و2 للتحضير؛ إذا سوف تكون المجموعة فقط تستخدم للأبحاث ولا توجد حاجة لإضافة IC قبل الاستخلاص بعد التقييم، ثم اتبع الجدول 3 لـ
التحضير. يرجى ملاحظة أنه ليس كل M1 وM2 وM3 نكون مطلوب ل يكون يحضر.
| عنصر | الحجم (1×40 ميكرولتر من التفاعلات) | الحجم (م1×40ميكرولتر) |
| 4× مخزن تفاعل MyqPCR | 10 ميكرولتر | (م1+2) ×10 ميكرولتر |
| ماي برايمر و بروبي مزج | 1 ميكرولتر | (م1+2) ×1 ميكرولتر |
| روكس | 0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر** | (م1+2) ×0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر |
| مياه نقية | حتى 20 ميكرولتر | حتى (M1+2) ×20 ميكرولتر |
| المجموع | 20 ميكرولتر | (م1+2) ×20 ميكرولتر |
الجدول 1 نظام مزيج qPCR لـ M1
*ال إعدادات نظام في طاولة 1 هو قائم على على ال فرضية الذي - التي الدائرة المتكاملة يكون تمت الإضافة قبل اِستِخلاص ل كلاهما مركز التحكم الوطني و TS، لذلك هو - هي يكون لا ضروري
ل يضيف الدائرة المتكاملة متى تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج التحضير. IC إضافة طريقة قبل اِستِخلاص: أولاً، قم بالتخفيف الدائرة المتكاملة بواسطة 20 مرة مع الحمض النووي المخفف، و يضيف 1 ميكرولتر
مخفف الدائرة المتكاملة داخل كل 100 ميكرولتر امتحان عينة ل ال إضافي اِستِخلاص.
**هذا عدة يفعل لا يحتوي روكس مرجع صبغ. لو روكس مرجع صبغ يكون ضروري ل ال حقيقي وقت تفاعل البوليميراز المتسلسل مكبرات الصوت الذي - التي أنت نكون حالياً استخدام، 50×روكس مرجع صبغ (الرقم المرجعي 10200ES) هو مُستَحسَن ل يستخدم. في هذا الحالة تمت الإضافة مقدار يكون 0.8 ميكرولتر، مثل مُظهَر في طاولة 1. لو استخدام آخر
العلامات التجارية ل روكس المنتجات من فضلك يشير إلى ل هُم تعليمات ل روكس إضافة.لو لا روكس مرجع صبغ يكون مطلوب، تمت الإضافة مقدار يكون 0 ميكرولتر.
| عنصر | الحجم (1×40 ميكرولتر من التفاعلات) | الحجم (م2×40ميكرولتر) |
| 4× مخزن تفاعل MyqPCR | 10 ميكرولتر | (م2+2) ×10 ميكرولتر |
| ماي برايمر و بروبي مزج | 1 ميكرولتر | (م2+2) ×1 ميكرولتر |
| الرقابة الداخلية | 1 ميكرولتر* | (م2+2) ×1 ميكرولتر/0 ميكرولتر |
| روكس | 0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر** | (م2+2) ×0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر |
| مُنقى ماء | حتى 20 ميكرولتر | حتى (م2+2) ×20 ميكرولتر |
| المجموع | 20 ميكرولتر | (م2+2) ×20 ميكرولتر |
الجدول 2 نظام مزيج qPCR لـ M2
*ال إعدادات نظام في طاولة 2 يكون قائم على على ال فرضية الذي - التي الدائرة المتكاملة يكون لا تمت الإضافة في أجهزة الكمبيوتر الشخصية و مركز التحكم الوطني قبل اِستِخلاص، لذا الدائرة المتكاملة احتياجات ل يكون تمت الإضافة خلال تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج التحضير. IC إضافة طريقة بعد اِستِخلاص: مخفف الدائرة المتكاملة بواسطة 100 مرة مع الحمض النووي مخفف و يضيف 1 ميكرولتر مخفف الدائرة المتكاملة داخل
كل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج نظام.
**هذا عدة يفعل لا يحتوي روكس مرجع صبغ. لو روكس مرجع صبغ يكون ضروري ل ال حقيقي وقت تفاعل البوليميراز المتسلسل مكبرات الصوت الذي - التي أنت نكون حالياً استخدام، 50×روكس مرجع صبغ (الرقم المرجعي 10200ES) هو مُستَحسَن ل يستخدم. في هذا الحالة تمت الإضافة مقدار يكون 0.8 ميكرولتر، مثل مُظهَر في طاولة 1. لو استخدام آخر
العلامات التجارية ل روكس المنتجات من فضلك يشير إلى ل هُم تعليمات ل روكس إضافة. إذا لا روكس مرجع صبغ يكون مطلوب، تمت الإضافة مقدار يكون 0 ميكرولتر.
| عنصر | الحجم (1×40 ميكرولتر من التفاعلات) | الحجم (م3×40ميكرولتر) |
| 4× مخزن تفاعل MyqPCR | 10 ميكرولتر | (م3+2) ×10 ميكرولتر |
| ماي برايمر و بروبي مزج | 1 ميكرولتر | (م3+2) ×1 ميكرولتر |
| الرقابة الداخلية | 1 ميكرولتر* | (م3+2) ×1 ميكرولتر/0 ميكرولتر |
| روكس | 0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر** | (م3+2) ×0.8 ميكرولتر/0 ميكرولتر |
| مُنقى ماء | حتى 20 ميكرولتر | حتى (M3+2) ×20 ميكرولتر |
| المجموع | 20 ميكرولتر | (م3+2) ×20 ميكرولتر |
الجدول 3 نظام مزيج qPCR لـ M3
*ال إعدادات نظام في طاولة 3 هو قائم على على ال فرضية الذي - التي الدائرة المتكاملة يكون لا تمت الإضافة ل عينات قبل الاستخراج، لذلك الدائرة المتكاملة احتياجات ل يكون تمت الإضافة خلال تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج التحضير. IC إضافة طريقة بعد اِستِخلاص: مخفف الدائرة المتكاملة بواسطة 100 مرة مع الحمض النووي مخفف و يضيف 1 ميكرولتر داخل كل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مزج
نظام.
**هذا عدة يفعل لا يحتوي روكس مرجع صبغ. لو روكس مرجع صبغ يكون ضروري ل ال حقيقي وقت تفاعل البوليميراز المتسلسل مكبرات الصوت الذي - التي أنت نكون حالياً استخدام، 50×روكس مرجع صبغ (الرقم المرجعي 10200ES) هو مُستَحسَن ل يستخدم. في هذا الحالة تمت الإضافة مقدار يكون 0.8 ميكرولتر، مثل مُظهَر في طاولة 1. لو استخدام آخر
العلامات التجارية ل روكس المنتجات من فضلك يشير إلى ل هُم تعليمات ل روكس إضافة. إذا لا روكس مرجع صبغ يكون مطلوب، تمت الإضافة مقدار يكون 0 ميكرولتر.
3) إضافة القوالب
- قم بخلط مزيج qPCR مع رجه جيدًا، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة منخفضة وجمع السائل المتبقي من الغطاء
الى قاع الانبوب.
- أضف 20 ميكرولتر من مزيج qPCR لكل أنبوب/بئر تفاعل. يرجى ملاحظة إضافة مزيج qPCR المقابل في كل أنبوب/بئر تفاعل.
أنابيب العينة وتجنب إضافة الأخطاء.
- أضف القوالب إلى الأنبوب/الآبار التي تحتوي على مزيج qPCR. راجع الجدول 4 لإضافة القوالب.
| عينات الاختبار | في كل أنبوب أو حسنًا … |
| تي اس | 20 ميكرولتر من مزيج qPCR +20 عينات ميكرولتر بعد الاستخلاص |
| مركز التحكم الوطني | 20 ميكرولتر من مزيج qPCR +20 ميكرولتر الحمض النووي تخفيف المخزن المؤقت |
| مركز التحكم الوطني* | 20 ميكرولتر من مزيج qPCR +20 ميكرولتر عينة سلبية بعد الاستخراج* |
| أجهزة الكمبيوتر الشخصية | 20 ميكرولتر من مزيج qPCR +20 ميكرولتر إيجابي يتحكم |
طاولة 4 قوالب إضافة
*نوصي باستخدام عازل تخفيف الحمض النووي (40619-E) كقالب لـ NCS لاستخراج الحمض النووي.
**ال المجموع رد فعل مقدار في كل أنبوب/بئر يكون 40 ميكرولتر.
***غطاء ال أنبوب غطاء أو ال طبق فيلم. الى يتجنب مؤثر ال الفلورسنت إشارة القراءة من فضلك يأخذ رعاية لا ل علامة ال أنبوب غطاء أو فيلم
أو حتى فرك ال فيلم مرارا مع أ مكشطة.
****أجهزة الطرد المركزي ال رد فعل أنبوب أو طبق باختصار في قليل سرعة بعد قوالب إضافة. بعد كافٍ اهتزاز و خلط، تكرار جهاز الطرد المركزي
في قليل سرعة ل يجمع ال سائل من ال غطاء أو حائط ل ال أسفل. تجنب فقاعات متى العملية. خط الأساس سوف يكون متأثر لو ال مزج
يكون لا مختلط حسنا، إذن هذا خطوة يكون جداً مهم ل أ جيد تجربة نتيجة.
4) إعداد برامج qPCR
- إعدادات ملف البرنامج
مثال (جهاز 7500 Real-Time PCR System وبرنامج Real-Time PCR v2.4):
نوع الجهاز: 7500 (96 بئر)
نوع التجربة: منحنى الكميات القياسية؛
الكيمياء: كواشف Taqman®
سرعة المنحدر: قياسية (حوالي ساعتين لإكمال الجولة)
- إعدادات القناة المستهدفة
في "يُعرِّف الأهداف و "العينات" ل "طبق يثبت"، يخلق أ هدف 1 قناة (فام)، يختار عائلة مثل ال التقارير مجموعة الفلورسنت و إم جي بي أو لا أحد كما تطفأ الفلورسنت مجموعة. يخلق أ هدف 2 قناة (فيكتوريا)، يختار ال التقارير الفلورسنت مجموعة مثل فيك و ال إخماد الفلورسنت مجموعة مثل لا أحد. في "تعيين الأهداف و "العينات" ل "طبق يثبت"، لو لا إضافي روكس صبغ يكون تمت الإضافة، حدد "لا أحد"؛ إذا كان إضافي روكس يكون تمت الإضافة، حدد
روكس.
- إعدادات برنامج التضخيم القياسي
| الرقم التسلسلي | مرحلة رد الفعل | درجة حرارة | وقت | الدورة(الدورات) |
| 1 | التحلل الأولي | 95 درجة مئوية | 5 دقيقة | 1 |
| 2 | التحلل | 95 درجة مئوية | 15 ثانية |
45 |
| 3 | التلدين/التمديد (جمع إشارة الفلورسنت) |
62 درجة مئوية |
30 ثانية |
الجدول 5 إعدادات برنامج التضخيم القياسي
- تحديد خط الأساس والعتبة:
مبدأ ل خط الأساس تعديل: يستخدم ال اوتوماتيكي خط الأساس عمومًا. لو يحتاج ل يُعدِّل في يدوي، يختار ال دورة قبل النمو الأسي الفترة كدورة البداية، وتجنب منطقة التقلبات أولي الفلورسنت المجموعة. اختر الدورة التي تكون قبل Ct لعينة التضخيم الأسي الأقدم بـ 1-2 دورة.
نقطة النهاية.
مبدأ ل عتبة التعديل: استخدم العتبة التلقائية بشكل عام. إذا لزم الأمر التعديل يدويًا، فيجب تغيير العتبة يجب يكون تعيين أعلى من ال سلبي عينة أو ال خط الأساس ضوضاء، إنه عمومًا تعيين العتبة في ال متأخر
مرحلة من التضخيم الأسّي، والعتبة المستقلة النسبية والمناسبة مطلوبة لكل نفق.
5) نتيجة تحليل
- نتيجة الحكم على PCS و NTC و NCS:
إذا تمت إضافة IC: يجب أن تكون مواصفات كل عينة تحكم راضٍ عن الجدول 6:
| عينة التحكم | عائلة إشارة | إشارة فيك |
| أجهزة الكمبيوتر الشخصية | كت < 40، وله منحنى تضخيم واضح | كت < 40 وله منحنى تضخيم واضح |
| مركز التحكم الوطني | كت ≥ 40 أو لا يوجد منحنى تضخيم واضح | كت < 40 وله منحنى تضخيم واضح |
| مركز التحكم الوطني | كت ≥ 40 أو لا يوجد منحنى تضخيم واضح | كت < 40 وله منحنى تضخيم واضح |
طاولة 6 نتيجة حكم ل PCS، NTC و مركز التحكم الوطني
إذا لم تتم إضافة IC: يجب أن تفي كل عينة مراقبة الجودة بمواصفات عمود إشارة FAM في الجدول 6، ولا
بحاجة لتحليل قناة فيك.
- نتيجة الحكم على TS
المتطلبات الأساسية: هو - هي يكون من الضروري تحديد ما إذا كان أجهزة الكمبيوتر الشخصية، المجلس الوطني الانتقالي و مركز التحكم الوطني اجتاز المواصفات في الجدول 6 قبل TS تحليل النتائج. إذا تم تمريره، فيمكن انتقل إلى الخطوة التالية. إذا لم يكن اجتاز، ال تي اس نتائج يمكن لا يكون موثوق، و
السبب يحتاج إلى التحقيق.
إذا تمت إضافة IC: ابحث عن النتائج المقابلة الحكم وفقا لمعلومات النتيجة من FAM و فيك في الجدول 7:
| عائلة إشارة | إشارة فيك | نتيجة حكم |
| Ct<40 وله واضح منحنى التضخيم | Ct<40 وله منحنى تضخيم واضح | إيجابي |
| Ct≥40 أو لا يوجد منحنى تضخيم واضح | يوجد تثبيط، التجربة تحتاج إلى تكرار | |
| Ct≥40 أو لا يوجد شيء واضح منحنى التضخيم | Ct<40 وله منحنى تضخيم واضح | سلبي |
| Ct≥40 أو لا يوجد منحنى تضخيم واضح | يوجد تثبيط، التجربة تحتاج إلى تكرار |
طاولة 7: النتيجة حكم ل تي اس (IC (تمت الإضافة)
*لو هناك يكون التثبيط ل فيك الإشارة، العلاج يكون ضروري ل اِسْتَبْعَد ال مثبطات أو يكرر ال امتحان.
إذا لم تتم إضافة IC: ابحث عن النتائج المقابلة الحكم وفقا ل معلومات نتيجة FAM في الجدول 8 وليس هناك حاجة لتحليل إشارة VIC.
| إشارة FAM | نتيجة حكم |
| Ct<40 وله منحنى تضخيم واضح | إيجابي |
| Ct≥40 أو لا يوجد منحنى تضخيم واضح | سلبي |
طاولة 8: النتيجة حكم ل تي اس (IC لا (أضيفت)
ملحوظات
- يرجى قراءة هذا الدليل بعناية قبل استخدام هذه المجموعة. يجب إجراء التجربة بطريقة موحدة، بما في ذلك التعامل مع العينة، وإعداد نظام التفاعل، وإضافة العينة.
- قم بإجراء عمليات إضافة العينات وتحضير الكواشف على الثلج إذا أمكن.
- قم بالتقليب والخلط الجيد لكل الكواشف قبل الاستخدام.
- يرجى العمل باستخدام معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة، سلامتك.
- هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي فقط.
[1] تشاو إف، وانغ إكس، لي واي، تشن إكس، جينغ زي، تشانغ سي.تأثير المكملات الغذائية التي تحتوي على جالات إبيجالوكيتشين على جودة اللحوم وقدرة العضلات كمضاد للأكسدة في دجاج التسمين المعرض للإجهاد الحراري الحاد. Animals (Basel). 2021؛11(11):3296. نُشر في 18 نوفمبر 2021. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.