بوليبريين (بروميد الهيكساديميثرين)، المعروف أيضًا باسم بوليبريين، هو بوليمر كاتيوني يستخدم عادةً في تجارب نقل الحمض النووي مع الخلايا الثديية لتعزيز كفاءة نقل الليبوزومات. يتم استخدامه على نطاق واسع في نقل الجينات بوساطة الفيروسات الرجعية ونقل الجينات بوساطة الفيروسات العدسية. قد تتضمن آلية العمل تحييد حمض السياليك على سطح الخلية، مما يسهل الامتصاص من خلال التغلب على التنافر الكهروستاتيكي مع جزيئات الفيروس. يُعرف بوليبريين أيضًا بأنه مضاد للتخثر (مضاد الهيبارين) ويُستخدم كثيرًا في إنتاج خلايا الدم الحمراء غير المتجمعة بشكل محدد. بالإضافة إلى ذلك، في تسلسل البروتين، ثبت أن الجرعات المنخفضة من بوليبريين تعمل على تحسين تحلل الببتيدات بشكل كبير في تحليل التسلسل الآلي. يمكن أن يؤدي إضافة بوليبريين إلى أغشية PVDF أيضًا إلى تعزيز تقارب الغشاء.

مواصفة

يتم توفير المنتج في صورة محلول، ويتم إعادة تكوين المسحوق في 0.9% كلوريد الصوديوم لعمل محلول 10 مجم/مل، والذي يتم تعقيمه بعد ذلك باستخدام مرشح 0.22 ميكرومتر. يتم تخفيفه عادة بنسبة 1:1000-1:2000 للاستخدام، مع نسب تخفيف محددة حسب نوع الخلية، كما هو موضح في الأدبيات ذات الصلة.

الشحن والتخزين

يوصى بالنقل والتخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، مع مدة صلاحية تصل إلى عامين. يُنصح بتقسيم المنتج وتخزينه على شكل حصص لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة.

احتياطات:

1. ارتدِ ملابس المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة من أجل السلامة والصحة.

2. هذا المنتج لأغراض البحث فقط.

الخطوات التشغيلية

(للمرجع، قد تختلف التركيزات المحددة، راجع الأدبيات ذات الصلة):

ملاحظة: قد يُظهر البوليبريني سمية كبيرة لبعض الخلايا (مثل الخلايا العصبية المتمايزة نهائيًا، والخلايا التغصنية)، ويوصى بإجراء اختبار السمية للاستخدام الأولي.

التجربة 1: العدوى الفيروسية الرجعية

1. تحضير مخزون الفيروس الرجعي المعاد التركيب: خلايا الثقافة المحتوية على طبقة أحادية من الفيروس الرجعي المحول تغلف الخلايا في طبق بقطر 100 مم مع وسط نمو سعة 5 مل (مصل 5%). بعد 24 ساعة، قم بإزالة وسط الثقافة وقم بترشيحه من خلال مرشح سعة 0.45 ميكرومتر.

2. زراعة الخلايا للعدوى: في طبق مقاس 100 مم، أضف 10 مل من وسط النمو الكامل بكثافة خلايا 5×10⁵ لكل طبق.

3. عدوى الفيروس: بعد 24 ساعة من زراعة الخلايا، قم بإزالة وسط الزراعة بالكامل. قم بإصابة الخلايا بـ 2 مل من المحلول الفيروسي الذي يحتوي على بوليبرين (التركيز النهائي: 5-10 ميكروجرام/مل) عند 37 درجة مئوية لمدة 3-6 ساعات.

4. جمع جزيئات الفيروس: أضف 8 مل من وسط النمو الكامل. بعد 2-3 أيام من الزراعة، اجمع وسط الزراعة للحصول على جزيئات الفيروس.

التجربة 2: النقل الجيني

1. خلايا الثقافة في وسط نمو كامل بكثافة خلايا تصل إلى حوالي 50%.

2. بعد 18-24 ساعة من زراعة الخلايا، قم بإعداد خليط من وسط نمو الحمض النووي والبوليبرين. أضف وسط النمو الكامل (2 مل لطبق 60 مم، و3 مل لطبق 100 مم) وقم بتسخينه مسبقًا إلى 37 درجة مئوية. امزج بلطف 10 نانوجرام إلى 10 ميكروجرام من البلازميد. أضف بوليبرين إلى تركيز نهائي يتراوح بين 5-10 ميكروجرام/مل. اخلط المكونات بلطف. يجب إضافة كل مكون بالترتيب المحدد.

3. قم بإزالة وسط الثقافة وأضف وسط نمو الحمض النووي - محلول البوليبرين إلى الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 6-20 ساعة. قم بالخلط بلطف كل ساعة ونصف خلال أول 6 ساعات من زراعة الخلايا.

4. قم بإزالة وسط نمو الحمض النووي - محلول البوليبرين. قم بتغطية الخلايا بمحلول صدمة DMSO (15% DMSO في 1× HBSS).رجّي طبق الثقافة برفق لمدة 10 ثوانٍ في كل مرة يُضاف فيها المحلول لضمان التوزيع المتساوي. احتضني الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 4 دقائق.

5. قم بإزالة محلول صدمة DMSO على الفور واغسل الخلايا برفق مرتين باستخدام وسط النمو الكامل. بالنسبة لطبق مقاس 60 مم، اغسله بـ 5 مل من وسط الثقافة في كل مرة، وبالنسبة لطبق مقاس 100 مم، اغسله بـ 10 مل من وسط الثقافة في كل مرة.

6. أضف وسط النمو الكامل إلى الخلايا.

7. تعبير البروتين: بعد 24-72 ساعة من الثقافة، قم بجمع الخلايا لتحليل تعبير البروتين حسب الحاجة.

اختيار الخلايا: بعد 24-72 ساعة من الثقافة، وبناءً على حالة الخلية، قم بالتبديل إلى وسط اختيار جديد واستمر في اختيار الخلايا.