وصف
كاشف النقل الخطي بولي إيثيلين إيمين PEI 25000 هو بوليمر كاتيوني مشحون بدرجة عالية يرتبط بسهولة بجزيئات الأحماض النووية المشحونة سلبًا، ويشكل مركبًا، ويسمح للمركب بدخول الخلية. كاشف النقل هو كاشف نقل مؤقت ذو سمية خلوية منخفضة وكفاءة نقل عالية وكفاءة عالية في التعبير الجيني في خلايا مثل HEK293 وCHO. وقد تم التحقق من أن كاشف النقل الخطي PEI قابل للتطبيق على نطاق واسع على مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا بما في ذلك خلايا HEK-293 وHEK293T وCHO-K1 وCOS-1 وCOS-7 وNIH/3T3 وSf9 وHepG2 وHela، إلخ. الكاشف متوافق مع الوسائط المحتوية على مصل ويمكنه إدخال الأحماض النووية إلى الخلايا بكفاءة.
مواصفة
| اسم | بولي إيثيلين إيمين خطي (جزيرة الأمير إدوارد) مW25000 |
| رقم CAS. | 9002-98-6، 26913-06-4 |
| الصيغة الجزيئية | (CH2CH2(ن.ه.)ن |
| الوزن الجزيئي | 25000 |
| مظهر | أبيض أو مسحوق أصفر فاتح |
| نقطة الانصهار | 73~75 درجة مئوية |
| الذوبان | قابل للذوبان في الماء الساخن، والماء البارد ذو الرقم الهيدروجيني المنخفض، والميثانول والإيثانول. غير قابل للذوبان في البنزين والأثير والأسيتون |
| بناء |
|
الشحن والتخزين
يتم شحن المنتج في درجة حرارة الغرفة ويمكن تخزين المسحوق عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة عامين. يتم تخزين المحلول المخزن عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة 3 أشهر.
تحذيرات
1) بعد إخراج محلول PEI المحضر من درجة حرارة -20 درجة مئوية وإذابته، يمكن تخزينه في ثلاجة بدرجة حرارة 4 درجات مئوية ويجب عدم تجميده مرة أخرى.
2) بالنسبة لمعظم الخلايا، يمكن تحقيق كفاءة عالية في النقل باستخدام 3.0 ميكرولتر من كاشف نقل PEI لكل 1 ميكروجرام من الحمض النووي. يمكنك أيضًا محاولة استخدام حجم يتراوح بين 1.5 و4 ميكرولتر من كاشف نقل PEI الخطي لكل 1 ميكروجرام من الحمض النووي لتحسين الأداء.
3) من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة وغطاء الدخان أثناء التشغيل.
4) هذا المنتج مخصص لأغراض البحث العلمي فقط، وليس للاستخدام البشري.
تحضير محلول المخزون (1 ملغ/مل)
1. المواد
PEI 25000، مياه Milli-Q®/مياه للحقن (WFI) أو مياه مماثلة من الدرجة البيولوجية، 12 مول/لتر من حمض الهيدروكلوريك (HCl)، 10 مول/لتر من هيدروكسيد الصوديوم (NaOH)، فلتر معقم مفرغ من الهواء PES 0.1~0.2 ميكرومتر للاستخدام مرة واحدة، زجاجة تخزين معقمة من البولي إيثيلين عالي الكثافة أو البولي بروبيلين.
2. تحضير محلول المخزون (1 ملغ / مل)
1) في دورق زجاجي سعة 1 لتر، أضف 1 جرام من مسحوق PEI 25000 إلى 900 مل من الماء فائق النقاء Milli-Q® أو أي ماء بيولوجي مكافئ آخر، وحرك بالتساوي على محرك مغناطيسي لإنتاج دوامة صغيرة.
2) أضف حمض الهيدروكلوريك (12 مول/لتر) قطرة قطرة مع التحريك لضبط الرقم الهيدروجيني حتى يصبح الرقم الهيدروجيني <2.0.
3) قم بتغطية الجزء العلوي من الكوب وحركه لمدة 3 ساعات حتى يذوب تمامًا؛ حافظ على درجة الحموضة < 2.0 طوال العملية.
【ملاحظة】: قد تكون هناك بعض الجزيئات الليفية الصغيرة التي لا يمكن إذابتها، وهي ظاهرة طبيعية.
4) أضف NaOH (10 مول/لتر) قطرة قطرة مع التحريك لضبط الرقم الهيدروجيني حتى يصل إلى 6.9 ~7.1.
5) انقل المحلول إلى اسطوانة مدرجة، وأضف الماء حتى يصل إلى 1 لتر.
6) قم بالتصفية والتعقيم باستخدام مرشح فراغ PES ذو سعة 0.1-0.2 ميكرومتر للحصول على محلول مخزون بتركيز 1 مجم/مل.
7) قسم الكمية حسب الحاجة وقم بتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية، لمدة عام واحد.
【ملاحظة】: بعد إعادة إذابة محلول التخزين، يمكن تخزينه عند 4 درجات مئوية ويظل ثابتًا لمدة أسبوعين، ولكن لا يجب إعادة تجميده
إجراءات النقل الجيني (باستخدام صفيحة ذات 6 آبار كمثال)
1. تلقيح الخلايا: لتحسين كفاءة النقل، يوصى بتلقيح الخلايا قبل يوم واحد من النقل، ويفضل أن تكون كثافة الخلايا في وقت النقل 70% ~ 80%.
2. تحضير مركب DNA-PEI: تحضير مركب كاشف نقل الحمض النووي DNA-PEI وفقًا للنظام التالي:
1) لكل بئر من الخلايا، قم بتخفيف 2 ميكروجرام من الحمض النووي المستهدف مع 100 ميكرولتر من وسط خالٍ من المصل، واخلط جيدًا لتشكيل تخفيف الحمض النووي.
[ملاحظة]: يوصى باستخدام Opti-MEM أو ddH2O للمخفف الخالي من المصل
2) قم على الفور بإضافة 5 ميكرولتر من كاشف النقل PEI 25000 إلى 100 ميكرولتر من مخفف الحمض النووي، ثم قم بالخلط لمدة 10 ثوانٍ، ثم قم بالخلط جيدًا.
3) احضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10-25 دقيقة لتكوين معقد كاشف انتقال الحمض النووي الكاتيوني DNA-PEI.
3. الخلايا المحولة:
1) أثناء تكوين المركب، قم بإزالة وسط نمو الخلايا وأضف 2 مل من الوسط الكامل الطازج المسخن مسبقًا إلى كل بئر.
2) أضف 100 ميكرولتر من مركب الحمض النووي DNA-PEI-PEI مباشرة إلى الخلايا، ثم رج لوحة الثقافة واخلط بلطف.
3) قم بالزراعة في حاضنة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية و5% من ثاني أكسيد الكربون، ويمكن اكتشاف التعبير عن الجين المنقول في غضون 7 ساعات بعد التحويل. يرجى تحديد وقت الاختبار المناسب بنفسك.
4. فحص الدوران الثابت (اختياري)
بعد 24 ساعة من التحويل الجيني، تمت إعادة زراعة الخلايا في وسط نمو جديد (تم تخفيف الخلايا أكثر من 10 مرات)، وتم تحضينها طوال الليل عند 37 درجة مئوية في حاضنة 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي، تمت إضافة عقار فحص يطابق جين مقاومة التحويل الجيني. يمكن فحص المستنسخات المقاومة للأدوية في حوالي 1 إلى 2 أسابيع. خلال هذه الفترة، يجب استبدال وسط النمو الذي يحتوي على عقاقير الفحص بشكل متكرر.
جرعة النقل الجيني لأوعية زراعة الخلايا المختلفة (للمرجع فقط):
| ثقافة إناء | ركوب الأمواج. منطقة لكل بئر*(سم2) | الحمض النووي (ميكروجرام) | الانتقال الجيني الكاشف(ميكرولتر) | المجلد ل تخفيف واسطة **(ميكرولتر) | المجلد ل تصفيح واسطة |
| 96-بئر | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 ميكرولتر |
| 48 بئر | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 ميكرولتر |
| 24 بئر | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 ميكرولتر |
| 12 بئر | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1مل |
| 6 بئر | 10 | 2 | 4 | 100 | 2مل |
| قارورة 25سم² | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 مل |
| قارورة 75سم² | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 مل |
الاستشهادات والمراجع:
[1] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Molecular mechanism of agonism and inverse agonism in ghrelin receptor. Nat Commun. 2022;13(1):300. نُشر في 13 يناير 2022. doi:10.1038/s41467-022-27975-9(إذا: 14.919)
[2] Wang Y, Chen J, Gao WQ, Yang R. يعزز METTL14 تكوّن الأورام في البروستاتا عن طريق تثبيط THBS1 عبر آلية تعتمد على m6A-YTHDF2. Cell Death Discov. 2022؛8(1):143. نُشر في 30 مارس 2022. doi:10.1038/s41420-022-00939-0(إذا:5.241)
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.