وصف
أوريوباسيدين أ، المعروف أيضًا باسم AbA، أو باسيفونغين، أو بريوميسين أ، هو مضاد حيوي من نوع ببتيد الإستر الحلقي المعزول من الفطر الخيطي أوريوباسيديوم بولولانز رقم R106. يتمتع بقدرة قوية مضادة للفطريات وهو مثبط لإنزيم السيراميد الفسفري إينوزيتول AUR1. وهو سام للخميرة حتى عند التركيزات المنخفضة (0.1-0.5 ميكروجرام/مل). تشمل أنواع الفطريات الحساسة للأوريوباسيدين أ Saccharomyces cerevisiae وSchizosaccharces pombe وCandida glabrata وAspergillus nidulans وA. niger. تشمل الأنواع الفطرية الحساسة للأوريوباسيدين أ الخميرة السنية (Saccharomyces cerevisiae) وSchizosaccharomyces millet (Schizosaccharomyces pombe) وCandida glabrata (Candida glabrata) وAspergillus nest (Aspergillus nidulans) وAspergillus niger (A. niger.). آلية العمل هي أن الأوريوباسيدين أ يثبط نشاط إنزيم إينوزيتول فوسفوريل سيراميد (إينوزيتول فوسفوريل سيراميد، IPC) سينثيز، الذي يعتمد عليه نمو الفطريات، ويتداخل مع تخليق السفينجوليبيد، وبالتالي يقتل السلالة بشكل أكبر. تمت دراسة المزيد من الجينات التي تشفر إنزيم IPC synthases مثل جين AUR 1 من Saccharomyces cerevisiae وجين AURA من A. sinensis، والذي له تشابه. يؤدي كتم هذه الجينات المشفرة إلى جعل السلالات مقاومة لـ Aureobasidin A، مثل جين AUR 1-C.
يُعد أوريوباسيدين أ مناسبًا للغاية كعلامة اختيار للأدوية لفحص المستنسخات الإيجابية. كما تعد مقاومة أوريوباسيدين أ مؤشرًا مثاليًا في دراسات الخميرة الهجينة المفردة والهجينة المزدوجة. هذا المنتج عبارة عن محلول من أوريوباسيدين أ مذاب في الميثانول بتركيز 1 مجم/مل.
سمات
نقاء≥97%
الإنتاج الموحد، باستخدام نمط الإنتاج الضخم في المصنع
التطبيقات
دراسات الخميرة الهجينة الثنائية
دراسات الخميرة الهجينة
علامة اختيار صارمة لعقار الخميرة
مقاومة Aureobasidin A هي المراسل المثالي لدراسات تهجين الخميرة
تحديد
| رقم CAS. | 127785-64-2 |
| الصيغة الجزيئية | ج60ح92ن8ا11 |
| الوزن الجزيئي | 1101.42 جرام/مول |
| مظهر | محلول سائل |
| نقاء | ≥97% |
| الذوبان | المسحوق قابل للذوبان في DMSO والميثانول (0.5-10 ملغ/مل)؛ غير قابل للذوبان في الماء |
| بناء |
|
عناصر
| المكونات رقم | اسم | 60231ES03 | 60231ES08 | 60231ES10 |
| 60231 | أوريوباسيدين أ(أبا) | 1 ملغ (1 ملغ/مل) | 5×1 ملغ (1 ملغ/مل) | 10×1 ملغ (1 ملغ/مل) |
الشحن والتخزين
ال أوريوباسيدين أ(أبا) يجب تخزين المنتجات في -15درجة مئوية ~ -25درجة مئوية ل 2 سنين.
تعليمات
1. التركيز في العمل
يرجى الرجوع إلى الأدبيات ذات الصلة للتركيز المحدد، والاستكشاف والتحسين وفقًا لظروفك التجريبية الخاصة (مثل الغرض التجريبي، ونوع الخلية، وخصائص الثقافة، وما إلى ذلك).
2. تجربة الخلية (تجربة في المختبر)
يعمل أوريوباسيدين أ على إيقاف نمو خلايا الخميرة من خلال التسمم بالسيراميد والحرمان من إينوزيتول فوسفوريل سيراميدات الأساسية[1].
تم تصنيع تكرارات ثلاثية مترادفة لكل نمط CArG-box. تم استنساخ جميع شظايا الحمض النووي في ناقل Y1H pAbAi (Clontech، Mountain View، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام مواقع تقييد مناسبة. بعد ذلك، تم خطية كل بنية pAbAi مجمعة باستخدام BstbI وتحويلها إلى سلالة Saccharomyces cerevisiae Y1HGold وفقًا لدليل نظام تحويل الخميرة 2 (Clontech، Mountain View، الولايات المتحدة الأمريكية). تم فحص المستنسخات التي تحمل شظية الحمض النووي المطلوبة للتنشيط التلقائي على وسط إسقاط اليوراسيل الاصطناعي المضاف إليه Aureobasidin A بتركيز 100-900 نانوغرام/مل، كما هو محدد (Clontech، ماونتن فيو، الولايات المتحدة الأمريكية)[2].
تم تضخيم إطارات القراءة المفتوحة (ORFs) لجينات SlBES1 وربطها في بلازميد pGBKT7-GAL4BD. تم تحويل هياكل الاندماج GAL4BD-SlBES1 إلى خلايا خميرة Y2H Gold. تم استخدام SD/- -تم استخدام ألواح متوسطة التربتوفان لزراعة المحولات الخميرة.ال ألفا- تم التعرف على نشاط الغالاكتوزيداز للمتحولات بواسطة X-ألفا-gal وتم فحص التعبير عن AUR1-C بواسطة Aureobasidin A[3].
3. الحد الأدنى لتركيزات مثبطة للأوريوباسيدين لمختلف أنواع الخميرة
|
| أَضْنَى | الحد الأدنى للتركيز المثبط (ميكروغرام/مل) |
| خميرة سيريفيسياي | ATCC9763 (ثنائي الصبغيات) | 0.2-0.4 |
| SH3328 (أحادي الصيغة الصبغية) | 0.1 | |
| خميرة الساكي (ثنائية الصبغيات) | 0.1-0.2 | |
| خميرة الشوتشو (ثنائية الصبغيات) | 0.1 | |
| خميرة البيرة (ثلاثية أو رباعية الصبغيات) | 0.1 | |
| خباز'خميرة س (ثنائية الصبغيات) | 0.2-0.4 | |
| شيزو بومبي | JY-745 (أحادي الصبغيات) | 0.1 |
| الكافور الأبيض | تيم-0136(ثنائي الصيغة الصبغية) | 0.04 |
| ج. استوائييكون | تيم-0324(ثنائي الصيغة الصبغية) | 0.08 |
4. إجراءات التشغيل (لنظام تحويل الخميرة المقاوم لـ AbA)
1) أضف 0.5 مل من ثقافة الخميرة طوال الليل إلى 50 مل من وسط YPD (التركيب: 1 لتر من الوسط السائل يحتوي على 10 جم من خلاصة الخميرة، 20 جم من البولي ببتون، 20 جم من الجلوكوز-D؛ بالنسبة للوسط الصلب، أضف 2% أجار إضافي).
2) حضن عند 30درجة مئوية لمدة 6 ساعات تقريبًا، حتى يصبح OD660 1-2. عند استخدام ثنائيات الصبغيات، قم بقياس OD660 ليكون 2-4.
3) أجهزة الطرد المركزي على سرعة 1000×ج لمدة 5 دقائق.
4) أعد تعليق الحبيبات في 10 مل من المحلول أ (التركيب: 100 مليمول أسيتات الليثيوم، 10 مليمول تريس-حمض الهيدروكلوريك بدرجة حموضة 7.5، 1 مليمول EDTA)، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 درجة فهرنهايت.×ج لمدة 5 دقائق.
5) هـقم بتعليق الحبيبات في المحلول A حتى تصل قيمة OD660 إلى 150.
6) قسم 100 ميكرولتر من تعليق الخلية في أنبوب واحتضنه عند 30 درجةدرجة مئوية لمدة ساعة واحدة.
7) أضف 5 ميكروجرام من الناقل (DNA دائري أو خطي) و150 ميكروجرام من DNA الناقل (الذي تم تسخينه عند 100 درجة فهرنهايت)درجة مئوية لمدة 10 دقائق ثم تبرد بسرعة).
ملاحظة: يتطلب pAUR101 DNA خطيًا للتحويل. سيؤدي استخدام DNA الدائري إلى تقليل كفاءة التحويل أو قد يفشل حتى. يتطلب pAUR112 وpAUR123 DNA بلازميديًا كاملاً للتحويل.
8) أضف 850 ميكرولترًا من المحلول ب (التركيبة: قم بإذابة 40 جرامًا من بولي إيثيلين جلايكول 4000 في 100 مل من المحلول أ واخلط جيدًا، وقم بإعداده طازجًا قبل الاستخدام)، ثم اخلط بلطف.
9) حضن عند 30درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، ثم عند 42درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
10) ضعيها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
11) قم بالطرد المركزي بسرعة 5000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة، ثم أعد تعليق الكريات في 5 مل من وسط YPD.
12) حضن عند 30درجة مئوية لمدة 6 ساعات أو طوال الليل.
13) قم بالطرد المركزي بسرعة 5000-10000 دورة في الدقيقة، ثم أعد تعليق الكريات في 1-10 مل من 0.9% كلوريد الصوديوم.
14) ضع 100 ميكرولتر من تعليق الخلية على لوحات وسط YPD الانتقائية (التي تحتوي على تركيز معين من AbA، اعتمادًا على نوع السلالة).حضن عند 30درجة مئوية لمدة 3-4 أيام حتى اكتمال التحول.
15) اختيار المحولات الإيجابية، و/أو تحديد كفاءة التحويل (المعبر عنها بعدد المستعمرات المحولة لكل ميكروجرام من الحمض النووي البلازميدي).
وثائق:
ورقة بيانات السلامة
60231_بيانات سلامة المواد_HB220420_AR.pdf
الدليل
الأرقام
الشكل 1. مخطط نمو صفيحة الخميرة
سلالة تجريبية:GS115
كمية الاستخدام: 0.05 ميكروجرام/مل、0.1 ميكروجرام/مل、0.5 ميكروجرام/مل、1 ميكروجرام/مل
علاج: 3-5 يومس في 30درجة مئوية
الصف العلوي هو منتج yeasen، والصف السفلي هو العلامة التجارية T *.
الدفع والأمن
تتم معالجة معلومات الدفع الخاصة بك بشكل آمن. لا نقوم بتخزين تفاصيل بطاقة الائتمان ولا يمكننا الوصول إلى معلومات بطاقة الائتمان الخاصة بك.
سؤال
قد تعجبك أيضًا
التعليمات
المنتج مخصص لأغراض البحث فقط وليس مخصصًا للاستخدام العلاجي أو التشخيصي لدى البشر أو الحيوانات. المنتجات والمحتوى محميان بموجب براءات الاختراع والعلامات التجارية وحقوق الطبع والنشر المملوكة لشركة Yeasen Biotechnology. تشير رموز العلامة التجارية إلى بلد المنشأ، وليس بالضرورة التسجيل في جميع المناطق.
قد تتطلب بعض التطبيقات حقوق الملكية الفكرية الإضافية لجهات خارجية.
تلتزم شركة Yeasen بالعلوم الأخلاقية، حيث تؤمن بأن أبحاثنا يجب أن تعالج الأسئلة الحرجة مع ضمان معايير السلامة والأخلاق.